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盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴和根长的全基因组关联分析

本站小编 Free考研考试/2021-12-26
张蕊, 邓文亚, 杨柳, 王亚萍, 肖芳枝, 禾健, 卢坤. 盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴和根长的全基因组关联分析[J]. , 2017, 50(1): 15-27 https://doi.org/10.3864/j.issn.0578-1752.2017.01.002
ZHANG Rui, DENG WenYa, YANG Liu, WANG YaPing, XIAO FangZhi, HE Jian, LU Kun. Genome-Wide Association Study of Root Length and Hypocotyl Length at Germination Stage Under Saline Conditions in Brassica napus[J]. Scientia Acricultura Sinica, 2017, 50(1): 15-27 https://doi.org/10.3864/j.issn.0578-1752.2017.01.002

0 引言

【研究意义】盐害是危害农业生产的主要因素之一。作为典型的非生物胁迫,盐害会破坏作物的离子平衡,引起离子毒性、高渗和氧化胁迫等,从而影响种子萌发和幼苗生长,导致产量和品质下降[1]。诸多研究表明,甘蓝型油菜耐盐能力较强,因此,挖掘油菜耐盐调控位点和基因,培育耐盐油菜品种,以开发利用盐碱地,对缓解中国植物油供应压力、维护国家食物安全具有重要意义[2]。【前人研究进展】目前,油菜耐盐性的遗传和分子机制报道较少[3-4]。龙卫华等[5]对芥菜型油菜（Brassica juncea）、白菜型油菜（Brassica rapa）和甘蓝型油菜（B. napus）共203份种质资源进行盐胁迫比较研究,筛选出1份白菜型油菜和2份甘蓝型油菜材料用于培育耐盐油菜品种。刘国红等[2]发现盐胁迫对油菜光合作用的抑制主要来自气孔因素,但在长期高盐条件下,非气孔因素对光合抑制的贡献也很明显。在遗传定位方面,荐红举等[6]利用高世代重组自交系群体和SNP遗传图谱定位到11个盐胁迫下油菜种子发芽率相关的QTL。YONG等[7]对85个油菜自交系开展了基于多样性芯片技术（diversity arrays technology,DArT）和DArTseq基因型分析的研究,利用GWAS检测到62个耐盐性、地上部生物量及离子平衡相关的QTL,并鉴定出可能的候选基因TSN1。【本研究切入点】尽管甘蓝型油菜耐盐相关QTL有少量报道,但盐胁迫下油菜发芽期根长和下胚轴长度的GWAS研究尚未见报道。【拟解决的关键问题】为解析控制油菜发芽期根和下胚轴发育及耐盐性的关键位点和候选基因,本研究采用GWAS鉴定目标性状显著关联SNP,结合转录组分析,筛选连锁不平衡（linkage disequilibrium,LD）区间内的盐胁迫诱导差异表达基因,初步确定控制性状变异的候选基因。以实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）分析候选基因的组织特异性和盐胁迫诱导表达模式,提高候选基因筛选的准确性。本研究将为分子标记辅助选择和基因工程改良等方式培育耐盐油菜新品种提供理论依据和新的基因资源。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试材料共317份（电子附表1）,均为国内外广泛收集的代表性油菜资源,其中,国内材料283份,主要来自重庆、湖北和湖南等地,国外材料34份,主要来自德国和加拿大。所有材料均由重庆市油菜工程技术研究中心保存。2015年收获的当年自交种用于本研究。
Supplementary Table 1
附表1
附表1本研究所用的植物材料
Supplementary Table 1Plant materials used in this study
材料编号 Accession number材料名 Accession name国家,地区 Country, region亚群 Sub-population
B1Ganyou5中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B2Nonglin42中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B4Huaiyou6中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B5Yan81-2中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B628887中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B7Qianyou4中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B8Qianyou331中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B10Niuerduo中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B14SWU43中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B16SWU45中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B17SWU46中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B18SWU47中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B19SWU48中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B20SWU52中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B21SWU53中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B23SWU59中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B24SWU65中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B25SWU82中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B26SWU83中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B27SWU92中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B28SWU101中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B29SWU106中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B30SWU108中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B31Chuanyou20中国四川 Sichuan, ChinaP1
B33CY12NY-7中国四川 Sichuan, ChinaP1
B35CY12Q8-7中国四川 Sichuan, ChinaP1
B36CY12QSZ06中国四川 Sichuan, ChinaP1
B38CY12Q95108中国四川 Sichuan, ChinaP1
B39CY12Q21535-N3中国四川 Sichuan, ChinaP1
B40CY12PXW-4中国四川 Sichuan, ChinaP1
B41CY12PXW-6中国四川 Sichuan, ChinaP1
B43CY13PXW-17中国四川 Sichuan, ChinaP1
B44CY14PXW-18中国四川 Sichuan, ChinaP1
B45CY15PXW-31中国四川 Sichuan, ChinaP1
B46CY16PXW-35中国四川 Sichuan, ChinaP1
B47CY17PXW-58中国四川 Sichuan, ChinaP1
B49CY19PXW-65中国四川 Sichuan, ChinaP1
B52CY12GJ-1中国四川 Sichuan, ChinaP1
B53wx1025中国湖南 Hunan, ChinaP1
B54wx10213中国湖南 Hunan, ChinaP1
B55wx10296中国湖南 Hunan, ChinaP1
B56wx10315中国湖南 Hunan, ChinaP1
B5710-1043中国湖南 Hunan, ChinaP1
B6010-1070中国湖南 Hunan, ChinaP1
B6110-804中国湖南 Hunan, ChinaP1
B6210-1358中国湖南 Hunan, ChinaP1
B64Xiangyou13中国湖南 Hunan, ChinaP1
B65Xiangyou15中国湖南 Hunan, ChinaP1
B66Xiangyou11中国湖南 Hunan, ChinaP1
B67740中国湖南 Hunan, ChinaP1
B69613中国湖南 Hunan, ChinaP1
B70783中国湖南 Hunan, ChinaP1
B71782中国湖南 Hunan, ChinaP1
B72YB3中国湖南 Hunan, ChinaP1
B731360中国湖南 Hunan, ChinaP1
B75WX10329中国湖南 Hunan, ChinaP1
B76santana中国湖南 Hunan, ChinaP1
B771281中国湖南 Hunan, ChinaP1
B791368中国湖南 Hunan, ChinaP1
B801322中国湖南 Hunan, ChinaP1
B811252中国湖南 Hunan, ChinaP1
B821321中国湖南 Hunan, ChinaP1
B8407094中国湖北 Hubei, ChinaP1
B8507016中国湖北 Hubei, ChinaP1
B869F087中国湖北 Hubei, ChinaP1
B8797096中国湖北 Hubei, ChinaP1
B8897097中国湖北 Hubei, ChinaP1
B9007191中国湖北 Hubei, ChinaP1
B9107037中国湖北 Hubei, ChinaP1
B92RQ011中国湖北 Hubei, ChinaP1
B9796063中国湖北 Hubei, ChinaP1
B9801111中国湖北 Hubei, ChinaP1
B9901570中国湖北 Hubei, ChinaP1
B10202354中国湖北 Hubei, ChinaP1
B10593205中国湖北 Hubei, ChinaP1
B10693210中国湖北 Hubei, ChinaP1
B107Nca中国湖北 Hubei, ChinaP1
B108Zhongshuang4中国湖北 Hubei, ChinaP1
B109Zhongshuang9中国湖北 Hubei, ChinaP1
B110Zhongshuang11中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1112011-6200中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1152012-3448中国湖北 Hubei, ChinaP2
