不同品种猪PPARγ和C/EBPα基因表达规律与肌内脂肪含量的相关

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本站小编 Free考研考试/2021-12-26

盘道兴, 王振, 杨茂林, 廖乔平, 杨昌平, 吴宇萍, 王金洲, 刘若余. 不同品种猪PPARγ和C/EBPα基因表达规律与肌内脂肪含量的相关[J]. , 2017, 50(1): 171-182 https://doi.org/10.3864/j.issn.0578-1752.2017.01.015
PAN DaoXing, WANG Zhen, YANG MaoLin, LIAO QiaoPing, YANG ChangPing, WU YuPing, WANG JinZhou, LIU RuoYu. Association of the PPARγ and C/EBPα Gene Expression with Intramuscular Fat Content in Different Varieties of Pig[J]. Scientia Acricultura Sinica, 2017, 50(1): 171-182 https://doi.org/10.3864/j.issn.0578-1752.2017.01.015

0 引言

【研究意义】肌内脂肪（intramuscular fat,IMF）是影响肉品质的主要因素,适宜的IMF含量是评价优质肉的重要指标,可以更好地反映其风味、嫩度、多汁性等肉质性能^{[1- 3]}。肌内脂肪的生成受遗传、环境、营养等因素影响,探究其沉积规律和调控机制对改善肉质性状具有积极意义。【前人研究进展】过氧化物酶体增殖物活化受体γ（peroxisome proliferator-activated receptorgamma, PPARγ）是核内受体转录因子超家族成员之一,具有调节脂肪形成、糖脂代谢和细胞增殖分化等生物学功能^[4]。脂肪分化受众多转录因子共同作用,是精密复杂的转录级联调控过程,其中PPARγ基因是重要的核心调控因子。PPARγ还是介导与脂肪酸合成、转运、代谢相关基因发挥作用的媒介,是脂肪生成过程中信号传递的纽带^[5]。LEFTEROVA等^[6]研究表明在缺失PPARγ时,任何诱导条件都不能再激发成脂分化的进程。FARMER^[7]研究表明脂肪分化必须要有PPARγ的参与。CCAAT/增强子结合蛋白 α（CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα）是碱性亮氨酸拉链蛋白家族的一个亚家族成员之一,在脂肪细胞分化、发育过程中起着决定性作用,并可激活众多脂肪细胞分化相关基因的转录表达,同时促进细胞中脂肪的累积^[8-9]。脂肪细胞特异性表达的基因含有C/EBPα的结合位点,若此类基因调控区内的CCAAT重复序列发生突变就不能诱导基因表达^[10]。C/EBPα与固醇调节元件结合蛋白-1启动子区域结合从而促进其表达,进而促进脂肪沉积相关基因的表达。【本研究切入点】在脂肪分化过程中各转录因子的作用时间和方式不同,但最终汇集到PPARγ、C/EBPα上,两者共同作用,开启一系列脂肪特异性基因的表达,从而生成并储存长链脂肪酸^[11]。因此,其可作为研究脂肪分化及沉积的关键候选基因。【拟解决的关键问题】本研究利用实时荧光定量PCR技术,检测PPARγ和C/EBPα基因在江口萝卜猪、从江香猪和大白猪不同时期、不同组织中的表达变化规律,并结合屠宰试验进行PPARγ和C/EBPα基因表达水平与肌内脂肪含量的相关性分析,旨在探讨不同猪种中两者的表达规律及其对脂肪沉积的影响,为进一步改善肉质性状提供数据参考,同时为科学合理利用优良地方猪种奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验时间、地点

本试验于2015年5—10月在贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室进行。

1.2 试验动物

采用江口萝卜猪、从江香猪和大白猪3个猪品种作为试验材料,每个品种在3—7月龄各选6头,屠宰后采集心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌和皮下脂肪放入装有RNA保存液的冻存管中,之后置于-80℃保存,用于提取组织RNA;取部分背最长肌保存于-20℃,用于测定肌内脂肪含量。

1.3 IMF含量的测定

充分烘干后的肉样经粉碎后,采用索氏抽提法测定肌内脂肪含量。每个样品重复测定3次,根据计算公式：IMF=（提前总重 - 提后总重）/提前样品干物质总重×100,取平均值作为样品的IMF含量。

1.4 引物的设计与合成

根据GenBank中猪PPARγ、C/EBPα基因的mRNA序列（登录号分别为：NM_214379;NC_010448）中的编码区设计引物,选用β-actin基因作为内参基因。利用NCBI中的 Primer-BLAST设计引物,由上海英骏生物技术有限公司合成。引物信息见表1。
Table 1
表1
表1引物序列、退火温度及产物长度
Table 1Primer sequence, annealing temperature and product size

