删除或更新信息,请邮件至freekaoyan#163.com(#换成@)

花生 AhDGAT2a基因启动子的克隆和功能验证

本站小编 Free考研考试/2021-12-26

郑玲1,2, 史灵敏1,3, 田海莹1,2, 单雷1,2, 边斐1, 郭峰1, 宣宁1, 万书波1,2,*, 彭振英1,2,3,*
1山东省农业科学院生物技术研究中心 / 山东省作物遗传改良与生态生理重点实验室, 山东济南 250100

2山东大学生命科学学院, 山东济南 250100

3新疆农业大学农学院, 新疆乌鲁木齐 830000

*通讯作者(Corresponding authors): 万书波, E-mail: wansb@saas.ac.cn, Tel: 0531-83178335; 彭振英, E-mail: pengzhenying2005@126.com 收稿日期:2016-01-11 接受日期:2016-05-09网络出版日期:2016-05-11基金:本研究由山东省自然科学基金项目(ZR2013CM036)和山东省良种工程项目(2014-2017)资助

摘要二酰甘油酰基转移酶(DGAT)是三酰甘油(TAG)合成途径的限速酶, 对脂肪酸合成的调节具有关键作用。为了研究 AhDGAT2a的表达调控, 利用GenomeWalking方法从鲁花14基因组中克隆了 AhDGAT2a上游5°侧翼调控区1200 bp序列, 即 AhDGAT2a启动子(pAhDGAT2a)序列, 并利用生物信息学软件分析其包含的调控元件, 发现其含有多个TATA-box和CAAT-box、光调控元件、胁迫防御相关元件和激素响应元件。用pAhDGAT2a构建pAhDGAT2a:GUS植物表达载体并转化烟草品种SR1。利用组织染色法鉴定转基因烟草的GUS表达模式, 发现在转基因烟草的各个器官均有GUS酶活, 在柱头、花药和幼嫩种子中表达量较高, 说明pAhDGAT2a具有一定的组成型启动子活性。

关键词:花生; AhDGAT2a基因; 启动子; 功能验证
Cloning and Functional Analysis of Peanut AhDGAT2a Promoter
ZHENG Ling1,2, SHI Ling-Min1,3, TIAN Hai-Ying1,2, SHAN Lei1,2, BIAN Fei1, GUO Feng1, XUAN Ning1, WAN Shuo-Bo1,2,*, PENG Zhen-Ying1,2,3,*
1 Biotechnology Research Center, Shandong Academy of Agricultural Sciences / Shandong Provincial Key Laboratory of Crop Genetic Improvement, Ecology and Physiology, Jinan 250100, China

2College of Life Science, Shandong University, Jinan 250100, China

3College of Agronomy, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830000, China

Fund:This study was supported by Natural Science Foundation of Shandong (ZR2013CM036) and Shandong Province Germplasm Innovation and Utilization Project (2014-2017)
AbstractDiacylglycerol acyltransferase (DGAT) is a rate-limiting enzyme in triacylglycerol (TAG) biosynthesis pathway. In this study, GenomeWalking method was used for cloning the promoter sequence of AhDGAT2a gene from Luhua 14, and finally a 1200 bp fragment flanking 5′-upstream of AhDGAT2a was obtained and named as pAhDGAT2a. The crucial regulatory elements in pAhDGAT2a were further analyzed with software PlantCARE. There were many TATA-box, CAAT-box, light regulation, stress and defense response and hormone response elements. To assess the activity of pAhDGAT2a, we constructed pAhDGAT2a:GUS cassettes and introduced it into the tobacco SR1 genome by Agrobacterium-mediated transformation. Expression pattern was monitored by histochemical staining. Results showed that GUS activity driven by the pAhDGAT2a was detected in almost all vegetative and reproductive tissues, with a higher expression level in stigma, anther and young seeds than in the other organs, indicating that pAhDGAT2a has a constitutive promoter activity.

Keyword: Arachis hypogaeaL .; AhDGAT2a gene; Promoter; Function analysis
Show Figures
Show Figures








植物油是食用油的主要来源, 约占全世界脂类消耗的75%[1]。植物油是由脂肪酸和甘油化合而成的天然化合物。脂肪酸, 是指一端含有一个羧基的长的脂肪族碳氢链, 是机体主要能量来源之一。植物油的不饱和脂肪酸含量比较高, 作为食用油, 可以降低人体血液中胆固醇的含量, 降低动脉硬化发生的几率[2]。三酰甘油(triacylgycerol, TAG)是大多数植物和动物体内最重要的油脂贮藏形式, 具有重要的社会经济价值。酰基辅酶A:二酰甘油酰基转移酶(acyl-CoA diacylgycerol acyltransferase, DGAT)是一种内质网细胞微粒体酶, 其主要作用是催化二酰甘油(diacylglycerol, DAG)加上酰基脂肪酸形成TAG[3]。该基因不仅与脂肪酸合成相关, 在种子萌发和叶片衰老等过程中也有一定的作用[4, 5, 6, 7]
1956年DGAT基因首次被发现[8], 并很快引起研究人员的广泛关注。根据结构和细胞定位的差异, DGAT被分为DGAT1、DGAT2、WS/DGAT和胞质DGAT四种类型[9, 10]。DGAT1属于包括酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶ACAT1和ACAT2在内的膜结合酰基转移酶(membrane-bound O-acyltransferases, NBOAT)家族的一部分[11]。DGAT2是一个蛋白超级家族, 在动物[12]、植物[13]和酵母[14]中都存在, 但是与DGAT1蛋白家族没有明显的相关性。WS/DGAT和胞质DGAT是近几年发现的DGAT基因家族的新成员, 目前相关研究较少。胞质DGAT (Cyto DGAT)是从花生未成熟种子中获得的一类新型二酰甘油酰基转移酶基因[9], 该基因没有跨膜结构, 与WS/DGAT具有13%的一致性, 与DGAT1和DGAT2家族具有不到10%的相似性。DGAT1和DGAT2大多被定位于内质网[15, 16], 而胞质DGAT是一种定位于细胞质中的可溶性蛋白[9]
DGAT1和DGAT2对于种子油脂合成非常重要[17, 18], 是Kennedy途径中唯一的限速酶。在拟南芥中过量表达DGAT1基因可使种子含油量显著提高, 而且可使转基因拟南芥种子内的DGAT活性比野生型提高10%~70% [19]。在玉米中过量表达DGAT1不仅可使转基因玉米种子含油量提高, 而且改变了油脂组成[20]DGAT2在大豆等转基因油料作物中过量表达均能提高种子的含油量[21, 22]
DGAT基因一直是油料作物的研究热点。花生在我国的种植面积已超过460万公顷, 总产量居世界首位[23]。花生籽仁粗脂肪含量50%左右, 仅次于芝麻[24]。由于DGAT在植物种子发育过程中影响种子油分含量、脂肪酸组成等, 对于油料作物花生DGAT的研究具有重要经济意义。目前花生的DGAT基因也有一些研究成果[9, 25, 26, 27], 但是对DGAT基因启动子的研究却很少。
我们前期从花生中克隆得到了AhDGAT2a基因(GenBank登录号为JF897614), 该基因编码区为1005 bp, 将该基因在烟草中过表达, 发现其能改变转基因烟草叶片的总脂肪酸含量和组成[25]。将AhDGAT2a基因在大肠杆菌Rosetta (DE3)表达, 能使大肠杆菌的体积增大2.4~2.5倍, 同时提高大肠杆菌的总脂肪酸含量[26]。为进一步研究AhDGAT2a基因的表达模式和基因组信息, 我们通过GenomeWalking方法从花生中克隆了AhDGAT2a基因的启动子序列(pAhDGAT2a), 并通过农杆菌介导的遗传转化法转化烟草进行功能验证。这为我们研究植物DGAT2的功能和油料作物TAG的合成及调控提供了依据, 为我们培育油料作物新品种奠定了基础。
1 材料与方法1.1 试验材料及菌液花生品种鲁花14由实验室保存, 室内培育后取幼叶, 液氮速冻保存在-80℃。烟草品种SR1由实验室保存。大肠杆菌(Escherichia coil) DH5α , 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404, 表达载体pCAMBIA2301均由本实验室保存。
1.2 生化试剂及试剂盒材料基因组DNA提取试剂盒、凝胶回收试剂盒和质粒DNA提取试剂盒为TIANGEN公司产品。Genome Walking试剂盒购自TaKaRa。T4 DNA连接酶及限制性内切酶购自Fermentas。其他化学试剂为国药产品。引物合成和测序由生工生物工程(上海)股份有限公司完成。
1.3 pAhDGAT2a克隆与序列测定pAhDGAT2a的克隆按照GenomeWalking试剂盒进行3轮扩增。用到的引物SP1: 5° -GGAGAGAGGTAGAA AGAGAAG-3° , SP2: 5° -CGCAAGCGCCAGCGTCGTTTT GAAGC-3° , SP3: 5° -CCGCCGGCGGCGCCACCGTGACG TT-3° 从上海生工合成。反应体系含基因组DNA 1 µ g、2.5 mmol L-1 dNTPs混合物8 µ L、10× LA PCR buffer II 5 µ L、5 U TaKaRa LA Taq 0.5 µ L、100 µ mol L-1 AP1 Primer 1 µ L、10 µ mol L-1 SP1 Primer 1 µ L, ddH2O加到总体积50 µ L。反应条件为94℃ 1 min, 98℃ 1 min, 5个循环的94℃ 30 s, 65℃ 1 min, 72℃ 2 min, 然后94℃ 30 s; 25℃ 3 min; 72℃ 2 min, 15个循环的94℃ 30 s; 65℃ 1 min; 72℃ 2 min; 94℃ 30 s; 65℃ 1 min; 72℃ 2 min; 94℃ 30 s; 44℃ 1 min; 72℃ 2 min, 最后72℃延伸10 min。第1轮产物稀释100倍后取1 µ L作为第2轮模板, 以AP1 Primer为上游引物, SP2为下游引物, 其余同第1轮扩增体系。反应条件为15个循环的94℃ 30 s; 65℃ 1 min; 72℃ 2 min; 94℃ 30 s; 65℃ 1 min; 72℃ 2 min; 94℃ 30 s; 44℃ 1 min; 72℃ 2 min, 最后72℃延伸10 min。第2轮产物稀释100倍后取1 µ L作为第3轮模板, 以AP1 Primer为上游引物, SP3为下游引物其余同第1轮扩增体系, 反应条件同第2轮。第2轮和第3轮PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测, 回收纯化目的条带, 连接到pMD18-T载体测序。测序完成后用PlantCARE软件分析其调控元件。
1.4 pAhDGAT2a:GUS植物表达载体构建将得到的pAhDGAT2a序列用引物PD2F/PD2R扩增, 引物序列为PD2F: 5° -TCTAGAACGACTGCCACATTATA CATTCTAGC-3° , PD2R: 5° -CCATGGTTTGGATTCGGTGG CTGTTG-3° , 引物两侧分别添加Xba I和Nco I酶切位点。提取花生幼叶的基因组DNA, 用基因组DNA为模板进行PCR扩增, 得到的序列进行双酶切, 利用T4连接酶连接到pCAMBIA2301载体, 替换pCAMBIA2301载体上的CaMV35S启动子。连接体系为PCR片段6 µ L, 载体DNA 2 µ L, 10× T4连接酶1 µ L, T4 DNA连接酶1 µ L。上述体系于16℃过夜连接, 连接体系转化大肠杆菌DH5α 感受态, 测序确定pAhDGAT2a:GUS表达载体构建成功。将构建好的pAhDGAT2a:GUS表达载体转化农杆菌LBA4404感受态细胞, 挑取单菌落进行PCR验证, 阳性克隆保存菌液待用。
1.5 烟草遗传转化烟草种子经75%乙醇和次氯酸钠消毒, 无菌水洗净后播于1/2 MS0基本培养基上生长4~5周, 利用叶盘法转化烟草。将携带pAhDGAT2a:GUS表达载体的农杆菌于28℃, 200转 min-1振荡培养至对数生长期。取烟草叶片, 剪成小块(0.5 cm × 0.5 cm)置MS0重悬的菌液中15 min, 取出后用无菌滤纸吸干水分。在MS分化培养基上暗培养2 d后取出, 于MS选择培养基(含100 mg L-1 kanamycin)上诱导长出丛生芽, 将丛生芽切下放入伸长培养基长至3~5 cm时, 转移到生根培养基使其生根。将生根后的幼苗移入盛有无菌土的花盆, 温室常规管理。
1.6 阳性植株的分子检测利用CTAB法提取转基因烟草叶片的DNA, 利用引物PD2F/PD2R进行PCR检测。将阳性烟草的幼苗和其他组织器官加入GUS染液, 37℃保温16 h。用70%乙醇冲洗浸泡, 在体视解剖镜下观察染色情况并照相。

