沈荔花^1,2, 李碧凉¹, 任勇杰¹, 李程勋¹, 钟永嘉², 方长旬^1,2, 林文雄^1,2,*
1福建农林大学生命科学学院, 福建福州 350002

²福建农林大学农业生态研究所, 福建福州 350002

^* 通讯作者(Corresponding author): 林文雄, E-mail: lwx@fafu.edu.cn 收稿日期:2015-02-06 基金:本研究由国家自然科学基金项目(31271670, 31300336), 教育部高等学校博士学科点专项科研基金优先发展领域(20133515130001)和福建省自然科学基金项目(2010J05045, 2012J01075)资助

摘要基因表达调控是水稻化感作用形成的重要基础。本研究对化感水稻PI312777 ( Oryza sativa L.)的 OsMYB ( CT829537)基因分别进行过表达(overexpression, OE)和RNA干扰(RNAi), 再与稗草( Echinochloa crusgalli, BYG)共培养, 以野生型PI312777为对照。结果发现, 与稗草共培养下 CT829537-OEPI312777的酚类代谢关键酶基因表达上调, 根系及其水培液中的总酚酸浓度增加, 抑草能力增强; 相同处理下 CT829537-RNAiPI312777则相反, 其酚类代谢关键酶基因较野生型植株表达下调, 总酚酸浓度降低, 抑草能力下降。这表明 OsMYB ( CT829537)通过调节化感水稻的酚酸类物质合成进而影响其抑草能力。

关键词:水稻; 化感作用; 转录因子; 酚酸; 基因表达调控
Phenolic Acid Synthesis of Allelopathic Rice Regulated by OsMYB and Its Weed Inhibition
SHEN Li-Hua^1,2, LI Bi-Liang¹, REN Yong-Jie¹, LI Cheng-Xun¹, ZHONG Yong-Jia², FANG Chang-Xun^1,2, LIN Wen-Xiong^1,2,*
1College of Life Sciences, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China

²Institute of Agro-ecology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China


AbstractRegulation of gene expression is a vital process in the formation of rice allelopathy. In this study, allelopathic rice PI312777 ( Oryza sativa L.) was modified by RNA interference (RNAi) and overexpression(OE) technologies to inhibit or enhance gene expression of OsMYB ( CT829537) in PI312777 respectively. The results showed that up-regulation of phenolic synthesis related genes was found in CT829537-OE transgenic PI312777 co-cultured with barnyardgrass (BYG), compared with that in wild type. However, the reverse was true in the CT829537-RNAi transgenic PI312777. Up-regulation of the gene expression in CT829537-OE transgenic PI312777 increased phenolic acids contents in rice root and root exudates, which led to enhance allelopathic inhibition on barnyardgrass. In contrast, decreases of phenolic acids contents and weed inhibition were found in CT829537-RNAi transgenic PI312777. These results implied that CT829537 is responsible for regulating phenolic synthesis in allelopathic rice PI312777 and then enhances allelopathic inhibition on weeds.