基因 Gene	引物序列（5′→3′）Primer sequence	退火温度 Annealing temperature (℃)	产物长度 Length (bp)
PPARγ	Forward：CTGACCAAAGCAAAGGCGAG Reverse：CGGAGCGAAACTGACACCC	60	178
C/EBPα	Forward：GGCTACCTGGACGGCAGG Reverse：GCGGAGGGTGTGAATGCG	62	187
β-actin	Forward：GGACTTCGAGCAGGAGATGG Reverse：AGGAAGGAGGGCTGGAAGAG	60	138

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1.5 总RNA的提取及逆转录

采用Trizol法提取组织样总RNA,超微量紫外分光光度计测定其浓度和纯度（OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.8—2.0）,1% 琼脂糖凝胶电泳检测RNA提取效果。使用北京全式金生物技术有限公司的逆转录试剂盒（EasyScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix）进行反转录,体系为20 μL。反应条件为：25℃孵育10 min,42℃孵育30 min,85℃加热5 s。逆转录后的cDNA置于-20℃保存。

1.6 荧光实时定量PCR

采用SYBR Green I荧光染料法在荧光定量PCR仪上进行实时荧光定量。反应体系为20 μL：2×UltraSYBR Mixture（With ROX）10 μL,目的基因上下游引物各0.4 μL,cDNA模板0.8 μL,无RNA酶去离子水8.4 μL。反应条件为：95℃预变性10 min;95℃变性10 s;退火30 s（退火温度见表1）;72℃延伸32 s;循环40次后进行溶解曲线分析：95℃ 10 s,60℃ 15 s,然后以每10 s上升0.5℃的速率从60℃升高到95℃。每个样品重复3个。

1.7 数据分析

利用2^-△△CT方法计算基因实时荧光定量PCR的表达量。试验数据用SPSS17.0软件进行单因素方差分析,结果用“平均值±标准误”表示。P<0.01表示差异极显著;P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 猪背最长肌的IMF含量

大白猪、江口萝卜猪、从江香猪在3—7月龄背最长肌中的肌内脂肪含量如图1所示。3月龄时,3个猪种的肌内脂肪含量均较低,随着月龄的增加逐渐上升,6—7月龄时较高且处于相对稳定水平。其中大白猪、江口萝卜猪、从江香猪的肌内脂肪含量在5、6、7月龄均极显著高于3月龄（P<0.01）;大白猪的肌内脂肪含量在4月龄时与5、6、7月龄时差异显著（P<0.05）。同一月龄不同品种猪的肌内脂肪在3月龄时无显著差异,4月龄时从江香猪显著高于大白猪（P<0.05）,6、7月龄时江口萝卜猪、从江香猪均显著高于大白猪（P<0.05）。

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图1猪肌内脂肪含量同一品种不同月龄间的差异用字母表示,不同小写字母表示差异显著（P<0.05）,不同大写字母表示差异极显著（P<0.01）,无字母或字母相同表示差异不显著（P>0.05）;**表示同月龄不同品种间差异极显著（P<0.01）,*表示差异显著（P<0.05）。表2同
-->Fig. 1Intramuscular fat contentIn the same breed common letter or no letter indicates no difference between ages, a small letter means significant differences (P<0.05), a capital letter means extreme differences (P<0.01). **indicates extreme differences (P<0.01) in different breed at the same age, *indicates significant differences (P<0.05). The same as Table 2
-->

2.2 同一品种不同时期各组织PPARγ、C/EBPα基因的表达差异

2.2.1 大白猪不同月龄同一组织及同一月龄不同组织间PPARγ、C/EBPα基因的表达差异 PPARγ基因在大白猪不同时期各组织间的表达水平如表2、图2所示。PPARγ在大白猪3—7月龄各组织中均有表达,其中皮下脂肪的表达水平最高,其次为肝、小肠,心、脾、肺、肾、背最长肌的表达水平最低。PPARγ的表达量随时间增加呈上升趋势,各组织在3月龄时表达水平低,到6、7月龄时较高且维持在一定水平。其中肝中3月龄与5、6、7月龄,脾、肺、肾中3月龄与7月龄,小肠中4月龄与6、7月龄,皮下脂肪中3、4月龄与5月龄PPARγ的表达量均差异显著（P<0.05）;小肠、背最长肌中3月龄与6、7月龄,皮下脂肪中3、4月龄分别与6、7月龄PPARγ的表达量均差异极显著（P<0.01）。PPARγ在大白猪同一时期各组织间的表达量为肝、小肠、皮下脂肪最高。其中4、5月龄的肝与心、脾、肺、肾、背最长肌,6、7月龄的肝、小肠与心、脾、肺、肾中PPARγ的表达量均差异显著（P<0.05）;3月龄的皮下脂肪与心、脾、肺、肾、背最长肌,4月龄的皮下脂肪与心、脾、肺、肾、小肠、背最长肌,5、6、7月龄的皮下脂肪与心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌中PPARγ的表达量均差异极显著（P<0.01）。
Table 2
表2
表2大白猪不同时期各组织PPARγ基因的表达
Table 2The expression of PPARγ in different tissues at different ages of Large White Pig

