1.School of Biomedical Engineering, Dalian University of Technology, Dalian 116000, China 2.School of Optoelectronic Engineering and Instrumentation Science, Dalian University of Technology, Dalian 116000, China
Abstract:Biosensor has received increasing attention in recent years due to the demand for detecting biological and chemical substances in liquid. In particular, the detection methods based on refractive index have advantages in detection sensitivity. Colorimetric biosensor can transform the change in refractive index of target into the change in color, which has advantages in simple operation, low cost and real-time detection with naked human eyes. In this work, a Fabry-Pérot cavity colorimetric biosensor based on α-MoO3 integrating microfluidic channel is proposed. The α-MoO3 is an emerging natural two-dimensional van der Waals material with anisotropic optical properties due to its unique crystal structure. Theoretical analysis of the feasibility of BK7/Ag/SiO2 as the reflective layers is carried out. And the transmittance spectra of the proposed colorimetric biosensor are calculated by the transfer-matrix method. The obvious color changes can be observed when the microfluidic channel filled with NaCl solutions with different concentrations. The proposed colorimetric biosensor achieves a high detection sensitivity of 600 nm/RIU, which can detect a concentration change of NaCl solution as low as 9‰. The proposed colorimetric biosensor can tune the operating wavelength by simply rotating the device due to the anisotropic optical properties of α-MoO3 to satisfy the color vision of human eyes. Moreover, by tuning the thickness of microfluidic channel, the operating wavelength of colorimetric biosensor can be further shifted. Our approach offers a new direction for developing tunable biosensors with low cost and real-time detection. Keywords:biosensor/ Fabry–Pérot cavity/ α-MoO3/ colorimetric sensor
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2.基于α-MoO3的FP腔生物传感器的结构设计图1所示为基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器3D示意图和剖面示意图, 主要由Ag层(防氧化SiO2镀膜)反射镜和微流腔构成, 下层Ag层上还集成了α-MoO3以增强共振效果并实现调谐功能. 层状斜方晶α-MoO3结构(图1(a)插图)由双层非对称MoO6八面体晶格组成, 具有高度各向异性的晶体结构. MoO6八面体结构包含[001]方向上的边共享模式和[100]方向上的角共享模式, 在竖直[010]方向上则由弱范德瓦尔斯力约束. FP腔集成了微流腔从而使待测生物样本可以从腔中通过. Ag层用于提升共振信号强度从而提供通过FP腔中的液体成分的高灵敏度、高分辨率实时响应. 使用微流腔避免了将生物样本与传感区域贴合所需的辅助压力装置[39], 同时增强了光-物质相互作用从而可以更准确地检测较小体积的生物样本[4,40]. 通过检测透射谱的峰值波长的位移即可监控FP腔中生物样本折射率的变化. 在FP谐振腔生物传感器中的下层SiO2/Ag薄膜上集成了α-MoO3, 从而实现了可调谐光学生物传感器, 只需改变器件的方向 (或入射光的偏振角)即可实现调谐, 将FP谐振腔生物传感器的工作频段转移, 亦可实现一定程度上的灵敏度切换. 本文定义晶体结构方向[100]和[001]分别为笛卡尔坐标系下的x方向和y方向, 偏振角φ = 0°为x偏振方向, φ = 90°为y偏振方向, 入射角θ = 0°为垂直入射, 入射光波长为可见光波段(450 —750 nm). 常见的可调谐传感器装置通常通过集成相变材料实现[37,41,42], 相变材料需要外接设备以加热等方式完成相变从而实现传感器的调谐. 利用α-MoO3作为调谐器件则无需复杂的外接设备, 极大地降低了传感器的制造成本. 若在上层Ag/SiO2薄膜上也集成α-MoO3形成对称结构, 由于α-MoO3在可见光波段折射率虚部极小, 可以看作透明材料, 故此时Ag/SiO2/α-MoO3整体将视为FP谐振腔的两面反射镜, 降低了α-MoO3的调谐能力, 所以采用非对称结构, 只在下层SiO2/Ag薄膜上集成了α-MoO3. 本文中设计的基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器工作在可见光波段, 具有快速实时响应、高机械强度、高灵敏度、高准确性、可调谐等优点, 这种传感器制备相对简单, 无需复杂的光刻技术. 在医学领域, 糖尿病病人需要时刻监控体内关键电介质(NaCl和KCl)的浓度[43], 故本文以NaCl溶液为例测试所设计的基于α-MoO3的FP腔生物传感器的灵敏度. 图 1 基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器 (a) 3D示意图; (b)剖面示意图. 插图为层状斜方晶α-MoO3结构示意图, 层间由范德瓦尔斯力约束 Figure1. Schematic of FP cavity biosensor based on α-MoO3: (a) 3D view; (b) cross-sectional view. The inset is the illustration of orthorhombic α-MoO3 with layered structure held by van der Waals’ forces.