2 结果与分析2.1 pAhDGAT2a启动子克隆与测序利用GenomeWalking试剂盒, 经过3轮扩增得到pAhDGAT2a的核苷酸片段(图1), 长度1200 bp左右。将该序列连接到pMD18-T载体上测序表明, 该序列为AhDGAT2a基因的启动子序列。
图1
Fig. 1
Figure OptionViewDownloadNew Window
图1 pAhDGAT2a的两轮扩增结果
M: DL2000; A: 第2轮扩增结果; B: 第3轮扩增结果。Fig. 1 PCR products of pAhDGAT2a promoter
M: DL2000; A: products of the second round PCR; B: products of the third round PCR.


2.2 pAhDGAT2a启动子的序列分析PlantCARE分析显示该序列含有126个TATA-box和22个CAAT-box元件, 符合启动子的一般特点。该启动子序列含有多个与胁迫和防御相关的顺式作用元件, 主要包括一个参与干旱应答反应的MBS元件, 3个参与高温应答反应的HSE元件, 2个参与胁迫和防御应答反应的TC-rich repeats。另外还含有3种激素应答元件, 包括2个激素应答元件TGA-元件, 2个茉莉酸应答元件CGTCA- motif和TGACG-motif, 一个赤霉素应答元件GARE- motif。该启动子还含有真菌激活子应答元件W1-box及一些光应答元件(Sp1、I-box、GT1-motif、ACE和MNF1)。这表明AhDGAT2a的表达调控可能受多种因素的影响。
2.3 烟草的遗传转化与分子检测先利用卡那霉素初步筛选, 再利用PCR方法检测转基因烟草株系(图2)。结果表明, 有14个株系在1200 bp左右出现条带, 该片段与目的条带大小一致, 表明我们得到了阳性转基因烟草株系。
2.4 转基因烟草的GUS染色利用GUS染色方法检测GUS基因在T2代转基因烟草的各组织器官表达的结果表明(图3), GUS在转基因烟草的营养和生殖器官均有表达, 其中在柱头、花药和幼嫩种子中表达量较高(图3-G, H), 而在花丝和花柱中则基本不表达(图3-F, G)。

3 讨论TAG是大多数植物和动物体内最重要的油脂贮藏形式, DGAT是TAG合成反应的限速酶, 对于种子油脂合成非常重要[17, 18]。在拟南芥等多种植物中过量表达DGAT基因均能显著提高种子的含油量[17, 19, 28, 29, 30]。我们实验室前期从花生中克隆得到了DGAT2基因, 将其与CaMV35S启动子相连接, 构建植物表达载体转化烟草并对其进行了功能验证, 发现其能提高转基因烟草的总脂肪酸含量[25]
启动子是一段位于结构基因5° 端上游区的DNA序列, 能够使RNA聚合酶与之结合并起始目标基因转录, 是转录水平上基因表达调控的关键部位。启动子上的顺式作用元件通常含有TATA-box、CAAT-box和GC-box元件, 其中TATA-box是启动子上最具特征的序列。本研究的pAhDGAT2a中含有126个TATA-box和22个CAAT-box元件, 表明其具有典型启动子的特征。
不同的启动子都具有自己特异的调节序列, 如USE、MSP等。大多数绿色植物都包含若干个光应答元件(light response element), 如G-box[31, 32]、I-box[31]、GT1元件(或GATA元件)[33]、AT富含元件[34, 35]、Z-box[36]等, 这些作用元件对光调控的转录激活是必需的[37]。在pAhDGAT2a中也含有一些光应答元件, 而前期研究表明AhDGAT2基因在花生叶片中具有一定的表达量[25], 这些结果表明AhDGAT2的表达调控可能会受到光信号的影响。pAhDGAT2a还包含激素响应元件和胁迫诱导元件, 预示AhDGAT2a的表达受激素诱导, 并且在胁迫响应中起一定的作用。我们前期分析了AhDGAT2基因在不同胁迫(冷、干旱、盐、紫外照射、ABA、机械损伤和病害)下的表达模式, 结果表明AhDGAT2基因在受到机械损伤时表达下调最明显, 在冷、干旱、盐和紫外照射胁迫下表达量略有下降, 而在ABA处理和病害胁迫下表达显著上调[25]。这恰好与pAhDGAT2a含有多种胁迫相关元件相吻合。在他人研究中也有类似报道, 如麻风树的种子特异性启动子JcMFT1受脱落酸诱导, 是由于其含有ABA应答元件、G-box、RY repeat等元件[38]; Xu等[39]在中国华东野生葡萄中克隆了一个受白粉病和赤星病诱导表达的VpSTS诱导型启动子, 通过序列分析发现该启动子含有Box-W1、TC-rich element、ABRE、MBS、LTR等特殊元件。
图2
Fig. 2
Figure OptionViewDownloadNew Window
图2 PCR检测转基因烟草
1~18: 转基因烟草株系; M: DL2000; +: 阳性对照; -: 阴性对照; WT: 野生型烟草。Fig. 2 PCR detection of the transgenic tobacco lines
1-18: transgenic tobacco lines; M: DL2000; +: positive control; -: negative control; WT: wide type tobacco.