	3月龄 3 month	4月龄 4 month	5月龄 5 month	6月龄 6 month	7月龄 7 month
心 Heart	0.8300 ±0.1150	0.9320 ±0.1260	1.4027 ±0.2354	1.6710 ±0.2417	1.4752 ±0.2379
肝 Liver	1.3514 ±0.1079a	2.0065 ±0.2462*	2.7866 ±0.2364b*	2.9291±0.2580b*	2.9684 ±0.2796b*
脾 Spleen	0.8326 ±0.1168a	1.0325 ±0.1705	1.3284 ±0.0886	1.5143 ±0.0118	1.8481 ±0.0548b
肺 Lung	0.9226 ±0.0648a	1.0942 ±0.0914	1.4886 ±0.1280	1.7199 ±0.0211	1.8971 ±0.1454b
肾 Kidney	0.9819 ±0.0374a	1.3685 ±0.1318	1.6599 ±0.1147	1.7317±0.0981	1.8233 ±0.1375b
小肠 Small intestine	1.2435 ±0.2610A	1.5364 ±0.1029a	2.1141 ±0.1604	2.6483±0.0506bB*	2.8530 ±0.1848bB*
背最长肌 Longissimus dorsi	0.6683±0.0968A	1.0210 ±0.1821	1.5287 ±0.1793	2.4863 ±0.2398B	2.0094 ±0.2218B
皮下脂肪 Subcutaneous adipose	2.1333 ±0.2287aA**	3.1356 ±0.2684aA**	5.0893 ±0.2751b**	5.7769 ±0.2048B**	5.8854 ±0.2929B**

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图2大白猪不同时期各组织PPARγ基因的表达同一品种同一组织不同月龄间的差异用字母表示,不同小写字母表示差异显著（P<0.05）,不同大写字母表示差异极显著（P<0.01）,无字母或字母相同表示差异不显著（P>0.05）;**表示同一品种同一月龄不同组织间差异极显著（P<0.01）,*表示差异显著（P<0.05）。下同
-->Fig. 2The expression of PPARγ in different tissues at different ages of Large White PigAt the different age, common letter or no letter indicates no difference in the same breed and tissue, a small letter means significant differences (P<0.05), a capital letter means extreme differences (P<0.01). **indicates extreme differences (P<0.01) in different tissue at the same age and breed, *indicates significant differences (P<0.05). The same as below
-->

C/EBPα基因在大白猪不同时期各组织间的表达水平如表3、图3所示。大白猪中,C/EBPα在3—7月龄各组织的表达量亦呈上升趋势,到6、7月龄较高。其中肝、小肠中3月龄与5月龄,脾中3、4月龄与5、6、7月龄,肺中3月龄与5月龄及4月龄与5、6、7月龄,背最长肌中3、4月龄分别与6、7月龄,皮下脂肪中3月龄与5月龄C/EBPα的表达量均差异显著（P<0.05）;肝、肺、小肠中3月龄与6、7月龄,皮下脂肪中3、4月龄与6、7月龄C/EBPα的表达量均差异极显著（P<0.01）。C/EBPα在大白猪同一时期各组织间的表达量为肝、肺、小肠、背最长肌、皮下脂肪较高。其中3月龄的肝与心、肾,4、6月龄的肝、肺、小肠与心、肾,5月龄的肝、肺、小肠与心、肾、背最长肌,7月龄的肝、肺、小肠与心、脾、肾中C/EBPα的表达量均差异显著（P<0.05）;3、4、5月龄的皮下脂肪与心、肾,6月龄的皮下脂肪与心、脾、肾、背最长肌,7月龄的皮下脂肪与心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌中C/EBPα的表达量均差异极显著（P<0.01）。
Table 3
表3
表3大白猪不同时期各组织C/EBPα基因的表达
Table 3The expression of C/EBPα in different tissue at different age of Large White Pig