B1162012-3546中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1182012-5086中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1192012-5113中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1202012-8327中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1212012-8355中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1222012-8380中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1242012-9323中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1272012-9478中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1282012-9542中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1292012-K8053中国湖北 Hubei, ChinaP1
B130R2中国湖北 Hubei, ChinaP1
B131Xiwang106中国湖北 Hubei, ChinaP1
B132Yangguang198中国湖北 Hubei, ChinaP1
B133Yangguang2009中国湖北 Hubei, ChinaP1
B134Zhongshuang10中国湖北 Hubei, ChinaP1
B135Zhongshuang12中国湖北 Hubei, ChinaP1
B136Zhongshuang4中国湖北 Hubei, ChinaP1
B137Zhongshuang6中国湖北 Hubei, ChinaP1
B138Zhongshuang7中国湖北 Hubei, ChinaP1
B139Zhongyou589中国湖北 Hubei, ChinaP1
B140Zhongyou821中国湖北 Hubei, ChinaP1
B141Huayou2中国湖北 Hubei, ChinaP1
B142Major中国湖北 Hubei, ChinaP1
B143Huashuang2中国湖北 Hubei, ChinaP1
B144Aurora中国湖北 Hubei, ChinaP1
B145Huayou13中国湖北 Hubei, ChinaP1
B146Rucabo中国湖北 Hubei, ChinaP2
B147Huayou3中国湖北 Hubei, ChinaP1
B149Ningyou1中国湖北 Hubei, ChinaP1
B15111-9-700中国湖北 Hubei, ChinaP1
B15311-9-702中国湖北 Hubei, ChinaP1
B15411-9-703中国湖北 Hubei, ChinaP1
B15511-9-704中国湖北 Hubei, ChinaP1
B15611-9-705中国湖北 Hubei, ChinaP1
B15711-9-706中国湖北 Hubei, ChinaP1
B15811-9-707中国湖北 Hubei, ChinaP1
B15911-P63-5中国湖北 Hubei, ChinaP1
B16011-P63-8中国湖北 Hubei, ChinaP1
B16309-P64-1中国湖北 Hubei, ChinaP1
B16410-Cong23中国湖北 Hubei, ChinaP1
B16510-Cong24中国湖北 Hubei, ChinaP1
B16610-Cong25中国湖北 Hubei, ChinaP1
B16710-Cong29中国湖北 Hubei, ChinaP1
B16810-Cong32中国湖北 Hubei, ChinaP1
B16910-Cong33中国湖北 Hubei, ChinaP1
B17010-Cong34中国湖北 Hubei, ChinaP1
B17110-Jiangpeng2中国湖北 Hubei, ChinaP1
B17210-Jiangpeng3中国湖北 Hubei, ChinaP1
B17311-7-103中国湖北 Hubei, ChinaP1
B17411-7-117中国湖北 Hubei, ChinaP1
B17511-7-125中国湖北 Hubei, ChinaP1
B1787-7766-74中国湖北 Hubei, ChinaP1
B18064Peng-10中国湖北 Hubei, ChinaP1
B181Shengguang77中国湖北 Hubei, ChinaP1
B182Jiayu17中国湖北 Hubei, ChinaP1
B183Jiayu25中国湖北 Hubei, ChinaP1
B184Jiayu16中国湖北 Hubei, ChinaP1
B185Jiayu31中国湖北 Hubei, ChinaP1
B186Huashuang5中国湖北 Hubei, ChinaP1
B187Huashuang4中国湖北 Hubei, ChinaP1
B188Jia972中国湖北 Hubei, ChinaP1
B189Huashuang128中国湖北 Hubei, ChinaP1
B190Jia904中国湖北 Hubei, ChinaP1
B192JiaPF190中国湖北 Hubei, ChinaP1
B195Jia951中国湖北 Hubei, ChinaP1
B196Jia917中国湖北 Hubei, ChinaP1
B197Jia923中国湖北 Hubei, ChinaP1
B198Jia931中国湖北 Hubei, ChinaP1
B200Jia963中国湖北 Hubei, ChinaP2
B201Huyou17中国上海 Shanghai, ChinaP1
B202Huyou15中国上海 Shanghai, ChinaP1
B204Ningyou18中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B206Ningyou14中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B209Shilifeng中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B211Yangyou5中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B212Zhenyou3中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B213Hongyou3中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B215Zheyou18中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B216Zheshuang72中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B217Zheshuang8中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B218Zheyou758中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B219Huyou14中国上海 Shanghai, ChinaP1
B220Huyou18中国上海 Shanghai, ChinaP1
B221Huyou19中国上海 Shanghai, ChinaP1
B222Zheyou19中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B223Zheyou21中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B224Zheshuang6中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B226Wanyou16中国安徽 Anhui, ChinaP1
B227Wanyou20中国安徽 Anhui, ChinaP1
B228Wanyou29中国安徽 Anhui, ChinaP1
B241Weijie加拿大 CanadaP2
B243Zhizun加拿大 CanadaP1
B244Haisheng加拿大 CanadaP2
B245D2丹麦 DenmarkP2
B262P310中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B263P312中国陕西 Shanxi, ChinaP2
B264P668中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B265P685中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B266A117中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B267A172中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B268B250中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B269B265中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B271B285中国陕西 Shanxi, ChinaP2
B273GY270中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B274GY282中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B275GY284中国陕西 Shanxi, ChinaP1
B279B414中国新疆 Xinjiang, ChinaP1
B29111-P30中国湖北 Hubei, ChinaP1
B30303LF1中国甘肃 Gansu, ChinaP2
B313SWU01中国湖北 Hubei, ChinaP1
B326Nonglin43中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B327SWU25中国西藏 Tibet, ChinaP1