图3
Fig. 3
Figure OptionViewDownloadNew Window
图3 转基因烟草的GUS染色图
A~D: 野生型烟草; E~H: 转基因烟草; A, E: 烟草幼苗; B, F: 花; C, G: 花药和柱头; D, H: 未成熟的种子。A~C, E~G比例尺为1 cm; D, H比例尺为1 mm。Fig. 3 GUS staining of the transformed tobacco lines
A-D, wild type tobacco; E-H, transgenic tobacco. A and E: seedlings; B and F: flowers; C and G: anthers and stigmas; D and H: immature seeds. Bars = 1 cm in A-C and E-G; bars = 1 mm in D, H.

目前关于植物DGAT1基因组织特异性表达的研究有较多报道, 而关于植物DGAT2基因的组织器官特异性表达的研究较少。普遍认为大多数高等植物的DGAT1基因在各组织器官中均表达, 而DGAT2则与植物种子中特殊脂肪酸的积累有关。拟南芥DGAT1在发育中的种子、花瓣、花芽中表达量高, 而在叶和茎中表达量低[19], 大多数双子叶植物例如大豆、斑鸠菊、油菜的表达模式与拟南芥相似[14, 17, 40], 而旱金莲DGAT1只在发育的种子中表达[41]。桐树DGAT2基因在种子发育中期被较强诱导表达, 而在其他器官中表达量很低, 表明桐树DGAT2与种子中脂肪酸积累直接相关[28]。斑鸠菊、大戟、琉璃苣和蓖麻的DGAT2基因在种子发育早期高表达, 而大豆DGAT2基因在种子中的表达量很低。相反, 大豆DGAT1基因在种子中表达量较高[42]。我们前期关于AhDGAT2基因组织器官特异性表达模式研究表明, 该基因在花生的各个器官都表达, 但是在叶、花以及种子发育前期表达量较高[25]。本研究中将pAhDGAT2a构建GUS植物表达载体并转化烟草, 结果发现该序列不仅能正确启动GUS基因表达, 而且在转基因烟草的各个器官中都表达, 与我们前期研究结果一致, 但是与桐树DGAT2和大豆DGAT2的表达特点显著不同。本研究中GUS活性在转基因烟草柱头和花药中较强表达, 显示出AhDGAT2a基因在花生授粉中的重要性, 这一点在其他文献中未见报道。这些研究均表明, DGAT1DGAT2基因的组织器官特异性表达模式因物种而异。二者不仅在植物种子脂肪酸合成中具有重要作用, 同时对于其他组织器官内的脂肪酸合成(比如维持细胞膜脂类的动态平衡), 甚至对于植物个体的整个发育过程都具有十分重要的作用。
The authors have declared that no competing interests exist.