表1TMM计算FP谐振腔透射光谱所用的参数 Table1.Parameter for simulation of transmittance spectrum of proposed FP cavity biosensor using TMM.
3.FP腔生物传感器的光谱及传感性能表征通过改变FP谐振腔中集成的微流控的生物样本空间的厚度, 本文所设计的基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器的工作范围可以拓展到整个可见光区域. 当微流腔的厚度在300 nm时, 基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器的主要工作波长范围为600—650 nm. 图3(a)和图3(b)所示分别为x偏振光(φ = 0°)和y偏振光(φ = 90°)时纯水(0%)和不同浓度(5%—25%)的NaCl溶液通过微流腔时FP谐振腔生物传感器的透射光谱图. FP谐振腔的相位延迟δ可表示为 图 3 入射光分别为 (a) x偏振光(φ = 0°)和(b) y偏振光(φ = 90°)时纯水(0%)和多种浓度(5%—25%)的NaCl溶液通过FP谐振腔生物传感器的微流腔(300 nm)的透射光谱图; (c) 入射光分别为x偏振光(φ = 0°)和y偏振光(φ = 90°)时纯水(0%)和多种浓度(5%—25%)的NaCl溶液通过FP谐振腔生物传感器的微流腔(300 nm)的色彩图 Figure3. Transmittance spectrum of the FP cavity biosensor on (a) x polarization (φ = 0°) and (b) y polarization (φ = 90°) while the micofluidic chamber (300 nm) was filled with NaCl solution in different concentration; (c) colormap for NaCl solution in different concentration filled in micofluidic chamber (300 nm) at x polarization (φ = 0°) and y polarization (φ = 90°).
其中 FWHM为透射光谱的半宽高(full width at half maximum). 如图4所示, x偏振光下和y偏振光下透射峰波长随折射率(NaCl溶液浓度)近似线性变化. 图中线性拟合斜率即为灵敏度, 在x偏振光下和y偏振光下的灵敏度约为507 nm/RIU. 由Ag层反射镜构成的FP谐振腔实现了良好的共振效果, 在x偏振光下的FoM为15.8, 在y偏振光下的FoM为15.3. 最小可觉差(just-noticeable difference, JND)代表人或其他动物某一特定器官受到刺激时所能察觉到的最小改变. 颜色的改变本质是光的波长发生变化, 在可见光范围内从长波长到短波长可简单分为红、橙、黄、绿、青、蓝和紫. 在合适的观测条件下, 裸眼的分辨能力最强为0.4 nm (光波长580 nm处), 在光波长490—620 nm范围内分辨能力约为1 nm, 随着光波长红移至650 nm处, 裸眼的分辨能力降低至3.6 nm左右[49]. JND存在个体差异, 也会因环境、心理生理状态等发生改变. 考虑到人眼对颜色的分辨能力及该FP生物传感器的工作范围, 运用该FP生物传感器使用者可分辨约39‰的NaCl溶液的浓度变化. 由方程(2)可知, 透射峰波长与FP腔内有效折射率的一次成反比, 故当入射光的极性改变时, α-MoO3的折射率随之改变, 从而改变了FP谐振腔内有效折射率, 实现了不同入射极性下透射峰波长的位移. 而灵敏度S则与FP谐振腔内有效折射率的二次方成反比. 由方程(2)可推出不同NaCl溶液浓度引发的共振峰频率变化$\Delta {\upsilon _S}$: 图 4x偏振光下和y偏振光下基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器透射峰波长随折射率变化, 微流腔厚度为300 nm Figure4. The peak wavelength of transmittance spertrum of FP cavity biosensor based on α-MoO3 on x polarization and y polarization as a function of refractive index, while the thickness of microfluic chamber is 300 nm.