B328Youyan2中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B330SWU41中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B333SWU57中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B334SWU60中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B337SWU63中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B339SWU66中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B340SWU67中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B341SWU68中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B342SWU69中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B343SWU70中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B345SWU74中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B346SWU75中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B349SWU80中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B350SWU81中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B351SWU84中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B354SWU88中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B357SWU93中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B358SWU94中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B360SWU96中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B361SWU99中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B362SWU100中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B363SWU102中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B365SWU104中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B366SWU105中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B367SWU107中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B368SWU110中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B369SWU111中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B370SWU112中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B371SWU113中国重庆 Chongqing, ChinaP1
B373Zhongshuang10中国湖北 Hubei, ChinaP1
B375Zhongshuang7中国湖北 Hubei, ChinaP1
B376Zhongshuang12中国湖北 Hubei, ChinaP1
B377Zhongyou589中国湖北 Hubei, ChinaP1
B378Fuyou4中国湖北 Hubei, ChinaP1
B380Zhen2609中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B381HX0352中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B382Yangguang2009中国湖北 Hubei, ChinaP1
B383Huyou21中国上海 Shanghai, ChinaP1
B384Zheshuang3中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B385Zheyou21中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B386Wanyou20中国安徽 Anhui, ChinaP1
B387Wanyou12中国安徽 Anhui, ChinaP1
B389Hongyou3中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B390Zhenyou5中国湖北 Hubei, ChinaP1
B391Yangyou4中国湖北 Hubei, ChinaP1
B392Huyou15中国上海 Shanghai, ChinaP1
B393Huyou16中国上海 Shanghai, ChinaP1
B395Huyou18中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B396Zheshuang72中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B397Zheshuang8中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B398Zheyou50中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B399Suyou1中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B400Zhongshuang4中国湖北 Hubei, ChinaP1
B401Zhongshuang11中国湖北 Hubei, ChinaP1
B402Yangguang198中国湖北 Hubei, ChinaP1
B403Huahang901中国湖北 Hubei, ChinaP1
B404YangJ6711中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B406Yangjian8中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B407Xiwang106中国湖北 Hubei, ChinaP1
B408Zheyou17中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B409Zhongshuang5中国湖北 Hubei, ChinaP1
B410Zhongyou821中国湖北 Hubei, ChinaP1
B411Qinyou1中国湖北 Hubei, ChinaP1
B412Weilong88中国湖北 Hubei, ChinaP1
B414Qinyou5中国湖北 Hubei, ChinaP1
B415Suyou4中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B416Fengyou9中国湖北 Hubei, ChinaP1
B424Ningyou10中国湖北 Hubei, ChinaP1
B425Helios中国湖北 Hubei, ChinaP1
B427Mian96-203中国青海 Qinghai, ChinaP1
B428Qing662A中国湖北 Hubei, ChinaP1
B429699中国湖北 Hubei, ChinaP1
B430Canada2中国湖北 Hubei, ChinaP1
B432Zhongshuang9中国湖北 Hubei, ChinaP1
B433WH-12中国湖北 Hubei, ChinaP1
B435WH-17中国湖北 Hubei, ChinaP1
B436WH-19中国湖北 Hubei, ChinaP1
B437WH-20中国湖北 Hubei, ChinaP1
B438WH-23中国湖北 Hubei, ChinaP1
B439WH-24中国湖北 Hubei, ChinaP1
B440WH-25中国湖北 Hubei, ChinaP1
B442WH-27中国湖北 Hubei, ChinaP1
B443WH-28中国湖北 Hubei, ChinaP1
B445WH-30中国湖北 Hubei, ChinaP1
B446WH-31中国湖北 Hubei, ChinaP1
B447WH-33中国湖北 Hubei, ChinaP1
B451WH-42中国湖北 Hubei, ChinaP2
B452WH-43中国湖北 Hubei, ChinaP2
B453WH-45中国湖北 Hubei, ChinaP2
B454WH-49中国湖北 Hubei, ChinaP1
B455WH-50中国湖北 Hubei, ChinaP2
B458WH-57中国湖北 Hubei, ChinaP1
B459WH-58中国湖北 Hubei, ChinaP1
B460WH-59中国湖北 Hubei, ChinaP1
B466WH-83中国湖北 Hubei, ChinaP1
B475NY7中国湖北 Hubei, ChinaP1
B479Cubs root中国湖北 Hubei, ChinaP1
B482Shengli中国湖北 Hubei, ChinaP1
B486Daichousen中国湖北 Hubei, ChinaP1
B487comet中国湖北 Hubei, ChinaP2
B488Niklas中国湖北 Hubei, ChinaP2
B491WESBROOK中国湖北 Hubei, ChinaP2
B492Suigenshu中国湖北 Hubei, ChinaP1
B493Huayou4中国湖北 Hubei, ChinaP1
B494Y1中国上海 Shanghai, ChinaP1
B499Shaoyeqing中国上海 Shanghai, ChinaP1
B501Hujizao中国上海 Shanghai, ChinaP1
B504Fengding 240中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B506Dahuaqiu中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B508Ningyou 10中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B509Ningyou 8中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B510Ningyou 6中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B511Duoyou 1中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B513Huaiyou 12中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B514Peixuan 170中国江苏 Jiangsu, ChinaP1
B516Guangde 8104中国安徽 Anhui, ChinaP1
B517Dangyouzao 1中国安徽 Anhui, ChinaP1
B518Guangde 761中国安徽 Anhui, ChinaP1
B521Chu 107中国安徽 Anhui, ChinaP1
B526Jie 65-1中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B527Shenhuang1中国上海 Shanghai, ChinaP1
B528Zheyou 601中国浙江 Zhejiang, ChinaP1
B529Sangao rapeseed中国浙江 Zhejiang, ChinaP1