参考文献View Option
原文顺序
文献年度倒序
文中引用次数倒序
被引期刊影响因子

[1]Broun P, Gettner S, Somerville C. Genetic engineering of plant lipids. Annu Rev Nutr, 1999, 19: 197-216[本文引用:1]
[2]Jung S, Swift D, Sengoku E, Patel M, Teulé F, Powell G, Moore K, Abbott A. The high oleate trait in the cultivated peanut [Arachis hypogaea L. ]: I. Isolation and characterization of two genes encoding microsomal oleyl-PC desaturases. Mol Gen Genet, 2000, 263: 796-805[本文引用:1]
[3]Yu Y H, Ginsberg H N. The role of acyl-CoA: diacylglycerol acyilransferase (DGAT) in energy metabolism. Ann Med, 2004, 36: 252-261[本文引用:1]
[4]Zou J, Wei Y D, Jako C, Kumar A, Selvaraj G, Taylor D C. The Arabidopsis thaliana TAG1 mutant has a mutation in a diacylglycerol acyltransferase gene. Plant J, 1999, 19: 645-653[本文引用:1]
[5]Feussner I, Kuhn H, Wasternack C. Lipoxygenase-dependent degradation of storage lipids. Trends Plant Sci, 2001, 6: 268-273[本文引用:1]
[6]Lu C F, Hills M J. Arabidopsis mutants deficient in diacylglycerol acyltransferase display increased sensitivity to abscisic acid, sugars and osmotic stress during germination and seedling development. Plant Physiol, 2002, 129: 1352-1358[本文引用:1]
[7]He X, Chen G Q, Lin J T, Mckeon T A. Diacylglycerol acyltransferase activity and triacylglycerol synthesis in germinating castor seed cotyledons. Lipids, 2006, 41: 281-285[本文引用:1]
[8]Weiss S B, Kennedy E P, Kiyasu J Y. The enzymatic synthesis of triglycerides. J Biol Chem, 1960, 235: 40-44[本文引用:1]
[9]Saha S, Enugutti B, Rajakumari S, Rajadekharan R. Cytosolic triacylglycerol biosynthetic pathway in oilseeds. Molecular cloning and expression of peanut cytosolic diacylglycerol acyltransferase. Plant Physiol, 2006, 141: 1533-1543[本文引用:4]
[10]Lehner R, Kuksis A. Biosynthesis of triacylglycerols. Prog Lipid Res, 1996, 35: 169-201[本文引用:1]
[11]Hofmann K. A superfamily of membrane-bound O-acyltransferases with implications for WNT signaling. Trends Biochem Sci, 2000, 25: 111-112[本文引用:1]
[12]Cases S, Smith S J, Zheng Y W. Identification of a gene encoding an acyl CoA: diacylglycerol acyltransferase, a key enzyme in triacylglycerol synthesis. Proc Natl Acad Sci USA, 1998, 95: 13018-13023[本文引用:1]
[13]Bouvier P, Benveniste P, Oelkers P, Sturley S L, Schaller H. Expression in yeast and tobacco of plant cDNAs encoding acyl CoA: diacylglycerol acyltransferase. Eur J Biochem, 2000, 267: 85-96[本文引用:1]
[14]Sand ager L, Gustsvsson M H, Stehl U, Dahlqvist A, Wiberg E, Banas A, Lenman M, Ronne H, Stymne S. Storage lipid synthesis is non-essential in yeast. J Biol Chem, 2002, 277: 6478-6482[本文引用:2]
[15]Stone S, Levin M, Farese R V. Membrane topology and identification of key functional amino acid residues of murine acyl-CoA: diacylglycerol acyltransferase-2. J Biol Chem, 2006, 281: 40273-40282[本文引用:1]
[16]Shockey J, Gidda S D, Chapital, Kuan J, Dhanoa P, Bland J, Rothstein S, Mullen R, Dyer J. Tung tree DGAT1 and DGAT2 have nonredundant functions in triacylglycerol biosynthesis and are localized to different subdomains of the endoplasmic reticulum. Plant Cell, 2006, 18: 2294-2313[本文引用:1]
[17]Hobbs D H, Lu C, Hills M J. Cloning of a cDNA encoding diacylglycerol acyltransferase from Arabidopsis thaliana and its functional expression. FEBS Lett, 1999, 452: 145-149[本文引用:4]