	3月龄 3 month	4月龄 4 month	5月龄 5 month	6月龄 6 month	7月龄 7 month
心 Heart	0.9524 ±0.0731	1.1488 ±0.1112	1.4226 ±0.2510	1.5075 ±0.2603	1.6765 ±0.1429
肝 Liver	1.7147 ±0.1195aA*	2.2934 ±0.2987*	3.2279 ±0.1930b*	3.8455 ±0.1954B*	4.2001 ±0.2233B*
脾 Spleen	1.3341 ±0.2032 a	1.4539 ±0.0507 a	2.2225 ±0.1957	2.6954 ±0.2073b	2.5010 ±0.0173 b
肺 Lung	1.5426 ±0.0696aA	2.3252 ±0.0354a*	3.3274 ±0.2095b*	3.9173 ±0.1872bB*	3.8051 ±0.2587 bB*
肾 Kidney	0.7225 ±0.0283	1.1874 ±0.1546	1.8688 ±0.1462	1.7466 ±0.1097	1.8010 ±0.1148
小肠 Small intestine	1.3846 ±0.2751aA	2.2197 ±0.2809*	3.4040 ±0.0879b*	3.7167 ±0.1107B*	4.6826 ±0.2300B*
背最长肌 Longissimus dorsi	1.2483 ±0.0735a	1.6030 ±0.1976a	2.0883 ±0.1388	2.7383 ±0.2425b	3.2532 ±0.2723 b
皮下脂肪 Subcutaneous adipose	2.0977 ±0.2596aA**	2.7993 ±0.2177A**	3.8883 ±0.2650b**	5.5912 ±0.3968cB**	6.9935 ±0.3232 cB**

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图3大白猪不同时期各组织C/EBPα基因的表达
-->Fig. 3The expression of C/EBPα in different tissues at different ages of Large White Pig
-->

2.2.2 江口萝卜猪不同月龄同一组织及同一月龄不同组织间PPARγ、C/EBPα基因的表达差异 PPARγ基因在江口萝卜猪不同时期各组织间的表达水平如表4、图4所示。江口萝卜猪中,PPARγ在心、脾、肺、肾、背最长肌的表达量最低,在皮下脂肪中最高,具有组织特异性。PPARγ的表达量随月龄递增而上升,皮下脂肪的增加幅度最大。其中肝、脾、肺、背最长肌3月龄与6、7月龄,小肠中3、4月龄与7月龄PPARγ的表达量差异显著（P<0.05）;皮下脂肪中3、4月龄与5、6、7月龄PPARγ的表达量差异极显著（P<0.01）。PPARγ在江口萝卜猪同一时期各组织间的表达量为肝、小肠、皮下脂肪较高。其中4月龄的肝与心、脾、背最长肌,5、6月龄的肝与心、脾、肺、肾、背最长肌,7月龄的肝、小肠与心、脾、肺、肾中PPARγ的表达量均差异显著（P<0.05）;3、4月龄的皮下脂肪与心、脾、肺、肾、背最长肌,5、6、7月龄的皮下脂肪与心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌中PPARγ的表达量均差异极显著（P<0.01）。
Table 4
表4
表4江口萝卜猪不同时期各组织PPARγ基因的表达
Table 4The expression of PPARγ in different tissue at different age of Jiangkou Luobo Pig

	3月龄 3 month	4月龄 4 month	5月龄 5 month	6月龄 6 month	7月龄 7 month
心 Heart	0.9353 ±0.0395	1.2207 ±0.1379	1.6499 ±0.3580	1.7163 ±0.3591	1.6450 ±0.1228
肝 Liver	1.6375 ±0.1572a	2.5202 ±0.2428*	3.0372 ±0.3021*	3.3317 ±0.2271b*	3.7279 ±0.2844b*
脾 Spleen	0.9172 ±0.0473a	1.2054 ±0.1781	1.4230 ±0.0883	1.8670 ±0.0716b	1.9847 ±0.1045b
肺 Lung	0.9845 ±0.0258a	1.4384 ±0.0778	1.5194 ±0.1054	1.9650 ±0.2041b	1.9836 ±0.1309b
肾 Kidney	1.0273 ±0.0213	1.3980 ±0.1196	1.8047 ±0.2393	1.8170 ±0.1262	1.9468 ±0.0915
小肠 Small intestine	1.7536 ±0.2124a	2.1237 ±0.0709a	2.5405 ±0.1815	2.9083 ±0.1154	3.4354 ±0.2485b*
背最长肌 Longissimus dorsi	0.9505 ±0.1521a	1.1277 ±0.2889	1.6065 ±0.2110	2.5351 ±0.1952	2.2346 ±0.1125b
皮下脂肪 Subcutaneous adipose	2.5993 ±0.1174A**	3.6602 ±0.0403A**	5.7987 ±0.1706B**	6.9667 ±0.2153B**	7.0693 ±0.2110B**

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图4江口萝卜猪不同时期各组织PPARγ基因的表达
-->Fig. 4The expression of PPARγ in different tissues at different ages of Jiangkou Luobo Pig
-->