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1.2 胁迫处理和性状调查

试验于2015年在西南大学油菜培养间进行,整个试验重复2次,生长条件为昼夜温度25℃,光照/黑暗时间16 h/8 h,光照强度5 000 lx。从供试材料中挑选大小均匀、健康饱满的种子各120粒,将种子浸泡24 h后分为2份,分别播种在100 mmol·L-1 NaCl和对照蒸馏水充分浸润的蛭石上,覆盖保鲜膜。播种5 d后,选取长势一致的10株幼苗测定根长（root length,RL）和下胚轴长（hypocotyl length,HL）,正常萌发条件下的RL和HL以RLW和HLW表示,盐胁迫下萌发的RL和HL以RLN和HLN表示。两性状差值（RLD和HLD）为对照与盐胁迫环境测定值之差。以SPSS 20.0（美国IBM公司）软件对表型数据进行描述性统计分析和Kolmogorov-Smirnov正态分布检验。利用R脚本（www.eXtension.org/pages/61006）对2次重复试验的性状值进行基于线性模型的最佳线性无偏预测。

1.3 基因型分析及SNP标记定位

参考QU等[8]的方法,利用芸薹属60K SNP芯片进行SNP检测,去除最小基因型频率（minor allele frequency,MAF）低于0.05和SNP得率（call frequency）小于80%的标记。为确定SNP在染色体上的位置,利用探针序列与基因组进行BLASTN比对[9-10],E-value设为1e-5。去除Bit-Score相同的SNP,最终获得31 468个在基因组上具有唯一位置的高质量SNP用于后续分析。

1.4 群体结构分析与全基因组关联分析

在TASSEL 5[11]中进行主成分分析（PCA矩阵）,计算亲缘关系矩阵（K）。群体结构Q值矩阵采用QU等[8]的结果。以K、Q和PCA矩阵为协变量,采用基于一般线性模型（general linear model,GLM）的GLM+P和GLM+Q模型及混合线性模型（mixed linear model,MLM）的MLM+K和MLM+P+K和MLM+Q+K共5种模型进行GWAS。显著关联SNP宽松阈值设为1/31468=3.18e-5,严谨阈值设为0.05/31468=1.59e-6。根据所有SNP的-log10（P）观察值和期望值,以ggplot2[12]绘制Quantile-Quantile散点图,确定GWAS最佳模型。基于最优模型的关联分析结果,利用qqman[13]绘制曼哈顿图。

1.5 LD区间确定及候选基因分析

以Haploview 4.2[14]计算显著关联SNP所在染色体的LD,HW阈值（Hardy Weinberg P-value cutoff）设定为0.001;非缺失标记的比例为75%,MAF设定为0.05;单倍型块（haplotype block）分析采用Four Gamete Rule算法,第4配子频率（4th gamete frequency）>0.1。将显著关联SNP所在单倍型块作为候选基因所在LD区间。若显著关联SNP不属于任何单倍型块,则以SNP标记上下游各100 kb侧翼序列区间作为LD区间。候选基因筛选利用YONG等[15]的转录组数据,将LD区间内的盐胁迫诱导表达基因作为候选基因。主要分析流程为利用STAR 2.4.2a将reads比对至油菜参考基因组[16],采用Cufflinks中的cuffdiff筛选差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）[17],筛选标准为差异表达倍数大于2,错误发现率（false discovery rate,FDR）q-value小于0.05。