[18]Lu C L, Noyer S B, Hobbs D H, Kang J, Wen Y, Kratchus D, Hills M J. Expression pattern of diacyl-glycerol acyltransferase-1, an enzyme involved in triacylglycerol biosynthesis, in Arabidopsis thaliana. Plant Mol Biol, 2003, 52: 31-41[本文引用:2]
[19]Jako C, Kumar A, Wei Y D, Zou J, Barton D L, Giblin E M, Covello P S, Taylor D C. Seed-specific over-expression of an Arabidopsis cDNA encoding a diacylglycerol acyltransferase enhance seed oil content and seed weight. Plant Physiol, 2001, 126: 861-874[本文引用:3]
[20]Zheng P, Allen W, Roesler K, Williams M, Zhang S, Li J, Glassman K, Ranch J, Nubel D, Solawetz W, Bhattramakki D, Llaca V, Deschamps S, Zhong G Y, Tarczynski, M C, Shen B. A phenylalanine in DGAT is a key determinant of oil content and composition in maize. Nat Genet, 2008, 40: 367-372[本文引用:1]
[21]Lardizabal K, Effertz R, Levering C, Jennifer M, Pedroso M C, Tom J, Eric A, Ken G, Kristen B. Expression of Umbelopsis ramanniana DGAT2A in seed increases oil in soybean. Plant Physiol, 2008, 148: 89-96[本文引用:1]
[22]Burgal J, Shockey J, Lu C, Dyer J, Larson T, Graham I, Browse J. Metabolic engineering of hydroxy fatty acid production in plants: RcDGAT2 drives dramatic increases in ricinoleate levels in seed oil. Plant Biotechnol J, 2008, 46: 1502-1511[本文引用:1]
[23]万书波主编. 花生品质学. 北京: 中国农业科学技术出版社, 2005. pp 2-10
Wan S B. Peanut Quality. Beijing: China Agricultural Science and Technology Publishers, 2005. pp 2-5(in Chinese)[本文引用:1]
[24]廖伯寿. 中国花生油脂产业竞争力浅析. 花生学报, 2003, 32: 11-15
Liao B S. Analysis the competitiveness of Chinese peanut oil industry. J Peanut Sci, 2003, 32: 11-15 (in Chinese)[本文引用:1]
[25]王龙龙. 花生二酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因的克隆与分析. 山东师范大学硕士学位论文, 山东济南, 2010
Wang L L. Cloning and Characterization of Diacylglycerol Acyltransferase (DGAT) Gene in Peanut (Arachis hypogaea L. ). MS Thesis of Shand ong Normal University, Jinan, China, 2010 (in Chinese with English abstract)[本文引用:6]
[26]Peng Z Y, Li L, Yang L Q, Zhang B, Chen G, Bi Y P. Overexpression of peanut diacylglycerol acyltransferase2 in Escherichia coli. PLoS One, 2013, 8: e61363[本文引用:2]
[27]Chi X, Hu R, Zhang X, Chen M, Chen N, Pan L, Wang T, Wang M, Yang Z, Wang Q F, Yu S L. Cloning and functional analysis of three diacylglycerol acyltransferase genes from peanut (Arachis hypogaea L. ). PLoS One, 2014, 9: e105834[本文引用:1]
[28]Shockey J M, Gidda S K, Chapital D C, Kuan J C, Dhanoa P K, Bland J M, Rothstein S J, Mullen R T, Dyera J M. Tung tree DGAT1 and DGAT2 have nonredundant functions in triacylglycerol biosynthesis and are localized to different subdomains of the endoplasmic reticulum. Plant Cell, 2006, 18: 2294-2313[本文引用:2]
[29]Perry H J, Harwood J L. Changes in the lipid content of developing seeds of Brassica napus. Phytochemistry, 1993, 32: 1411-1415[本文引用:1]
[30]Lock Y Y, Snyder C L, Zhu W, Siloto R M, Weselake R J, Shah S. Antisense suppression of type 1 diacylglycerol acyltransferase adversely affects plant development in Brassica napus. Physiol Plant, 2009, 137: 67-74[本文引用:1]
[31]Donald R G, Cashmore A R. Mutation of either G box or I box sequences profoundly affects expression from the Arabidopsis rbcS-1A promoter. EMBO J, 1990, 9: 1717-1726[本文引用:2]
[32]Puente P, Wei N, Deng X W. Combinatorial interplay of promoter elements constitutes the minimal determinants for light and developmental control of gene expression in Arabidopsis. EMBO J, 1996, 15: 3732-3743[本文引用:1]