C/EBPα基因在江口萝卜猪不同时期各组织间的表达水平如表5、图5所示。江口萝卜猪中,C/EBPα的表达量随时间增加呈逐渐上升趋势。其中心3月龄与6、7月龄,肝中3、4月龄分别与5、6、7月龄,脾中3月龄与7月龄,肺中4月龄与6、7月龄,肾中3月龄与6、7月龄,背最长肌中3、4月龄分别与6、7月龄,皮下脂肪中5月龄与7月龄C/EBPα的表达量均差异显著（P<0.05）;肺中3月龄与5、6、7月龄,小肠、皮下脂肪中3、4月龄与6、7月龄C/EBPα的表达量均差异极显著（P<0.01）。C/EBPα在江口萝卜猪同一时期各组织间的表达量为肝、小肠、背最长肌、皮下脂肪较高。其中3、4月龄的小肠与肾,5、6月龄的肝、肺、小肠与心、脾、肾,7月龄的肝、肺与心、肾中C/EBPα的表达量均差异显著（P<0.05）;
Table 5
表5
表5江口萝卜猪不同时期各组织C/EBPα基因的表达
Table 5The expression of C/EBPα in different tissues at different ages of Jiangkou Luobo Pig

	3月龄 3 month	4月龄 4 month	5月龄 5 month	6月龄 6 month	7月龄 7 month
心 Heart	0.8655 ±0.1708a	1.4402 ±0.2226	1.7586 ±0.1873	2.0500 ±0.2261b	2.1109 ±0.1724b
肝 Liver	1.4531 ±0.0864A	2.0901 ±0.1996a	3.9134 ±0.2203b*	4.3163 ±0.0638B*	4.1112 ±0.2778B*
脾 Spleen	1.6111 ±0.1722 a	1.8187 ±0.1049	2.1778 ±0.2196	2.4058 ±0.1669	2.8142 ±0.1929b
肺 Lung	1.6180 ±0.0555A	2.1634 ±0.0987a	3.6651 ±0.1377B*	4.1336 ±0.3655bB*	4.1411 ±0.1451bB*
肾 Kidney	0.6747 ±0.0329a	1.0806 ±0.1357	1.6295 ±0.2781	1.8097 ±0.2548b	1.9495 ±0.2473b
小肠 Small intestine	1.8549 ±0.1949A*	2.6490 ±0.2621A*	3.7754 ±0.2216*	4.5739 ±0.1008B*	5.1248 ±0.2019 B **
背最长肌 Longissimus dorsi	1.0467 ±0.0542a	1.7914 ±0.1392a	2.7793 ±0.1192	3.3640 ±0.2082 b	3.8022 ±0.2832 b
皮下脂肪 Subcutaneous adipose	2.7909 ±0.2307A**	3.7248 ±0.1120A**	5.2307 ±0.1572a**	6.4501 ±0.3300B**	8.6429 ±0.3906bB**

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图5江口萝卜猪不同时期各组织C/EBPα基因的表达
-->Fig. 5The expression of C/EBPα in different tissues at different ages of Jiangkou Luobo Pig
-->

3、4月龄的皮下脂肪与心、肾、背最长肌,5、6月龄的皮下脂肪与心、脾、肾、背最长肌,7月龄的皮下脂肪与心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌及小肠与心、肾中C/EBPα的表达量均差异极显著（P<0.01）。
2.2.3 从江香猪不同月龄同一组织及同一月龄不同组织间PPARγ、C/EBPα基因的表达差异 PPARγ基因在从江香猪不同时期各组织间的表达水平如表6、图6所示。从江香猪中,PPARγ在心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌的表达量较低,且随月龄增加而上升的幅度较小,在皮下脂肪的表达量最高。其中肝3月龄与5、6、7月龄,小肠中3月龄与5、6月龄,背最长肌中3、4月龄与6、7月龄,皮下脂肪中5月龄与7月龄PPARγ的表达量均差异显著（P<0.05）;小肠中3月龄与7月龄,皮下脂肪中3、4月龄与5、6、7月龄PPARγ的表达量均差异极显著（P<0.01）。PPARγ在从江香猪同一时期各组织间的表达量为肝、小肠、皮下脂肪较高。其中3月龄的皮下脂肪与心、脾、肺、肾、背最长肌,5、7月龄的肝、小肠与心、脾、肺、肾,6月龄的肝与心、脾、肺、肾中PPARγ的表达量均差异显著（P<0.05）;4月龄的皮下脂肪与心、脾、肺、肾、背最长肌,5、6、7月龄的皮下脂肪与心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌中PPARγ的表达量均差异极显著（P<0.01）。
Table 6
表6
表6从江香猪不同时期各组织PPARγ基因的表达
Table 6The expression of PPARγ in different tissues at different ages of Congjiang Xiang Pig