1.6 候选基因组织特异及诱导表达模式

为分析候选基因组织特异性及盐胁迫诱导表达模式,于2015年盛花期取常规品种中双11的根、茎、成熟叶片和蕾,灌浆期取花后7、14、21、30和40 d种子和角果皮。按照1.2的方法进行砂培,并分别取正常和盐胁迫处理72 h的根和下胚轴。总RNA提取参照卢坤等[18]的方法。cDNA模板采用PrimeScript RT reagent Kit（宝生生物工程有限公司,大连）合成。利用SYBR Premix Ex Taq（宝生生物工程有限公司,大连）在CFX96定量PCR系统（美国Bio-Rad公司）上按照MIQE国际化标准进行qRT-PCR[19],内参为BnaACTIN7和BnaUBC21[20]。引物采用Geneious Pro 8.1.5设计（表1）。为保证扩增片段特异性,所有引物与同源基因至少相差2—3个碱基。
Table 1
表1
表1本研究采用的qRT-PCR鉴定引物
Table 1qRT-PCR primers used in this study
基因名
Gene name		基因编号
Gene ID		引物序列
Sequence of primer (5′-3′)		扩增长度
Amplification length (bp)
BnaSRO1BnaC04g44420DF: ATATCGCGAGAGGGATTCTCGAAG
R: GGTTCCATTTTCACAGCAGTGTGTG		116
BnaPAGR2BnaA05g11130DF: ATACTCTCTTTAGAACAAGATCATTCTGGCCT
R: CGAAGAGCGCCGCCTCCTAAAT		182
BnaNPH3BnaA06g35230DF: GGAATCATCAGAAAGTGTATAGATTCTATAGTAG
R: GATAATACAGCGGAATAAGTCCAAGTCGA		183
BnaMYB124BnaA06g09160DF: GGCAACCTGATCTCCATGATTCAC
R: CCCGAGGTGGGCATATTCTCTT		196
BnaSAM-MtaseBnaA07g03510DF: GGAATCTCAGCAAAATCCGGACAAT
R: CTGTCTCGAGGAAGAACACGACTA		165
BnaBIN2BnaC03g62810DF: GCTTCAGCTGATGCGCGTCA
R: GACAAGAGGCATTCTCTGGTTGG		175
BnaUMAMIT11BnaC03g22990DF: GGAAAGCACGTAGACGATATCGG
R: GATTCCTTCTCAGCTGCCTGAACT		167
BnaEXPA7BnaA08g24690DF: CATGGCCGTGAAAGGTAGTCG
R: GCACTACTCTTGTAAGTCATGCCAG		195
BnaRPT3BnaC03g49850DF: AGCCCCTTACCTCGCCG
R: GTTGGCTGCTCTGAGGAGGC		136
BnaEF-handBnaA06g37340DF: GTGAGGATCTGTCGGAGTTTATCC
R: CATGGATCGTTAGGAGGAGGC		169
BnaF3HBnaC08g22640DF: CTCGAGAAAGAGGCACTCACCA
R: CTCGTGTGGCTTGTAAACCACCAA		175
BnaUBC21BnaA06g27860D/ BnaA09g04490DF: CCTCTGCAGCCTCCTCAAGT
R: CATATCTCCCCTGTCTTGAAATGC		77
BnaACTIN7BnaA03g55890D/
BnaC02g00690D/
BnaA10g22340D		F: CCCTGGAATTGCTGACCGTA
R: TGGAAAGTGCTGAGGGATGC		141


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2 结果

2.1 油菜萌发相关性状表型数据

正常和盐胁迫条件下,幼苗平均根长分别为4.92和3.94 cm,变异系数为16.86%和42.48%（表2）,胁迫处理前后根长差值平均为1.01 cm,变异系数为199.57%。正常萌发条件下,下胚轴平均长4.48 cm,变异系数为25.75%;盐胁迫处理后降至3.03 cm,变异系数为31.41%;胁迫处理前后下胚轴长差值平均为1.49 cm,变异系数为67.07%。结果表明,不同材料间的萌发性状差异较大,为GWAS分析奠定基础。
Table 2
表2
表2盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期幼苗根长和下胚轴长的统计分析
Table 2Statistical analysis of RL and HL of B. napus seedlings at germination stage under salt stress treatment
表型
Phenotype		材料数
Number of accessions		均值±标准差
Mean±SD		最小值
Minimum		中位数
Median		最大值
Maximum		Kolmogorov-Smirnov相关系数
Correlation coefficient
ZP值P-value
RLW12954.928±0.8192.6924.9378.0120.7220.6740.879**
RLW22814.916±0.8032.5724.8418.0250.6760.751
RLN12953.942±1.6690.4834.5637.0582.8740.0000.936**
RLN22813.936±1.6930.4814.4997.1632.8340.000
RLD12951.016±2.014-3.4460.2386.1502.7460.0000.926**
RLD22811.010±2.064-3.4690.4116.5312.3890.000
HLW12954.463±1.1361.5924.4637.1880.9190.3670.925**
HLW22814.500±1.1961.7254.5087.6430.5480.925
HLN12953.005±0.9260.4753.0255.3000.6160.8430.915**
HLN22813.059±0.9900.4523.0965.8350.6030.860
HLD12951.495±0.973-0.9131.4634.1380.8890.4080.934**
HLD22811.482±1.063-1.0891.4584.2010.7030.705

RLW和HLW：正常萌发的根长和下胚轴长;RLN和HLW：NaCl处理条件的根长和下胚轴长;RLD和HLD：处理前后根长和下胚轴长的差值;“1”和“2”表示同一性状的第1和第2次试验;**表示在0.01水平差异显著RLW and HLW: RL and HL under normal germination conditions; RLN and HLW: RL and HL under salt stress germination conditions; RLD and HLD: Difference between trait value under normal condition and salt stress condition; “1” and “2” Represent experiment replicate 1 and replicate 2 of the same trait; ** Indicates significance level at 0.01
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正态分布检验表明（表2）,RLW、HLW、HLN和HLD的P-value大于0.05,符合正态分布。RLN和RLD的P-value为0,但其频次分布呈单峰偏态或双峰分布,表现为主基因+多基因的数量遗传特征（图1）。上述结果表明,本研究目标性状均为数量性状,受多基因调控。
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图1盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期幼苗根长和下胚轴长的频次分布
-->Fig. 1Frequency distribution of HL and RL of B. napus seedlings at germination stage under salt stress treatment
-->