[33]Lam E, Chua N H. Gt1 binding site confers light-responsive expression in transgenic tobacco. Science, 1990, 248: 471-474[本文引用:1]
[34]Chen P W, Lu C A, Yu T S, Teng T H, Wang C S, Yu S M. Rice alpha-amylase transcriptional enhancers direct multiple mode regulation of promoters in transgenic rice. J Biol Chem, 2002, 277: 13641-13649[本文引用:1]
[35]杨予涛. 一个光合组织特异表达启动子的克隆、功能分析及其转录因子的鉴定. 山东农业大学博士学位论文, 山东泰安, 2005
Yang Y T. Isolation and Characterization of A Strong Specific Promoter in Photosynthetic Tissues and Identification of a bZIP Transcription Factor. PhD Dissertation of Shand ong Agricultural University, Tai’an, China, 2005 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1]
[36]Hoffmann M, Binder S. Functional importance of nucleotide identities within the peat p9 promoter sequence. Mol Biol, 2002, 320: 943-950[本文引用:1]
[37]Yadav V, Kundu S, Chattopadhyay D, Negi P, Wei N, Deng X W, Chattopadhyay S. Light regulated modulation of Z-box containing promoters by photoreceptors and downstream regulatory components, COP1 and HY5, in Arabidopsis. Plant J, 2002, 31: 741-753[本文引用:1]
[38]Tao Y B, Luo L, He L L, Ni J, Zeng F X. A promoter analysis of MOTHER OF FT AND TFL1 (JcMFT1), a seed-preferential gene from the biofuel plant Jatropha curcas. Plant Res, 2014, 127: 513-524[本文引用:1]
[39]Xu W, Yu Y, Ding J, Hua Z, Wang L. Characterization of a novel stilbene synthase promoter involved in pathogen- and stress- inducible expression from Chinese wild Vitis pseudoreticulata. Planta, 2010, 231: 475-487[本文引用:1]
[40]Wang H, Zhang J, Gai J, Chen S. Cloning and comparative analysis of the gene encoding diacylglycerol acyltransferase from wild type and cultivated soybean. Theor Appl Genet, 2006, 112: 1086-1097[本文引用:1]
[41]Xu J, Francis T, Mietkiewska E, Giblin E M, Barton D L, Zhang Y, Zhang M, Taylor D C. Cloning and characterization of an acyl-CoA-dependent diacylglycerol acyltransferasel (DGATl) gene from Tropaeolum majus, and a study of the functional motifs of the DGAT protein using site-directed mutagenesis to modify enzyme activity and oil content. Plant Biotechnol J, 2008, 6: 799-818[本文引用:1]
[42]Li R Z, Yu K S, Hildebrand D F. DGAT1, DGAT2 and PDAT expression in seeds and other tissues of epoxy and hydroxy fatty acid accumulating plants. Lipids, 2010, 45: 145-157[本文引用:1]
婵犵數濮烽弫鍛婃叏閻戣棄鏋侀柟闂寸绾惧鏌i幇顒佹儓闁搞劌鍊块弻娑㈩敃閿濆棛顦ョ紓浣哄С閸楁娊寮婚悢铏圭<闁靛繒濮甸悘鍫㈢磼閻愵剙鍔ゆい顓犲厴瀵鎮㈤悡搴n槶閻熸粌绻掗弫顔尖槈閵忥紕鍘介梺瑙勫劤椤曨參鍩ユ径瀣ㄤ簻妞ゆ挾鍋為崑銉╂煙閾忣偆鐭婃い鏇樺劚铻栧┑鐘辩窔閸嬫姊虹拠鈥虫灍闁挎洏鍨介獮鍐煛閸愵亞锛滃┑鈽嗗灣閸樠呮暜妤e啯鈷掑ù锝嚽归ˉ蹇涙煕鐎n亝鍣介柟骞垮灲瀹曠喖顢涘顓熜氶梻浣瑰缁诲倿藝娴煎瓨鍋傛繛鍡樺灍閸嬫挾鎲撮崟顒傤槬濠电偛鐪伴崐婵嬪春閵忋倕閱囬柍鍨涙櫅娴滈箖鎮峰▎蹇擃仾缂佲偓閸愵亞纾兼い鏃囧亹鏁堝Δ鐘靛仜缁绘ê鐣烽妸鈺佺骇闁瑰鍋涚粊鑸典繆閻愵亜鈧牠骞愭ィ鍐ㄧ獥闁逛即鍋婇弫濠囩叓閸ャ劎鈯曢柍閿嬪浮閺屾稓浠﹂幑鎰棟闂侀€炲苯澧柛銏$叀濠€渚€姊洪幖鐐插姶闁诲繑绋戦埥澶愬閻樻妲规俊鐐€栭崝鎴﹀磹閺嵮€鏋旈柟顖嗗本瀵岄梺闈涚墕濡宕告繝鍥ㄧ厱閻庯綆鍋呯亸浼存煏閸パ冾伃妞ゃ垺娲熼弫鎰板炊閳哄啯婢栨繝鐢靛Х椤d粙宕滃┑瀣畺闁稿瞼鍋涢弰銉╂煃閳轰礁鏆炲┑顖涙尦閺屟嗙疀閺囩喎娈屽Δ鐘靛亹閸嬫挸鈹戦悩娈挎殰缂佽鲸娲熷畷鎴﹀箣閿曗偓绾惧綊鏌″搴″箺闁稿顑嗘穱濠囧Χ閸涱喖娅ら梺绋款儜缁绘繈寮婚弴銏犻唶婵犻潧娲ㄩ埞娑欑節濞堝灝鏋熷┑鐐诧躬瀵鍩勯崘銊х獮婵犵數濮寸€氼參鎯冮幋婵冩斀闁斥晛鍟徊濠氭煟濡や焦宕岀€殿喖顭烽弫鎾绘偐閼碱剦妲伴梻浣瑰缁诲倿骞婂鍡欑彾闁哄洨鍠撶弧鈧梺姹囧灲濞佳嗏叿闂備焦鎮堕崝宥咁渻娴犲鏋侀柛鎰靛枛椤懘鏌eΟ铏逛粵婵炲牓绠栧娲川婵犲嫮鐣甸柣搴㈠嚬閸o絽顕i幎钘夊耿婵炴垶鐟ч崢閬嶆⒑閸濆嫭鍌ㄩ柛鏂挎湰閺呭爼顢欓悾宀€顔曢梺鍓插亝缁诲嫰鎮為崨濠冨弿濠电姴鍟妵婵堚偓瑙勬磸閸斿秶鎹㈠┑瀣<婵絾瀵уú妯兼崲濞戞埃鍋撳☉娆嬬細闁活厼鐭傞弻娑氣偓锝冨妼閳ь剚娲熼幃鎯х暋閹冲﹥妞介、鏃堝礋椤撴繄绀堥梻鍌欑閹碱偊宕愰崼鏇炵?闁哄被鍎荤紞鏍偓骞垮劚椤︿即鍩涢幋锔藉仭婵炲棗绻愰鈺呮煕閺傝鈧繈寮婚敐鍡楃疇闂佸憡鏌ㄧ€涒晝绮嬪澶婄濞撴艾娲﹂弲婵嬫⒑闂堟稓澧曟繛灞傚姂閺佸秴饪伴崘锝嗘杸闁圭儤濞婂畷鎰板即閵忕姷鏌堝銈嗗姧缁犳垿宕欓悩缁樼厸闁告劑鍔庢晶娑㈡煟閹惧鎳冩い顏勫暟閳ь剨缍嗘禍顏堫敁濡ゅ懏鐓冮悹鍥皺婢ф稒銇勯妸锝呭姦闁诡喗鐟╁鍫曞箣閻樿京绀夊┑掳鍊楁慨鐑藉磻濞戞◤娲敇閳ь兘鍋撴担绯曟瀻闁规儳鍘栫槐鍫曟⒑閸涘﹥澶勫ù婊愮秮瀹曟椽宕ㄧ€涙ǚ鎷婚梺绋挎湰閼归箖鍩€椤掑嫷妫戠紒顔肩墛缁楃喖鍩€椤掑嫮宓侀柡宥庡弾閺佸啴鏌ㄩ弴妤€浜剧紒鐐劤濠€閬嶅箟閹间焦鍋嬮柛顐g箘閻熸煡姊虹粙娆惧劀缂佺粯绻傞锝夊醇閺囩偤鍞跺┑顔斤供閸樹粙鎮甸弴鐑嗘富闁靛牆楠告禍婵囩箾閼碱剙鏋涚€殿喖顭锋俊鎼佸煛閸屾矮绨介梻浣呵归張顒傜矙閹达富鏁傞柨鐕傛嫹