	3月龄 3 month	4月龄 4 month	5月龄 5 month	6月龄 6 month	7月龄 7 month
心 Heart	0.9538 ±0.0233	1.4718 ±0.2780	1.5063 ±0.1669	1.6521 ±0.2308	1.7209 ±0.1641
肝 Liver	1.7257 ±0.1342a	2.3782 ±0.1266	3.1080 ±0.2651b*	3.5789 ±0.3651b*	3.3027 ±0.2242b*
脾 Spleen	0.8333 ±0.0502	1.2964 ±0.0898	1.5093 ±0.0842	1.6970 ±0.0459	1.8559 ±0.1559
肺 Lung	0.9577 ±0.0235	1.3767 ±0.0360	1.4421 ±0.1818	1.7948 ±0.1376	1.7646 ±0.0982
肾 Kidney	1.1332 ±0.1333	1.5251 ±0.0614	1.6288 ±0.2717	1.9170 ±0.1385	1.9173 ±0.1384
小肠 Small intestine	1.6761 ±0.1107aA	2.3272 ±0.0358	2.8388 ±0.0556b*	2.8803 ±0.0975b	3.5009 ±0.2022B*
背最长肌 Longissimus dorsi	0.8745 ±0.1225a	1.2142 ±0.1724a	1.7773 ±0.1913	2.9824 ±0.2388	2.5240 ±0.1094b
皮下脂肪 Subcutaneous adipose	2.3511 ±0.0760A*	3.8939 ±0.1745A**	6.0969 ±0.0863aB**	7.5203 ±0.3035B**	8.1401 ±0.2571bB**

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图6从江香猪不同时期各组织PPARγ基因的表达
-->Fig. 6The expression of PPARγ in different tissues at different ages of Congjiang Xiang Pig
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C/EBPα基因在从江香猪不同时期各组织间的表达水平如表7、图7所示。C/EBPα在从江香猪肝、肺、小肠、皮下脂肪中的表达量较高,各组织中的表达量随时间增加而上升。其中心3月龄与6、7月龄,肝中3、4月龄与5、6、7月龄及5月龄与6、7月龄,脾中3、4月龄与7月龄,肺中4、5月龄与6、7月龄,肾中3月龄与6月龄,小肠、皮下脂肪中5月龄与6、7月龄C/EBPα的表达量均差异显著（P<0.05）;肺中3月龄与6、7月龄,小肠、皮下脂肪中3、4月龄与6、7月龄,背最长肌中3、4月龄与7月龄C/EBPα的表达量均差异极显著（P<0.01）。C/EBPα在从江香猪同一时期各组织间的表达量为肝、肺、小肠、背最长肌、皮下脂肪较高。其中3月龄的肝、小肠、皮下脂肪与心、肾,4月龄的肝、肺、小肠与脾、肾,5月龄的肝、肺、小肠与心、肾,6月龄的肝、肺、小肠与心、脾、肾、背最长肌中C/EBPα的表达量均差异显著（P <0.05）;4月龄的皮下脂肪与心、脾、肾,5、6月龄的皮下脂肪与心、脾、肾、背最长肌,7月龄的皮下脂肪与心、肝、脾、肺、肾、背最长肌及肝、肺、小肠与心、脾、肾中C/EBPα的表达量均差异极显著（P<0.01）。
Table 7
表7
表7从江香猪不同时期各组织C/EBPα基因的表达
Table 7The expression of C/EBPα in different tissues at different ages of Congjiang Xiang Pig

	3月龄 3 month	4月龄 4 month	5月龄 5 month	6月龄 6 month	7月龄 7 month
心 Heart	0.7758 ±0.1633a	1.6521 ±0.1356	1.9706 ±0.1935	2.6538 ±0.1275b	2.3536 ±0.2786b
肝 Liver	2.1083 ±0.1645a*	2.5840 ±0.0684a*	3.5481 ±0.1119b*	4.6439 ±0.1960c*	4.9878 ±0.2983c**
脾 Spleen	1.3195 ±0.1788a	1.4728 ±0.0260a	2.5158 ±0.1250	2.2929 ±0.2445	2.7933 ±0.2120b
肺 Lung	1.8586 ±0.0637A	2.7230 ±0.0898a*	3.4971 ±0.0952a*	4.4626 ±0.2051bB*	4.8830 ±0.1153bB**
肾 Kidney	0.8523 ±0.0613a	1.2990 ±0.1630	1.8834 ±0.2187	2.0188 ±0.2469b	1.8761 ±0.2972b
小肠 Small intestine	2.0482 ±0.2738A*	2.9141 ±0.1627A*	3.9466 ±0.2342a*	4.9223 ±0.2382bB*	5.8701 ±0.2155bB**
背最长肌 Longissimus dorsi	1.6219 ±0.0679A	1.9434 ±0.0137A	2.6655 ±0.2955	3.0810 ±0.1047	4.0946 ±0.3572B
皮下脂肪 Subcutaneous adipose	2.3608 ±0.0897A*	3.4935 ±0.1343A**	4.6494 ±0.3380a**	5.9228 ±0.2462bB**	7.7934 ±0.4928bB**