2.2 关联分析模型选择

GWAS最优模型分析表明,GLM模型控制假阳性的能力较差,与MLM模型相比,GLM+P和GLM+Q模型均严重偏离期望值。3种MLM模型对根长的解析能力差别不大,但在下胚轴长的GWAS分析中,MLM+P+K模型检测到的P-value较其他模型更接近期望值,能更好地控制假阳性（图2）,因此,采用MLM+P+K模型进行GWAS分析。
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图2不同性状5种模型比较的QQ图
-->Fig. 2Quantile-quantile plots of estimated -log10(p) from association analysis using five methods for different traits
-->

2.3 萌发性状的全基因组关联分析

利用MLM+P+K模型对目标性状进行GWAS分析。由于HLW和HLN检出位点较多,筛选显著关联SNP时采用严谨阈值,其他4个性状采用宽松阈值（表3和图3）。结果表明,共检测到45个显著关联SNP,其中独立SNP 36个,重复检测SNP 7个。与HL显著关联SNP共40个,其中HLW和HLN存在17和21个显著相关SNP,C03染色体紧密相邻的2个SNP与HLD显著关联。与RLW、RLN和RLD显著关联的SNP各有3个、1个和1个。HL和RL的单一SNP表型贡献率分别为9.12%—14.46%和7.67%—8.93%。
Table 3
表3
表3盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期幼苗下胚轴长和根长的的显著关联SNPs
Table 3Significant associated SNPs of HL and RL of B. napus seedlings at germination stage under salt stress treatment
性状
Trait		SNP探针号
SNP probe number		染色体
Chr.		位置
Position (bp)		等位基因
Allele		最小等位基因频率
MAF		P值
P-value		贡献率
R2
HLWrs37979A023131494C/T0.3121.57E-0712.638
HLNrs6186A0319247585A/G0.3251.11E-0713.498
HLNrs9466A041752487A/G0.1281.63E-0713.174
HLNrs12473A056205280A/G0.3436.86E-0711.976
HLWrs12473A056205280A/G0.3436.07E-0813.400
HLWrs11476A0518651193G/T0.3394.71E-0711.761
HLNrs14494A064964207C/T0.4351.92E-0713.038
HLWrs14494A064964207C/T0.4351.64E-0814.458
HLWrs14751A066091946A/G0.2701.01E-0611.159
HLWrs13546A0615512773C/T0.4926.13E-0711.552
HLNrs14037A0623444533A/C0.4102.65E-0712.769
HLWrs14037A0623444533A/C0.4101.53E-0610.825
HLNrs14147A0624366028G/A0.4355.21E-0814.136
HLNrs22322A073477622A/G0.4343.56E-0712.521
HLWrs22322A073477622A/G0.4348.48E-0711.295
HLNrs15434A0714975988T/C0.4993.57E-0712.521
RLWrs16139A0719310174C/T0.1611.45E-058.932
HLNrs16427A0722517611A/G0.2961.03E-0611.641
HLNrs18707A082513455G/A0.4395.84E-0814.039
HLNrs18038A0813575343A/G0.3919.94E-0711.668
HLNrs18442A0817007108T/C0.2601.04E-0611.634
HLWrs18448A0817026237A/C0.2804.30E-0711.833
HLWrs8570A104047120T/C0.4691.11E-0611.078
HLNrs23615A109082874T/C0.2711.54E-0611.308
HLWrs48171C0130305788T/C0.2914.53E-0711.792
HLNrs38255C0242483650C/T0.4731.13E-0713.482
HLNrs27904C0312839150G/T0.2971.47E-0611.343
HLWrs27904C0312839150G/T0.2971.71E-0712.570
HLDrs40823C0334607618G/A0.0912.59E-059.148
HLDrs40822C0334607739T/C0.1852.67E-059.124
HLWrs38161C0337040348T/C0.3877.31E-0711.412
HLWrs29836C0351969206T/C0.2631.46E-0712.697
HLNrs24406C0352357539A/C0.2541.08E-0611.597
HLWrs24406C0352357539A/C0.2542.61E-0814.081
HLNrs39277C049129425A/C0.3111.91E-0713.043
HLNrs8970C0444583867G/A0.2931.53E-0610.130
HLWrs8970C0444583867G/A0.2934.88E-0812.345
RLDrs8970C0444583867G/A0.2933.47E-057.674
RLWrs8970C0444583867G/A0.2931.01E-058.160
HLNrs47181C054305731A/G0.3691.41E-0713.297
HLWrs35157C0535242768C/A0.2551.51E-069.711
HLNrs37430C068299084A/C0.2436.14E-0712.069
RLNrs35083C0825295395G/A0.3643.62E-058.594
HLNrs32417C0835812498G/A0.3609.13E-0711.739
RLWrs39358C0915755706A/C0.4151.68E-058.818


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图3盐胁迫下甘蓝型油菜发芽期下胚轴长和根长全基因组关联分析的曼哈顿图
-->Fig. 3Manhattan plots of GWAS for HL and RL of B. napus seedlings at germination stage under salt stress treatment
-->

重复检测的显著相关SNP中,6个为HLW和HLN间的重复,位于A05、A06、A07和C03染色体,其很可能与控制下胚轴发育的基因紧密连锁。A08染色体上分别与HLN和HLW显著关联的rs18442和rs18448为相邻SNP,其可能同时与HLN和HLW紧密连锁。值得注意的是C04染色体的rs8970,其同时与HLW、HLN、RLW和RLD 4个性状显著关联,表型贡献率为7.67%—12.35%,是唯一在HL和RL间重复检测到的显著关联SNP。

2.4 盐胁迫下油菜幼苗叶片和根部差异表达基因分析

转录组分析表明,盐胁迫处理12 h后幼叶和根部有大量基因诱导表达,其中上调表达基因分别为1 304和1 334个,下调表达基因为220和336个。在叶片和根部同时上调和下调表达的基因分别为202和12个,而在叶片和根部特异上调表达的基因分别为1 125和1 097个。