2婵犵數濮烽弫鍛婃叏閻戣棄鏋侀柟闂寸绾惧鏌i幇顒佹儓闁搞劌鍊块弻娑㈩敃閿濆棛顦ョ紓浣哄У婢瑰棛妲愰幒鏂哄亾閿濆骸浜剧紒鎵佹櫆缁绘稑顔忛鑽ょ泿闁诡垳鍠栧娲礃閸欏鍎撳銈嗗灥濞层劎鍒掑▎鎺旂杸婵炴垶鐟㈤幏娲⒑闂堚晛鐦滈柛妯恒偢瀹曟繄鈧綆鍋佹禍婊堟煏婵炲灝鍔滄い銉e灮閳ь剝顫夊ú婊堝极婵犳艾鏄ラ柍褜鍓氶妵鍕箳閹存繍浠鹃梺鎶芥敱閸ㄥ潡寮诲☉妯锋婵鐗嗘导鎰節濞堝灝娅欑紒鐘冲灴濠€浣糕攽閻樿宸ラ柟鍐插缁傛帗娼忛埞鎯т壕閻熸瑥瀚粈鍐╀繆閻愭壆鐭欑€殿噮鍋婇獮妯肩磼濡桨姹楅柣搴ゎ潐濞叉牕煤閵堝宓佹俊銈呮噺閳锋帒銆掑锝呬壕濠电偘鍖犻崨顔煎簥闂佸壊鍋侀崕杈╁瑜版帗鐓涚€规搩鍠掗崑鎾翠繆閹绘帞澧㈤柟鍙夋倐瀵噣宕煎┑濠冩啺闂備焦瀵х换鍌炈囬鐐村€挎繛宸簼閻撴洟鏌熼弶鍨倎缂併劌銈搁弻娑㈡晲鎼粹€崇缂備浇椴搁幐濠氬箯閸涙潙绀堥柟缁樺笒婢瑰牓姊绘担鐟邦嚋婵炶闄勭粋宥夘敂閸曢潧娈ㄥ銈嗗姧缁犳垹澹曟總鍛婄厽闁归偊鍘界紞鎴炵箾閸喎濮嶆慨濠冩そ瀹曟﹢宕f径瀣壍闂備礁鎽滄慨鐢告嚌閹冪カ闂備礁鎲¢〃鍫ュ磻閹版澘缁╁ù鐘差儐閻撳啴鏌﹀Ο渚Ч妞ゃ儲绮岄湁婵犲﹤鎳庢禒婊勩亜椤撯€冲姷妞わ箒娅曢妵鍕Ω閵夘垵鍚悗娈垮櫘閸嬪棝鍩€椤掑﹦绉甸柛鎾寸〒婢规洟鎸婃竟婵嗙秺閺佹劖寰勭€n偊鏁┑鐘愁問閸犳牠宕愰幖浣圭畳婵犵數濮撮敃銈呂涘Δ鍛亗闁归偊鍎惔銊ョ倞鐟滄繈宕濋悢鍏肩厓鐟滄粓宕滃杈╃煓闁圭儤娲橀幊灞解攽閻樻剚鍟忛柛銊ゅ嵆椤㈡岸顢橀悩鎰佹綗闂佸湱鍎ら崹鐔肺i崼鐔稿弿婵°倐鍋撴俊顐n殜瀹曟粍娼忛埡鍐紳闂佺ǹ鏈銊ョ摥闂備焦瀵уú蹇涘磿閼碱剛鐭氶弶鍫涘妿缁♀偓闂佹悶鍎撮崺鏍疾濠靛鈷戦梻鍫熺〒婢ф洟鏌熷畡閭﹀剶鐎殿喗濞婇、姗€濮€閳锯偓閹锋椽姊洪崨濠冨磩閻忓繑鐟╁畷銏犫槈閵忥紕鍘遍梺闈浨归崕鎶藉春閿濆洠鍋撶憴鍕婵$偘绮欏畷娲焵椤掍降浜滈柟鍝勭Ч濡惧嘲霉濠婂嫮鐭掗柡宀€鍠愬ḿ蹇涘礈瑜忚摫缂備胶铏庨崣鈧柛鈺傜墵婵$敻宕熼娑欐珕闂佸吋绁撮弲婵嬪汲閵堝鈷戦柛婵嗗濠€鎵磼鐎n偄鐏撮柛鈹垮灪閹棃濡堕崶鈺傛緫闂備礁鎼ú銊﹀垔椤撱垹鑸归柛锔诲幘绾句粙鏌涚仦鍓ф噮缂佹劖姊荤槐鎾诲磼濞戞粌顥濋柧鑽ゅ仱閺屾盯寮撮妸銉︾亾婵炲瓨绮嶉悷鈺侇潖缂佹ɑ濯撮柛娑橈工閺嗗牆鈹戦悙棰濆殝缂佺姵鎸搁悾鐑藉閿濆啩姹楅梺鍦劋閸ㄥ綊鏁嶅☉銏♀拺闁革富鍘奸崝瀣亜閵娿儲顥㈤柛鈺傜洴楠炲鏁傞悾灞藉箞婵犵數濞€濞佳兾涘Δ鍜佹晜闁冲搫鎳忛悡鍐喐濠婂牆绀堟繛鍡樺灩缁€濠傗攽閻樺弶鎼愮紒鐘崇墵濮婃椽宕归鍛壉缂傚倸绉村ú顓㈠蓟瀹ュ浼犻柛鏇ㄥ亗缁ㄨ棄鈹戦悙璺轰汗闁哥姴閰i崺鐐哄箣閿旂粯鏅╅柣鐔哥懄鐢偤骞婇幘璇茬厺闁哄倸绨卞Σ鍫ユ煏韫囧ň鍋撻崘鎻掝棗濠电姴鐥夐弶搴撳亾閹版澘纾婚柟鍓х帛閻撳啴鎮峰▎蹇擃仼闁诲繑鎸抽弻鐔碱敊鐟欏嫭鐝氬Δ鐘靛仦閹瑰洭鐛幒妤€骞㈡俊鐐村劤椤ユ岸姊绘担鍝ョШ婵☆偉娉曠划鍫熺瑹閳ь剟寮婚妸鈺佄ч柛娑变簼閺傗偓闂備胶绮摫鐟滄澘鍟村鎼佸Χ閸℃瑧顔曢梺鍓插亝缁酣鎯屽▎鎾寸厸鐎光偓鐎n剛袦濡ょ姷鍋涘ú顓€€佸Δ浣瑰闁告瑥顦辨禍鐐烘⒒閸屾瑧鍔嶉柟顔肩埣瀹曟劕螖閸涱厾鐛ラ梺褰掑亰閸犳鐣烽崣澶岀瘈闂傚牊渚楅崕蹇涙煟閹烘垹浠涢柕鍥у楠炴帡骞嬪┑鎰偅闂備胶绮敮妤€顪冩禒瀣摕婵炴垯鍨圭粻娑欍亜閺嶃劎銆掗柕鍡楋躬濮婂搫煤鐠囨彃绠哄銈冨妼閹虫﹢宕洪悙鍝勭闁挎梻绮弲鈺冪磽娴e湱鈽夋い鎴濇閹箖宕奸弴鐔叉嫼缂傚倷鐒﹂敃鈺佲枔閺冨倻纾肩紓浣姑粭褔鏌涢幒鎾虫诞鐎规洖銈搁幃銏☆槹鎼达絿宓侀梻浣筋嚙閸戠晫绱為崱娑樼婵炴垯鍩勯弫濠囨煛閸ャ儱鐏柍閿嬪灴閺岋綁鎮㈤悡搴濆枈闂佹悶鍊楅崰搴ㄥ煘閹达富鏁婇柣鎰靛墯濮e牓鎮楀▓鍨灍濠电偛锕畷娲晸閻樿尙锛滃┑鐘诧工閹峰宕惔銊︹拺闁煎鍊曞瓭濠电偛锛忛崶褏顦板銈嗗姦閸嬪倻妲愰敓锟�547闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾瑰瀣捣閻棗霉閿濆浜ら柤鏉挎健濮婃椽顢楅埀顒傜矓閺屻儱鐒垫い鎺嗗亾闁稿﹤婀辩划瀣箳閺傚搫浜鹃柨婵嗙凹缁ㄤ粙鏌ㄥ☉娆戞创婵﹥妞介幃鐑藉级鎼存挻瀵栫紓鍌欑贰閸n噣宕归崼鏇炴槬婵炴垯鍨圭粻铏繆閵堝嫯鍏岄柛姗€浜跺娲传閸曨剙顦╁銈冨妼濡鍩㈠澶婂窛閻庢稒岣块崢浠嬫椤愩垺绁紒鎻掋偢閺屽洭顢涢悙瀵稿幐閻庡厜鍋撻悗锝庡墮閸╁矂鏌х紒妯煎⒌闁诡喗顨婇弫鎰償閳ヨ尙鐩庢俊鐐€曟蹇涘箯閿燂拷4婵犵數濮烽弫鍛婃叏閻戣棄鏋侀柟闂寸绾惧鏌i幇顒佹儓闁搞劌鍊块弻娑㈩敃閿濆棛顦ョ紓浣哄У婢瑰棛妲愰幒鏂哄亾閿濆骸浜剧紒鎵佹櫆缁绘稑顔忛鑽ゅ嚬闂佸搫鎳忛悡锟犲蓟濞戙垹唯闁靛繆鍓濋悵鏍ь渻閵堝繐鐦滈柛銊ㄦ硾椤繐煤椤忓懎浠梻渚囧弿缁犳垵鈻撻崼鏇熲拺缂佸顑欓崕鎴︽煕閻樺磭澧电€规洘妞芥慨鈧柕鍫濇噽閻嫰姊洪柅鐐茶嫰婢ф潙鈹戦敍鍕毈鐎规洜鍠栭、娆撳礈瑜庡鎴︽⒒娴g瓔娼愰柛搴㈠▕椤㈡岸顢橀埗鍝勬喘閺屽棗顓奸崱蹇斿缂傚倷绀侀鍡涱敄濞嗘挸纾块柟鎵閻撴瑩鏌i悢鍝勵暭闁瑰吋鍔欓弻锝夋晲閸涱厽些濡炪値鍋呯划鎾诲春閳ь剚銇勯幒鎴濐仴闁逞屽厸缁舵艾顕i鈧畷鐓庘攽閸℃埃鍋撻崹顔规斀閹烘娊宕愰弴銏犵柈妞ゆ劧濡囧畵渚€鏌熼幍顔碱暭闁抽攱甯¢弻娑氫沪閸撗勫櫘濡炪倧璁g粻鎾诲蓟濞戞﹩娼╂い鎺戭槸閸撴澘顪冮妶搴″箹闁诲繑绻堥敐鐐测堪閸繄鍔﹀銈嗗坊閸嬫捇鏌i敐鍥у幋妞ゃ垺鐩幃婊堝幢濡粯鐝栭梻鍌欑窔濞佳呮崲閸儱鍨傞柛婵嗗閺嬫柨螖閿濆懎鏆為柍閿嬪灴濮婂宕奸悢鍓佺箒濠碉紕瀚忛崘锝嗘杸闂佺偨鍎村▍鏇㈠窗濮椻偓閺屾盯鍩為崹顔句紙閻庢鍣崳锝呯暦婵傚憡鍋勯柛婵嗗缁犮儵姊婚崒娆掑厡妞ゃ垹锕敐鐐村緞閹邦剛顦梺鍝勬储閸ㄦ椽宕曞鍡欑鐎瑰壊鍠曠花濂告煟閹捐泛鏋涢柡宀嬬秮瀵噣宕奸悢鍛婃闂佽崵濮甸崝褏妲愰弴鐘愁潟闁圭儤鎸荤紞鍥煏婵炲灝鍔ら柣鐔哥叀閹宕归锝囧嚒闁诲孩鍑归崳锝夊春閳ь剚銇勯幒鎴姛缂佸娼ч湁婵犲﹤鎳庢禒锔剧磼閸屾稑娴柟顔瑰墲閹柨螣缂佹ɑ婢戦梻鍌欒兌缁垶宕濆Ο琛℃灃婵炴垶纰嶉~鏇㈡煥閺囩偛鈧綊鎮¢弴鐔剁箚闁靛牆鎳庨顏堟煟濠垫劒绨婚懣鎰版煕閵夋垵绉存慨娑㈡⒑闁偛鑻晶顖滅磼鐎n偄绗╅柟绛嬪亝缁绘繂鈻撻崹顔句画闂佺懓鎲℃繛濠囩嵁閸愩劎鏆嬮柟浣冩珪閻庤鈹戦悙鍙夘棡闁搞劎鏁诲畷铏逛沪閸撗咁啎闁诲孩绋掑玻鍧楁儗閹烘梻纾奸柣妯虹-婢х數鈧鍠涢褔鍩ユ径鎰潊闁绘ḿ鏁搁弶鎼佹⒒娴e懙鍦崲閹版澘绠烘繝濠傜墕閺嬩線鏌″搴″箺闁抽攱鍨圭槐鎺楊敍濞戞瑧顦ㄥ┑鐐叉噺濮婅崵妲愰幒鏃傜<婵☆垵鍋愰悿鍕倵濞堝灝鏋︽い鏇嗗洤鐓″璺号堥崼顏堟煕濞戝崬鐏℃繝銏″灴濮婄粯鎷呴悷閭﹀殝缂備浇顕ч崐鍧楃嵁婵犲啯鍎熸い顓熷笧缁嬪繘姊洪崘鍙夋儓闁瑰啿绻橀崺娑㈠箣閿旂晫鍘卞┑鐐村灦閿曨偊宕濋悢鍏肩厵闁惧浚鍋呯粈鍫㈢磼鏉堛劌绗氭繛鐓庣箻婵℃悂鏁傜紒銏⌒у┑掳鍊楁慨鐑藉磻濞戞碍宕叉慨妞诲亾妤犵偛鍟撮崺锟犲礃閳轰胶褰撮梻浣藉亹閳峰牓宕滈敃鍌氱柈閻庯綆鍠楅埛鎺懨归敐鍛暈闁哥喓鍋涢妴鎺戭潩椤撗勭杹閻庤娲栫紞濠囩嵁鎼淬劌绀堥柛顭戝枟閸犳﹢鏌涢埡瀣瘈鐎规洏鍔戦、娆戞喆閸曨偒浼栭梻鍌欐祰瀹曠敻宕戦悙鐢电煓闁割偁鍎遍悞鍨亜閹哄棗浜鹃梺鍛娚戦悧妤冪博閻旂厧鍗抽柕蹇婃閹风粯绻涙潏鍓у埌闁硅绱曢幏褰掓晸閻樻彃鍤戝銈呯箰濡稓澹曟總鍛婄厪濠电偛鐏濇俊鐓幟瑰⿰鍐╄础缂佽鲸甯¢、姘跺川椤撶偟顔戦柣搴$仛濠㈡ḿ鈧矮鍗抽悰顕€宕堕澶嬫櫍闂佺粯蓱瑜板啰绮绘繝姘拻闁稿本鐟чˇ锕傛煙绾板崬浜為柍褜鍓氶崙褰掑礈濞戙垹绠查柕蹇嬪€曠粻鎶芥煛閸愩劍鎼愮亸蹇涙⒒娴e憡璐¢弸顏嗙磼閵娧冨妺缂佸倸绉撮オ浼村醇閻斿搫骞愰梻浣规偠閸庢椽鎮℃笟鈧、鏃堝醇閻斿皝鍋撻崼鏇熺厾缁炬澘宕崢鎾煕鐎n偅灏柍缁樻崌瀹曞綊顢欓悾灞借拫闂傚倷鑳舵灙妞ゆ垵鎳橀弫鍐Χ婢舵ɑ鏅梺鎸庣箓濞诧箑鐣锋径鎰仩婵炴垶甯掓晶鏌ユ煟鎼粹槅鐓兼慨濠呮閹风娀鍨惧畷鍥e亾婵犳碍鐓曢煫鍥ч鐎氬酣鏌涙繝鍐畵妞ゎ偄绻掔槐鎺懳熺拠宸偓鎾绘⒑閼姐倕鏋