Keyword:Rice; Allelopathy; Transcription factor; Phenolic acid; Gene expression regulation
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自20世纪80年代美国农业部的遗传学家Dilday发现了水稻化感抑草现象后, 水稻化感作用成为研究热点之一。化感水稻品种的筛选、化感物质的分离、鉴定及作用机制等是过去几十年水稻化感作用的主要研究内容。Olofsdotter等^[1]、Chou等^{[2, 3]}、Fujii等^[4]和Dilday等^{[5, 6]}在实验室和田间筛选到多种具有强化感潜力的水稻品种, 如PI312777等。水稻化感作用属数量遗传性状, 由多基因控制, 易受环境影响^{[6, 7, 8, 9]}; Jensen等^[10]对化感水稻的QTL定位研究发现有4个相关QTL分布在3条染色体上, 并解释了35%的表型变异。Ebana等^[11]也鉴定到若干个化感作用QTL, 其中以位于第6染色体上的1个QTL贡献最大, 可解释16.1%的表型变异。Xiong等^[12]研究了水稻化感作用的基因上位性效应及其与环境的互作, 发现第2和第5染色体上各有1个加性QTL, 可分别解释6.95%和4.35%的表型变异。Lee等^[13]、Zeng等^[14]也在这些方面作过相关研究, 其结果都表明水稻的化感作用潜力与环境因素关系密切, 易受环境影响。逆境条件下, 化感水稻中与次生物质合成相关的基因表达增强且抑草能力提高^{[6, 7, 8, 9, 15, 16, 17]}。
水稻化感物质的分离与鉴定是水稻化感作用研究的重点与难点。当前, 酚酸类、萜类、黄酮类物质均表现出化感效应, 但尚未见它们在水稻根际中的浓度以及存在时间的报道^{[18, 19, 20, 21]}。最近, 日本研究人员发现momilactone具有较强的抑草潜力, 认为它是一类主要的化感物质^[22]。但未见这些物质在土壤中行为的报道。总之, 何类物质是水稻的主要化感物质迄今尚存在着争议。
尽管如此, 逆境胁迫引起的化感水稻中与次生物质合成、调控相关基因的增强表达已被多数研究所报道。Fang等^{[23, 24]}利用抑制消减杂交技术分离了强化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont在稗草共培下差异表达的基因, 发现化感水稻体内与化感物质合成、植物生长调控、胁迫防御、蛋白降解与修复、信号转导相关的五大类基因均增强表达, 其中一个与信号转导相关的MYB (登录号为CT829537)转录因子在稗草共培下的化感水稻中上调表达。转录因子(transcription factor, TF)也被称为反式作用因子, 它能够与真核生物基因的顺式作用元件发生特异性相互作用, 并与转录有激活或抑制作用的DNA形成结合蛋白。在植物的生长发育中, 转录因子在转录水平上的调节作用可使细胞内基因的表达呈现时间和空间差异, 并最终调控细胞分化。转录因子也是植物逆境信号转导的关键因子, 胁迫刺激其不断合成, 并传递和放大信号, 以调控下游基因的表达, 从而引起植物生理生化的改变。因此, 研究这些转录因子的生物学功能可为揭示植物响应逆境胁迫的基因表达调控过程提供重要基础。本研究采用RNAi和过表达(overexpression)技术分别抑制和增强化感水稻PI312777的CT829537表达, 进而比较这些水稻与野生型植株之间在酚酸类合成相关基因表达和酚酸类化合物含量以及抑草能力上的差异。
1 材料与方法1.1 试验材料以化感水稻品种PI312777 (Oryza sativaL.)为供体材料^[9], 稗草(Echinochloa crusgalli, BYG)为受体材料。
1.2 总RNA的提取供试化感水稻PI312777种子经42℃烘干2 h, 蒸馏水浸泡1 d后进行催芽并播于秧盘。三叶期时移到装有Hoagland完全营养液的塑料盆中, 每周更换营养液。14 d后剪取水稻根系, 采用TRIzol试剂提取根部总RNA, 并参照TIANGEN Quant cDNA合成试剂盒合成cDNA。
1.3 CT829537转录因子过量表达和RNAi载体的构建分别以CT829537转录因子的CDS序列以及5′ 列端的DNA结合位点序列为模板设计该基因的过表达(overexpression)引物和RNAi引物(表1), 以化感水稻PI312777的cDNA为模板进行扩增。将PCR产物克隆到质粒中, 进一步通过酶切将目的片段连接到pTCK303载体上, 分别构建CT829537的RNAi和过表达载体。
表1
Table 1
表1(Table 1)

表1 本研究用于构建载体的引物序列 Table 1 Sequences of primers used for vector construction in this study 引物名称Primer 引物序列Primer sequence (5′ -3′ ) CT829537正向RNAi片段 Forward RNAi fragments of CT829537 FF: ATTATCGGGATCCATGGACGGAGCAGGAGGACGTCCAACTG (Bam H I) FR: GGGCGGGGGTACCGCGAGGCATCGAGCATCTTCTTGTAGTA (KpnI) CT829537反向RNAi片段 Reverse RNAi fragments of CT829537 RF: ATTTCGAGCTCATGGACGGAGCAGGAGGACGTCCAACTG (SacI) RR: GGCGGACTAGTGCGAGGCATCGAGCATCTTCTTGTAGTA (SpeI) CT829537过表达引物 Overexpression primer of CT829537 OF: CGGGATCCAATCTTCGGCACTGGCTCC (Bam H I) OR: CGAGCTCGGGTCAGGTGGTCGGTGTA (SacI) CT829537基因定量引物 Gene quantitative primer of CT829537 QF: GTTTGAAGCGCACAGGCAAGAG QR: GGAGGACAAGGAACCGGAGGAG GUS基因引物Primers of GUS GUS-F: GCATGTTACGTCCTGTAGAAACCC GUS-R: CAAAGCCAGTAAAGTAGAACGGT Hpt基因引物Primers of Hpt Hpt-F: GGGGGGTCGGTTTCCACTA Hpt-R: ATCGTTATGTTTATCGGCACTTTG

表1 本研究用于构建载体的引物序列 Table 1 Sequences of primers used for vector construction in this study

1.4 CT829537过量表达和RNAi转基因水稻的获得及分子检测重组质粒用冻融法转化农杆菌EHA105, 获得CT829537过表达和RNAi转基因水稻^{[25, 26]}。以野生型PI312777为对照, 分别对水稻新根进行GUS染色。与此同时, 分别利用GUS基因和潮霉素基因(Hpt)的特异引物(表1)对转基因水稻的GUS和Hpt基因进行扩增。
1.5 CT829537转录因子过表达和RNAi植株的表达分析分别提取转基因和野生型PI312777根系RNA, 逆转录成cDNA, 利用CT829537转录因子的特异引物, 并以β -Actin作为内参基因, 进行半定量RT-PCR分析。
1.6 水稻酚酸关键酶基因定量分析进一步以半定量RT-PCR检测结果为阳性的转基因PI312777根系的cDNA为模板, 通过荧光定量PCR (qPCR)比较PI312777根系中的7个与酚酸类化合物合成相关的酶基因在转基因水稻和野生型植株中的表达变化。这些基因包括苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)、肉桂酸-4-羟化酶基因(C4H)、羟化酶基因(HYL)、辅酶A连接酶基因(4CL)、O-甲基转移酶基因(OMT)、肉桂酰辅酶A基因(CCA)和肉桂酸脱氢酶基因(CAD), 以β -Actin为内参基因, 各基因的qPCR引物见表2^[27]。qPCR程序为95℃预变性10 min; 95℃变性30 s, X℃退火30 s, 68℃延伸20 s检测荧光强度, 41个循环; 95℃变性15 s, 60℃退火15 s升温10 min至95℃, 95℃变性15 s。根据所生成的阈值(Ct值), 运用2^{-Δ Δ Ct}法计算基因的相对表达变化量^[28]。
表2
Table 2
表2(Table 2)