2.5 LD区间内候选基因的筛选

利用Haploview 4.2[14]分析各性状贡献率最高或性状间重复检测到的显著关联SNP所在LD区块。结果表明,11个重要的显著关联SNP中有6个位于LD区块中,长度分别为10—442 kb（表4）。GWAS与差异表达基因比较分析发现,在11个LD区间的447个基因中有15个受盐胁迫诱导表达,但无显著关联SNP位于这些基因内。此外,分析与HLW和HLN相关的6个LD区段时,重点关注苗期发育调控基因。剩余区段重点选择与非生物胁迫相关基因。最终初步筛选的候选基因中BnaSRO1与盐胁迫和发育调控相关,BnaPAGR2、BnaNPH3、BnaMYB124、BnaSAM-Mtase、BnaBIN2、BnaUMAMIT11和BnaEXPA7与发芽阶段的发育过程有关,BnaRPT3、BnaEF-hand和BnaF3H可能与油菜发芽期的盐胁迫适应性相关。
Table 4
表4
表4显著关联标记所在LD区间及候选基因
Table 4LD intervals and candidate genes of significant association markers
关联性状
Associated trait		SNP探针
SNP probe		染色体
Chr.		LD区间
LD interval (kb)		单倍型块大小
Haplotype block size (kb)		候选基因
Candidate genes		对应拟南芥基因
Corresponding Arabidopsis genes
HLN、HLW、RLD、RLWrs8970C0444439943—44796243356BnaSRO1AT2G35510
HLW、HLNrs12473A056105280—6305280BnaPAGR2AT2G31865
HLW、HLNrs14037A0623213061—23444533231BnaNPH3AT5G47800
HLW、HLNrs14494A064864207—5064207BnaMYB124AT1G14350
HLW、HLNrs22322A073040896—3477622436BnaSAM-MtaseAT3G44840
HLW、HLNrs24406C0351969206—52357539388BnaBIN2AT4G18710
HLW、HLNrs27904C0312739150—12939150BnaUMAMIT11AT2G40900
HLW、HLNrs18442/rs18448A0817007108—17449913442BnaEXPA7AT1G12560
HLDrs40822/rs40823C0334507618—34707739BnaRPT3AT5G64330
HLNrs14147A0624355445—2436602810BnaEF-handAT4G38810
RLNrs35083C0825195395—25395395BnaF3HAT3G51240


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2.6 候选基因的组织特异和诱导表达模式

qRT-PCR检测结果表明（图4）,11个基因均在萌发后72 h的根和下胚轴中有不同程度表达, BnaPAGR2、BnaEF-hand、BnaSAM-Mtase和BnaEXPA7在萌发后72 h根的表达量高于下胚轴,而BnaMYB124、BnaRPT3、BnaBIN2和BnaF3H则刚好相反。盐胁迫处理后,BnaPAGR2、BnaSAM-Mtase、BnaRPT3、BnaBIN2、BnaSRO1和BnaF3H在根部显著上调表达,BnaEF-hand、BnaEXPA7、BnaUMAMIT11、BnaRPT3和BnaSRO1在下胚轴中显著上调表达。此外,BnaUMAMIT11、BnaPAGR2和BnaEXPA7在萌发的根和下胚轴中特异表达,表明其可能与油菜萌发阶段根和下胚轴的发育调控有关。BnaRPT3、BnaBIN2和BnaMYB124虽然呈组成型表达,但在下胚轴中表达量最高。BnaSAM-Mtase在萌发阶段的根和花后40 d种子中表达量较高,说明该基因同时参与种子成熟及萌发。BnaEF-hand、BnaSRO1和BnaF3H在除萌发阶段的根和下胚轴外的其他组织器官中也有较高的转录水平,表明其除了在萌发阶段发挥功能以外,还参与油菜叶片、蕾、种子和角果皮的发育调控。
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图4荧光定量PCR检测11个候选基因的表达模式A：BnaPAGR2、BnaMYB124和BnaNPH3的表达模式;B：BnaEF-hand、BnaSAM-Mtase和BnaEXPA7的表达模式;C：BnaUMAMIT11、BnaRPT3和BnaBIN2的表达模式;D：BnaSRO1和BnaF3H的表达模式;Ro72h：发芽72 h的根;NRo72h：盐胁迫下发芽72 h的根;Hy72h：发芽72 h的下胚轴;NHy72h：盐胁迫下发芽72 h的下胚轴;Ro：花期的根;St：花期的茎;Le：花期成熟叶片;Bu：蕾;Se7d：花后7 d种子;Se21d：花后21 d种子;Se40d：花后40 d种子;SP7d：花后7 d荚果皮;SP21d：花后21 d荚果皮;SP40d：花后40 d荚果皮。误差线表示平均值的标准差（n=3）
-->Fig. 4Expression patterns of 11 candidate genes by qRT-PCRA: Expression patterns of BnaPAGR2, BnaMYB124 and BnaNPH3; B: Expression patterns of BnaEF-hand, BnaSAM-Mtase and BnaEXPA7; C: Expression patterns of BnaUMAMIT11, BnaRPT3 and BnaBIN2; D: Expression patterns of BnaSRO1 and BnaF3H; Ro72h: root of 72 h after germination; NRo72h: Root of 72 h after germination under salt stress condition; Hy72h: hypocotyl of 72 h after germination; NHy72h: hypocotyl of 72 h after germination under salt stress condition; Ro: root at flowering stage; St: stem at flowering stage; Le: mature leaf at flowering stage; Bu: bud; Se7d: seed of 7 d after flowering; Se21d: seed of 21 d after flowering; Se40d: seed of 40 d after flowering; SP7d: silique pericarp of 7 d after flowering; SP21d: silique pericarp of 21 d after flowering; SP40d: silique pericarp of 40 d after flowering. Error bars in qRT-PCR detection results represent the standard error of the mean (n = 3)
-->