涢柛瀣躬瀹曠數鈧綆鍓涚壕钘壝归敐鍛棌闁稿孩鍔欓弻娑㈠Ω閵娿儱濮峰┑鈽嗗亞閸犲酣鈥旈崘顔嘉ч柛鈩兠拕濂告⒑閹肩偛濡肩紓宥咃躬楠炲啴鎮欓崫鍕€銈嗗姉婵磭鑺辨繝姘拺闁革富鍘奸崝瀣煕閳轰緤韬€殿喓鍔嶇换婵嗩潩椤撶偐鍋撻崹顐e弿婵☆垳鍘ф禍楣冩倵濮樼偓瀚�40缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柟闂寸绾剧懓顪冪€n亝鎹i柣顓炴閵嗘帒顫濋敐鍛闂佽姤蓱缁诲啴濡甸崟顖氬唨闁靛ě鍛帓闂備焦妞块崢浠嬪箰妤e啫鐒垫い鎺戝枤濞兼劖绻涢崣澶屽ⅹ閻撱倝鏌曟繛褍鎳嶇粭澶愭⒑閸濆嫬鏆欓柣妤€锕幃鈥斥枎閹惧鍘靛銈嗙墪濡鎳熼姘f灁闁割偅娲橀埛鎴犫偓瑙勬礀濞层劎鏁☉娆愬弿濠电姴鍊荤粔鐑橆殽閻愯尙澧﹀┑鈩冩倐婵$兘顢欓挊澶岀处闂傚倷绶氶埀顒傚仜閼活垱鏅堕悧鍫㈢闁瑰濮甸弳顒侇殽閻愬澧柟宄版嚇瀹曘劍绻濋崟銊ヤ壕妞ゆ帒瀚悡鐔煎箹閹碱厼鐏g紒澶愭涧闇夋繝濠傚暟閸╋綁鏌熼鍝勭伈鐎规洖宕埥澶娾枎韫囧骸瀵查梻鍌欑劍閹爼宕曢懡銈呯筏婵炲樊浜滅壕濠氭煙閹规劦鍤欑紒鈧崒鐐寸厱婵炴垵宕鐐繆椤愶絿鐭岀紒杈ㄦ崌瀹曟帒顫濋钘変壕鐎瑰嫭鍣磋ぐ鎺戠倞闁靛⿵绲肩划鎾绘⒑瑜版帗锛熼柣鎺炵畵瀹曟垿鏁撻悩宕囧帗闂佸憡绻傜€氼參宕宠ぐ鎺撶參闁告劦浜滈弸鏃堟煃瑜滈崜娆撳储濠婂牆纾婚柟鍓х帛閻撴洟鏌¢崶銉ュ濞存粎鍋為妵鍕箻鐎涙ǜ浠㈠┑顔硷攻濡炰粙鐛幇顓熷劅闁挎繂娲ㄩ弳銈嗙節閻㈤潧浠╅悘蹇旂懄缁绘盯鍩€椤掑倵鍋撶憴鍕闁搞劌娼¢悰顔嘉熼懖鈺冿紲濠碘槅鍨甸褔宕濋幒妤佲拺闁煎鍊曢弸鎴︽煟閻旀潙鍔ら柍褜鍓氶崙褰掑礈閻旈鏆﹂柕蹇ョ祷娴滃綊鏌熼悜妯诲皑闁归攱妞藉娲川婵犲嫮鐣甸柣搴㈠嚬閸樺ジ顢欒箛鎾斀閻庯綆鍋嗛崢閬嶆煙閸忚偐鏆橀柛銊ョ秺閹﹢鍩¢崒娆戠畾闂佸憡鐟ラˇ顖涙叏閸ヮ煈娈版い蹇撳暙瀹撳棛鈧娲栭妶鎼佸箖閵忋倕浼犻柛鏇ㄥ亜椤╊剟姊婚崒姘偓鐑芥嚄閸撲焦鍏滈柛顐f礀缁€鍫熺節闂堟稒鐏╂繛宸簻閸愨偓濡炪倖鍔戦崕鍗炵毈缂傚倸鍊风欢锟犲磻閸曨厸鍋撳▓鍨⒋婵﹤顭峰畷鎺戭潩椤戣棄浜惧瀣椤愯姤鎱ㄥ鍡楀幊缂傚倹姘ㄩ幉绋款吋閸澀缃曢梻鍌欑閹碱偊宕锕€纾瑰┑鐘崇閸庢鏌涢埄鍐炬▍鐟滅増甯楅弲鏌ユ煕椤愵偄浜滄繛鍫熺懇濮婃椽鎳¢妶鍛€鹃柣搴㈣壘閻楁挸顕i鈧畷鐓庘攽閸℃瑧宕哄┑锛勫亼閸婃牕螞娓氣偓閿濈偞寰勭仦绋夸壕闁割煈鍋嗘晶鍨叏婵犲嫮甯涢柟宄版嚇瀹曘劍绻濋崒娑欑暭婵犵數鍋為幐鑽ゅ枈瀹ュ鈧啯绻濋崒婊勬闂侀潧绻堥崐鏍偓鐢靛Т椤法鎹勯悜姗嗘!闂佽瀛╁浠嬪箖濡ゅ懎绀傚璺猴梗婢规洟姊绘担鍛婂暈婵炶绠撳畷婊冣槈閵忕姴鍋嶉梻渚囧墮缁夌敻鍩涢幋锔界厱婵犻潧妫楅鈺呮煛閸℃瑥浠遍柡宀€鍠撶划娆撳垂椤旇瀵栧┑鐘灱椤煤閻旇偐宓侀柟閭﹀幗閸庣喐绻涢幋鐑嗘畼闁烩晛閰e缁樼瑹閳ь剙岣胯椤ㄣ儴绠涢弴鐕佹綗闂佸搫娲犻崑鎾诲焵椤掆偓閸婂潡骞婇悩娲绘晢闁稿本绮g槐鏌ユ⒒娴e憡鎯堥柛鐕佸亰瀹曟劙骞栨担绋垮殤濠电偞鍨堕悷锝嗙濠婂牊鐓忛煫鍥э工婢ц尙绱掗埀顒傗偓锝庡枟閻撴瑦銇勯弮鍥舵綈婵炲懎锕ラ妵鍕閳╁啰顦伴梺鎸庣箘閸嬨倝銆佸鈧幃婊堝幢濮楀棙锛呭┑鐘垫暩婵兘寮幖浣哥;闁绘ǹ顕х粻鍨亜韫囨挻顥犵紒鈧繝鍥ㄧ厓鐟滄粓宕滃璺何﹂柛鏇ㄥ灱閺佸啴鏌曡箛濠冩珕闁宠鐗撳铏规嫚閳ヨ櫕鐝紓浣虹帛缁诲牆鐣峰ú顏勭劦妞ゆ帊闄嶆禍婊堟煙閻戞ê鐏ユい蹇d邯閺屽秹鏌ㄧ€n亝璇為梺鍝勬湰缁嬫挻绂掗敃鍌氱闁归偊鍓﹀Λ鐔兼⒒娓氣偓閳ь剛鍋涢懟顖炲储閸濄儳纾兼い鏃傛櫕閹冲洭鏌曢崱鏇狀槮闁宠閰i獮鍥敊閸撗勵潓闂傚倷绀侀幉鈥趁洪敃鍌氱闁挎洍鍋撳畝锝呮健閹垽宕楃亸鏍ㄥ闂備礁鎲¢幐鏄忋亹閸愨晝顩叉繝闈涙川缁犻箖鏌涘▎蹇fШ濠⒀嗕含缁辨帡顢欓崹顔兼優缂備浇椴哥敮鎺曠亽闂傚倵鍋撻柟閭﹀枤濞夊潡姊婚崒娆愮グ妞ゎ偄顦悾宄拔熺悰鈩冪亙濠电偞鍨崺鍕极娴h 鍋撻崗澶婁壕闂佸憡娲﹂崜娑㈠储閸涘﹦绠鹃弶鍫濆⒔閸掓澘顭块悷甯含鐎规洘娲濈粻娑㈠棘鐠佸磭鐩庢俊鐐€栭幐鎾礈濠靛牊鍏滈柛顐f礃閻撴瑥顪冪€n亪顎楅柍璇茬墦閺屾盯濡搁埡鍐毇閻庤娲橀〃濠傜暦閵娾晩鏁嶆繛鎴炨缚濡棝姊婚崒姘偓鎼佸磹妞嬪孩顐芥慨妯挎硾閻掑灚銇勯幒鎴濃偓鍛婄濠婂牊鐓犳繛鑼额嚙閻忥妇鈧娲忛崹浠嬬嵁閺嶃劍濯撮柛锔诲幖楠炴﹢姊绘担鍛婂暈闁告梹岣挎禍绋库枎閹捐櫕妲梺鎸庣箓閹冲寮ㄦ禒瀣叆婵炴垶锚椤忣亪鏌¢崱鈺佸⒋闁哄瞼鍠栭、娆撴偩鐏炴儳娅氶柣搴㈩問閸犳牠鎮ユ總鍝ュ祦閻庯綆鍣弫鍥煟閹邦厽鍎楅柛鐔锋湰缁绘繈鎮介棃娴讹絾銇勯弮鈧悧鐘茬暦閺夎鏃堝川椤旇姤鐝栭梻浣稿暱閹碱偊骞婃惔锝囩焼闁稿本绋撶粻楣冩煙鐎电ǹ浠фい锝呭级閵囧嫰顢曢敐鍡欘槹闂佸搫琚崝宀勫煘閹达箑骞㈡俊顖濇〃閻ヮ亪鏌i悢鍝ョ煂濠⒀勵殘閺侇喖螖閸涱厾鏌ч梺鍝勮閸庢煡鎮¢弴銏$厓闁宠桨绀侀弳鐔兼煙閸愬弶鍤囬柡宀嬬秮楠炴﹢宕樺ù瀣壕闁归棿璁查埀顒佹瀹曟﹢顢欓崲澹洦鐓曢柟鎵虫櫅婵″灝霉閻樻彃鈷旂紒杈ㄥ浮閹瑩顢楁担鍝勫殥缂傚倷绀侀ˇ顖涙櫠鎼淬劌绀嗛柟鐑橆殔閻撴盯鏌涘☉鍗炴灈濞存粍绮庣槐鎺楁倷椤掆偓椤庢粌顪冪€涙ɑ鍊愮€殿喗褰冮埞鎴犫偓锝庡亐閹锋椽姊婚崒姘卞缂佸鎸婚弲鍫曞即閻旇櫣顔曢柣鐘叉厂閸涱垱娈兼俊銈囧Х閸嬫稑螞濠靛鏋侀柟閭﹀幖缁剁偤鎮楅敍鍗炲椤忓綊姊婚崒娆戭槮婵犫偓鏉堛劎浠氭繝鐢靛仜椤曨參宕楀鈧畷娲Ψ閿曗偓缁剁偤鎮楅敐鍐ㄥ缂併劌顭峰娲箰鎼淬埄姊垮銈嗘肠閸愭儳娈ㄥ銈嗘磵閸嬫捇鏌$仦鍓ф创闁糕晝鍋ら獮鍡氼槺濠㈣娲栭埞鎴︽晬閸曨偂鏉梺绋匡攻閻楁粓寮鈧獮鎺懳旀担瑙勭彇闂備線娼ч敍蹇涘焵椤掑嫬纾婚柟鐐墯濞尖晠鏌i幇闈涘妞ゅ骏鎷�28缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柟闂寸绾剧懓顪冪€n亜顒㈡い鎰矙閺屻劑鎮㈤崫鍕戙垻鐥幑鎰靛殭妞ゎ厼娼¢幊婊堟濞戞鏇㈡⒑鏉炴壆顦︽い鎴濇喘楠炲骞栨担鍝ョ潉闂佸壊鍋侀崹鍦矈閿曞倹鈷戦柛娑橈工婵箓鏌涢悩宕囧⒈缂侇喚绮换婵嗩潩椤撶姴骞堥梻浣筋潐瀹曟ḿ浜稿▎鎴犵幓闁哄啫鐗婇悡鍐煟閻旂ǹ顥嬬紒鐘哄皺缁辨帞绱掑Ο鑲╃杽婵犳鍠掗崑鎾绘⒑閹稿海绠撴俊顐g洴婵℃挳骞囬鈺傛煥铻栧┑鐘辫兌閸戝綊姊洪崷顓€褰掑疮閸ф鍋╃€瑰嫭澹嬮弨浠嬫倵閿濆簼绨荤紒鎰洴閺岋絾鎯旈姀鈶╁鐎光偓閿濆懏鍋ョ€规洏鍨介弻鍡楊吋閸″繑瀚奸梻浣告啞缁诲倻鈧凹鍓熷铏節閸ャ劎鍘遍柣搴秵閸嬪懐浜搁悽鐢电<閺夊牄鍔岀粭褔鏌嶈閸撱劎绱為崱娑樼;闁告侗鍘鹃弳锔锯偓鍏夊亾闁逞屽墴閸┾偓妞ゆ帊绶¢崯蹇涙煕閿濆骸娅嶇€规洘鍨剁换婵嬪炊瑜忛悾鐑樼箾鐎电ǹ孝妞ゆ垵鎳樺畷褰掑磼濞戞牔绨婚梺瑙勫閺呮盯鎮橀埡鍌ゆ闁绘劖娼欓悘瀛樻叏婵犲嫮甯涢柟宄版嚇瀹曘劍绻濋崘銊ュ濠电姷鏁搁崑鐘活敋濠婂懐涓嶉柟杈捐缂嶆牗绻濋棃娑卞剰閹喖姊洪崘鍙夋儓闁稿﹤鎲$粋鎺楊敇閵忊檧鎷洪柣搴℃贡婵敻濡撮崘顔藉仯濞达絿鎳撶徊濠氬础闁秵鐓曟い鎰Т閸旀粓鏌i幘瀵告噰闁哄矉缍侀獮鍥濞戞﹩娼界紓鍌氬€哥粔鐢稿垂閸ф钃熼柣鏃傚帶缁€鍌炴煕韫囨洖甯堕柍褜鍓氶崝娆撳蓟閿涘嫪娌柣锝呯潡閵夛负浜滅憸宀€娆㈠璺鸿摕婵炴垯鍨圭粻濠氭煕濡ゅ啫浠滄い顐㈡搐铻栭柣姗€娼ф禒婊呯磼缂佹﹫鑰跨€殿噮鍋婇獮妯肩磼濡粯顏熼梻浣芥硶閸o箓骞忛敓锟�1130缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柟闂寸绾剧懓顪冪€n亝鎹i柣顓炴閵嗘帒顫濋敐鍛闂佽姤蓱缁诲啴濡甸崟顖氬唨闁靛ě鍛帓闂備焦妞块崢浠嬪箲閸ヮ剙钃熸繛鎴欏灩缁犲鏌ょ喊鍗炲⒒婵″樊鍣e娲箹閻愭彃顬夌紓浣筋嚙閻楁挸顕f繝姘╅柍鍝勫€告禍婊堟⒑閸涘﹦绠撻悗姘嚇婵偓闁靛繈鍨婚敍婊堟⒑闁偛鑻晶瀵糕偓瑙勬礃鐢繝骞冨▎鎴斿亾閻㈢櫥褰掔嵁閸喓绡€闁汇垽娼ф禒锕傛煕閵娿儳鍩i柡浣稿暣椤㈡洟鏁冮埀顒傜磼閳哄啰纾藉ù锝堢柈缂傛氨绱掗悩鑽ょ暫闁哄本鐩、鏇㈡晲閸モ晝鏆梻浣虹帛鐢骞冮崒鐐茶摕闁挎稑瀚▽顏嗙磼鐎n亞浠㈤柍宄邦樀閹宕归锝囧嚒闁诲孩鍑归崳锝夊春閳ь剚銇勯幒鎴姛缂佸娼ч湁婵犲﹤瀚惌鎺楁煥濠靛牆浠辩€规洖鐖奸、妤佹媴閸欏顏归梻鍌氬€风欢锟犲磻閸℃稑纾绘繛鎴欏灪閸ゆ劖銇勯弽銊р姇婵炲懐濮磋灃闁挎繂鎳庨弳鐐烘煟閹惧鎳囬柡灞剧洴楠炲鈻庤箛濠備壕闁哄稁鍋€閸嬫挸顫濋悙顒€顏�
相关话题/基因 烟草 种子 序列 植物