其中ng1, ng2分别代表不同NaCl溶液浓度下的FP谐振腔内折射率. 在FP谐振腔结构已经固定的情况下, 入射光的极性改变引发的有效折射率的改变对灵敏度S的影响较小, 因此不同偏振光下基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器的灵敏度几乎没有变化. 为使基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器的工作范围转移, 提高FP谐振腔中微流腔的厚度至550 nm. 图5(a)和图5(b)分别为x偏振光和y偏振光时不同NaCl溶液浓度通过微流腔时FP谐振腔生物传感器的透射光谱图, 该FP谐振腔生物传感器的主要工作波长范围为550—600 nm. 由于FP谐振腔内厚度增加, 透射率略微降低, 当两束相邻的光束相位延迟为π的整数倍时通过FP谐振腔生物传感器的透射率达到最大值0.58左右. 从图5中可以看出, 生物样本空间厚度改变后的FP谐振腔生物传感器也可以完成生物传感的功能且工作波段蓝移了约50 nm. 从图5(c)中可以看出, 同样检测0%浓度(纯水)到25%浓度的NaCl溶液, x偏振光下透射率的峰值波长从樱草色(λ = 560.6 nm)红移至鹅黄色(λ = 587.3 nm), y偏振光下透射率的峰值波长从柳绿色(λ = 550.9 nm)红移至近纯黄色(λ = 577.9 nm). 该生物传感器也可以实现调谐功能, 在y偏振光下透射谱相对x偏振光下发生蓝移, y偏振光下的透射峰值波长蓝移了10 nm左右. 此外, 基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器在生物样本空间的厚度为550 nm时的透射谱的强度和品质因数也能保持稳定, 在x偏振光下的FoM为23.1, 在y偏振光下的FoM为22.2. 图 5 入射光分别为 (a) x偏振光(φ = 0°)和(b) y偏振光(φ = 90°)时纯水(0%)和多种浓度(5%—25%)的NaCl溶液通过FP谐振腔生物传感器的微流腔(550 nm)的透射光谱图; (c) 入射光分别为x偏振光(φ = 0°)和y偏振光(φ = 90°)时纯水(0%)和多种浓度(5%—25%)的NaCl溶液通过FP谐振腔生物传感器的微流腔(550 nm)的色彩图 Figure5. Transmittance spectrum of the FP cavity biosensor on (a) x polarization (φ = 0°) and (b) y polarization (φ = 90°) while the micofluidic chamber (550 nm) was filled with NaCl solution in different concentration; (c) colormap for NaCl solution in different concentration filled in micofluidic chamber (550 nm) at x polarization (φ = 0°) and y polarization (φ = 90°).
如图6所示, x偏振光下和y偏振光下透射峰波长随折射率(NaCl溶液浓度)近似线性变化. 图中线性拟合的斜率即为灵敏度, 在x偏振光下和y偏振光下的灵敏度约为600 nm/RIU, 运用该FP生物传感器, 使用者可分辨约9‰的NaCl溶液的浓度变化. 由于生物样本空间的厚度提高, FP谐振腔中待测生物样本对有效折射率的影响增大, 根据方程(2)可知FP谐振腔生物传感器对待测生物样本的灵敏度会随之提高. 另一方面, FP谐振腔中α-MoO3的相对占比下降, 从而调谐能力下降. 在设计中, 应该有效控制各层厚度, 从而实现灵敏度和调谐能力的平衡. 图 6x偏振光下和y偏振光下基于α-MoO3的FP谐振腔生物传感器透射峰波长随折射率变化, 微流腔厚度为550 nm Figure6. The peak wavelength of transmittance spertrum of FP cavity biosensor based on α-MoO3 on x polarization and y polarization as a function of refractive index, while the thickness of microfluic chamber is 550 nm.