3 讨论

甘蓝型油菜基因组序列的公布及SNP芯片的开发促进了油菜重要数量性状的定位研究[9]。目前,有****已开展了油菜种子重量和品质[21]、干旱胁迫抗性[22]、种子萌发和活力[23]、收获指数[24]、株高、一次分枝数[25]、单株产量、生物产量和开花时间[26]等性状的GWAS分析,鉴定了大量控制油菜重要性状的位点。本研究利用砂培试验,对正常和盐胁迫萌发条件下幼苗下胚轴长和根长性状进行GWAS分析,鉴定出45个显著关联的SNP,分布在油菜基因组的16条染色体,其中A03染色体上的rs6816与荐红举等[6]利用重组自交系群体检测到的控制盐胁迫下油菜种子发芽率的QTL位点qD4-A03-1非常接近,仅相距348 kb,很可能为同一QTL区间。ZHANG等[22]对模拟干旱胁迫条件下油菜萌发的根长、茎长、根茎长度比和鲜重进行了GWAS分析,鉴定出的显著关联标记Bn-A10-p3063220、Bn-scaff_16394_2- p1222322、Bn-scaff_17623_1-p657238和Bn-scaff_ 16445_1-p1834116与笔者在相同染色体发现的显著关联SNP均在1 Mb范围内。由于ZHANG等[22]的GWAS群体仅包含66个自交系,表型数据较少,关联分析准确性受影响,因此,其鉴定的位点与本研究结果可能一致,但还需要进一步比较研究。HATZIG等[23]利用GWAS对油菜种子萌发和种子活力进行了解析,其中A05和C08染色体的显著关联SNP与本研究定位结果一致。虽然,本研究检测到的位点与前人定位QTL部分重叠,但仍有多个显著关联标记无法与其他研究对应,可能与鉴定方法及调查性状不同有关,这些位点可作为新的候选基因区域作进一步研究。
不同油菜品种对盐胁迫的抗（耐）性存在显著差异[2],这是解析油菜耐盐性关键遗传因子和耐盐基因的基础。本研究利用GWAS和转录组综合分析方法,最终确定了11个重要LD区间的候选基因。其中,显著关联SNP rs22322所在LD区间的候选基因BnaSAM-Mtase（BnaA07g03510）位于A07染色体,编码S-腺苷基甲硫氨酸依赖的甲基转移酶（S- adenosyl-L-methionine-dependent methyltransferase）,其被证实对维持细胞功能,提高植株抗氧化胁迫能力具有重要作用[27]。本研究中BnaA07g03510在根和下胚轴均受盐胁迫显著上调表达,提示其可能也以类似的方式提高油菜发芽期下胚轴和根部的耐盐性。而rs18442和rs18448标记LD区间的候选基因BnaA08g24690D编码α-扩张蛋白7（BnaEXPA7）,在根和下胚轴中特异表达,并在下胚轴中受盐胁迫诱导上调表达,由于α-扩张蛋白家族主要具有松弛细胞壁,决定器官大小和形态建成的作用,因此其对油菜下胚轴伸长和盐胁迫适应性可能也起到了重要作用[28]。BnaSRO1（BnaC04g44420D）是最值得关注的候选基因,其位于显著关联SNP rs8970的LD区段内,与HLN、HLW、RLD和RLW 4个性状均紧密连锁,编码具有多聚（ADP-核糖）聚合酶催化结构域和WWE蛋白互作结构域的RCD1类蛋白（SIMILAR TO RCD ONE1,SRO1）。有研究表明,RCD1能与AP2/ERF、NAC和bHLH（basic helix-loop-helix）转录因子互作,调节植物的发育 和胁迫响应[29]。此外,RCD1还能质膜Na+/H+逆向转运蛋白SOS1互作,提高拟南芥氧化胁迫适应能力[30]。本研究发现,BnaSRO1在根和下胚轴中受盐胁迫诱导表达,其转录水平在叶和花后40 d角果皮中也具有较高的转录水平,提示其不仅对油菜发芽期下胚轴的发育及盐胁迫适应性具有重要作用,可能也参与叶片和角果皮的发育调控。类黄酮合成途径的关键蛋白黄烷酮3-羟化酶（flavanone 3- hydroxylase gene,F3H）具有提高植物抵抗干旱、盐胁迫和紫外辐射的能力[31]。位于显著关联标记rs35083 LD区间内的BnaF3H（BnaC08g22640D）在油菜发芽期根部受盐胁迫诱导上调表达,提示其可能对油菜发芽期根部的盐胁迫适应也具有重要作用。除上述4个基因外,基因表达模式和基因功能注释分析显示另外7个候选基因很可能也参与了油菜发芽阶段根和下胚轴的发育调节或与苗期盐胁迫适应相关。因此,深入开展上述候选基因的基因功能研究将有助于准确揭示油菜发芽期根和下胚轴的发育及盐胁迫适应机制,为提高油菜耐盐性和选育耐盐品种奠定基础。

4 结论

GWAS分析检测到45个与油菜发芽期根和下胚轴发育及盐胁迫适应性显著关联的SNP,其中40个和5个分别与下胚轴长和根长显著关联。重要显著关联SNP的11个LD区间共含447个基因,转录组分析和基因功能注释综合分析进一步筛选出11个重要候选基因。除BnaNPH3,其余10个候选基因均在根或下胚轴中受盐胁迫诱导上调表达,部分基因具有根或下胚轴特异表达特性,说明这些基因很可能参与油菜发芽期根和下胚轴生长发育及耐盐性的调节。
The authors have declared that no competing interests exist.

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