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图7从江香猪不同时期各组织C/EBPα基因的表达
-->Fig. 7The expression of C/EBPα in different tissues at different ages of Congjiang Xiang Pig
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2.3 不同品种相同时期各组织PPARγ、C/EBPα基因的表达差异

2.3.1 不同品种相同时期各组织C/EBPα基因的表达差异 3月龄时,C/EBPα在肝、小肠、皮下脂肪中的表达量分别是江口萝卜猪与从江香猪、大白猪与从江香猪、大白猪与江口萝卜猪之间差异显著（P<0.05）;4月龄时,C/EBPα在小肠、皮下脂肪中的表达量分别是大白猪与从江香猪及大白猪与江口萝卜猪、从江香猪之间差异显著（P<0.05）;5月龄时,C/EBPα在肝、小肠中的表达量是大白猪与江口萝卜猪及皮下脂肪中的表达量是大白猪与江口萝卜猪、从江香猪之间差异显著（P <0.05）;6月龄时,C/EBPα在肝、皮下脂肪中的表达量分别是大白猪与从江香猪、大白猪与江口萝卜猪及小肠中的表达量是大白猪与江口萝卜猪、从江香猪之间差异显著（P <0.05）;7月龄时,C/EBPα在肝、小肠中的表达量是大白猪与从江香猪及皮下脂肪中的表达量是大白猪、江口萝卜猪、从江香猪之间差异显著（P<0.05）。
2.3.2 不同品种相同时期各组织PPARγ基因的表达差异 3月龄时,PPARγ在肝中的表达量是大白猪与从江香猪及小肠、皮下脂肪中的表达量是大白猪与江口萝卜猪之间差异显著（P<0.05）;4月龄时,PPARγ在肝、皮下脂肪中的表达量分别是大白猪与江口萝卜猪、大白猪与从江香猪及小肠中的表达量是大白猪与江口萝卜猪、从江香猪之间差异显著（P<0.05）;5月龄时,PPARγ在小肠中的表达量是大白猪与从江香猪及皮下脂肪中的表达量是大白猪与江口萝卜猪、从江香猪之间差异显著（P<0.05）;6月龄时,PPARγ在皮下脂肪中的表达量是大白猪与江口萝卜猪、从江香猪之间差异显著（P<0.05）;7月龄时,PPARγ在肝中的表达量是大白猪与江口萝卜猪及皮下脂肪中的表达量是大白猪、江口萝卜猪、从江香猪之间差异显著（P<0.05）。

2.4 猪PPARγ、C/EBPα基因mRNA表达水平与肌内脂肪的相关性

对不同品种猪PPARγ、C/EBPα基因表达量与IMF含量的相关分析表明,PPARγ、C/EBPα基因的表达量与肌内脂肪含量呈正相关,其中在4—6月龄时呈强度正相关。大白猪PPARγ、C/EBPα的表达量与肌内脂肪呈显著相关（P<0.05）,相关系数分别为0.564、0.621;江口萝卜猪、从江香猪PPARγ的表达量与肌内脂肪呈显著相关（P<0.05）,相关系数分别为0.604、0.586;江口萝卜猪、从江香猪C/EBPα的表达量与肌内脂肪呈极显著相关（P<0.01）,相关系数r分别为0.718、0.764;PPARγ 基因的表达量在三个猪品种中的决定系数r²约为 0.3,说明其表达量与肌内脂肪有一定的线性关系,C/EBPα基因的表达量在江口萝卜猪、从江香猪中的决定系数约为0.5,说明其表达量与肌内脂肪有较强的线性关系（表8）。
Table 8
表8
表8PPARγ、C/EBPα基因mRNA表达水平与肌内脂肪的相关性分析
Table 8The correlation of PPARγ and C/EBPα gene expression and IMF content

品种 Different breed	PPARγ 基因mRNA的表达 Expression of PPARγ mRNA	C/EBPα基因mRNA的表达 Expression of C/EBPα mRNA
大白猪 Large White Pig	r = 0.564* r² = 0.318	r = 0.621* r²= 0.385
江口萝卜猪 Jiangkou Luobo Pig	r = 0.604* r²= 0.365	r = 0.718** r²= 0.515*
从江香猪 Congjiang Xiang Pig	r = 0.586* r²= 0.343	r = 0.764** r²= 0.584*

**表示差异极显著（P<0.01）,*表示差异显著（P<0.05） **indicates extreme differences (P<0.01), *indicates significant differences (P<0.05)

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3 讨论

肌内脂肪沉积的多少直接影响猪的肉质性状及其经济价值,在过去几十年世界各国对猪的遗传改良主要集中在提高生长速度、饲料利用率和瘦肉率等方面,并且取得了丰硕的科研成果。但另一方面却严重影响了猪肉品质,其感官性质、营养价值及可食用性均出现急剧下降。近年来,猪脂肪沉积及其调控成为研究者关注的热点,致力于改善商品猪的肉质性能^[12-14]。不同品种猪的脂肪沉积能力存在差异,江口萝卜猪和从江香猪属于脂肪型猪种,其肉质细嫩多汁、香味浓郁,作为贵州宝贵的地方优良品种素有“一家煮肉四邻香”之美誉;大白猪属于典型的瘦肉型猪种,具有生长快、瘦肉率高等特点^[15-18]。利用不同类型猪种进行脂肪细胞分化因子间表达差异研究对了解脂肪沉积变化规律具有重要意义^[19-20]。脂肪分化过程中依据转录因子的作用时间可分为两类：在脂肪分化早期,被成脂激素激活的转录因子为第一大类,主要包括环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）、早期生长反应蛋白（Krox20）、锌指蛋白（KLFs）等;在脂肪分化晚期,可以直接上调脂质生成相关基因表达,促进成熟脂肪细胞形成的转录因子为第二大类,主要包括PPARγ、C/EBPα、SREBP-1（固醇调节元件结合蛋白-1）等。其中PPARγ、C/EBPα是关键的转录因子,可直接或间接介导其他转录因子发挥调控脂肪分化作用^[21-23]。姜俊芳等^[24]研究表明PPARγ基因的表达与脂肪沉积率呈正相关;郝称莉等^[25]对湖羊肌肉组织中PPARγ的表达情况及与肌内脂肪含量的相关性进行研究结果表明PPARγ基因可能对肌内脂肪的沉积产生一定的影响。C/EBPα基因在脂肪细胞分化、发育过程中起着决定性作用,可以直接刺激脂肪生成基因的表达,其能与脂肪细胞中特异性表达基因（如磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（PEPCK）基因、葡萄糖转运体（GLUT）-4基因、瘦蛋白（leptin）基因和胰岛素受体基因等）的调控区域结合从而启动这些基因的表达转录^[26-27]。因此,PPARγ、C/EBPα基因可作为影响肌内脂肪含量的主效基因。本试验进行了三个猪品种在不同生长阶段PPARγ、C/EBPα基因的表达水平分析,以及其表达量与肌内脂肪含量的相关性分析,探讨PPARγ、C/EBPα基因对肌内脂肪的作用机理。研究结果表明PPARγ、C/EBPα基因在大白猪、江口萝卜猪、从江香猪各组织中均表达并且存在显著性差异,在心、脾、肾中的表达量最低,肝、肺、小肠、背最长肌中表达量较高,皮下脂肪中的表达量最高,具有较高的组织特异性;不同月龄中,其基因的表达量随着月龄增加总体呈上升趋势,在3月龄时表达量较低,到6、7月龄时较高且保持相对稳定水平。不同品种间PPARγ、C/EBPα在相同月龄各组织中的表达量存在差异,总体上大白猪中肝、小肠、皮下脂肪中两个基因的表达量分别与江口萝卜猪、从江香猪差异显著。这可能是瘦肉型猪与脂肪型猪中其基因的表达量间存在差别。PPARγ、C/EBPα基因的表达量与肌内脂肪含量呈正相关,在4—6月龄时呈强度相关,这时间段正是猪体中脂肪沉积的关键时期,说明PPARγ、C/EBPα可能对肌内脂肪的沉积有一定的积极作用,但具体的调控机理还需进一步深入的研究。本研究仅在转录水平上探讨了PPARγ、C/EBPα基因的发育性变化对IMF含量的影响,后期将会在蛋白质水平上对其进行更全面的研究。

4 结论

同一品种各组织中PPARγ、C/EBPα的表达及肌内脂肪含量的变化规律基本相同,即随着月龄的增加而逐渐上升,到生长后期维持一个相对稳定水平。同一品种同一时期各组织间PPARγ、C/EBPα的表达量不同,总体上皮下脂肪的表达量最高,其次肝、肺、小肠、背最长肌中较高,心、脾、肾中的表达量最低。不同品种同一时期各组织间PPARγ、C/EBPα的表达量存在差异,总体上江口萝卜猪、从江香猪高于大白猪。PPARγ、C/EBPα的表达量与肌内脂肪含量呈正相关,在4—6月龄时呈强度相关。猪PPARγ、C/EBPα基因在调控脂质代谢及脂肪沉积方面发挥一定作用,可进一步更深入研究其调控机理。
The authors have declared that no competing interests exist.