表2 酚酸合成相关基因的荧光定量PCR引物序列 Table 2 Primer sequence for the qPCR of phenolic acid relative genes 关键酶 Key enzyme 登录号 Accession number 种属 Species 引物序列 Primer sequence (5′ -3′ ) 甲羟戊酸激酶 Mevalonate kinase NM 001070895 Oryza sativa F-CAGTCGGCGGCATCAG R-CACCAGCAACCAGAGC 单萜烯合酶 Monoterpenes synthase NM 001071453 Oryza sativa F-GGATGAACTTGGGATTGG R-TCTGGAGAAGGAAGCACC 倍半萜烯合酶 Sesquiterpene synthase AP003911 Oryza sativa F-CGATGATAACAATAACGG R-GTGCCTTGCTTCAACTCT 二萜烯合酶 Diterpene synthase AB089272 Oryza sativa F-AAAGAGCATCCTTGACA R-GAAACATCGTAACCGT 八氢番茄红素合酶 Phytoene synthase DO356431 Oryza sativa F-ATGGAGATGTTTTATGAGGGAT R-CGTCAAGGATTTGTCGGT 角鲨烯合酶 Squalene synthase NM 001058160 Oryza sativa F-GTTTCGCCTTGTCTCCAC R-CAACAGTTTCAACCTCCTT 苯丙氨酸解氨酶 Phenylalanine ammonia-lyase NM 001054016 Oryza sativa F-CCGTGCTCTTTGAGGCTAAC R-GCTTGTGAGTCAGGTGGTCG 肉桂酸-4-羟化酶 Cinnamate-4-hydroxylase NM 001061725 Oryza sativa F-ACCGCAGCGTCTCCTTC R-ACCACCCGAGCATCCAG 羟化酶 Hydroxylase NM 001068556 Oryza sativa F-CCGCCTTCAACGACAA R-CGCCCATACGACGATT 辅酶A连接酶 CoA-ligases X52623 Oryza sativa F-TGGTGGAGTGCGTGCTG R-AGGCGTTGGCGTAGATG O-甲基转移酶 O-Methyltransferases NM 001068677 Oryza sativa F-TGTCCTGTGAAATGGGTG R-CCTCGGAACAAGAACTG 肉桂酰辅酶A Cinnamoyl-CoA NM 001069247 Oryza sativa F-TGGGAGCAGGAATGGCAAAAT R-TTCCGTCCCACCAGCATGAC 肉桂酸脱氢酶 Cinnamoylalcohol dehydrogenases NM 193168 Oryza sativa F-TCGGCGTCGCTAATTTCATCC R-TCGATGGAAGAACGGGCAGAG β -肌动蛋白 β -Actin AB047313 Oryza sativa F-CTGCGGGTATCCATGAGACT R-GCAATGCCAGGGAACATAGT

表2 酚酸合成相关基因的荧光定量PCR引物序列 Table 2 Primer sequence for the qPCR of phenolic acid relative genes

1.7 总酚含量分析取CT829537-RNAi、CT829537-OE转基因水稻及野生型水稻各3株(三叶一心期), 于Hoagland完全营养液中恢复培养7 d后, 分别与等株数的稗草共培养, 并以单独培养的各供试水稻作为对照, 处理与对照均设3次重复。培养7 d后, 参照Folin-Ciocalteu比色法测定转基因水稻及其野生型水稻根系及根系分泌物中总酚的含量^[29]。
1.8 根系分泌物对稗草的化感效应分别收集转基因PI312777及其野生型植株的水培液, 经0.45 µ m滤膜过滤后取5 mL加至垫有滤纸的培养皿中, 以添加等体积双蒸水为空白对照, 分别放入20粒预萌发的稗草种子, 处理与对照均设4次重复。常温培养10 d后, 收集各处理稗草, 120℃杀青30 min, 80℃烘干至恒重。所得原始数据均转化为抑制率(inhibitory rates, IRs), 作为化感潜力评价指标。IRs = (1-TR/CK)× 100%。其中TR为不同处理下的稗草干物质重, CK为对照稗草的干物质重。IR < 0表示存在促进作用, IR > 0表示存在抑制作用。

2 结果与分析2.1 转基因植株的获得和阳性检测采用农杆菌介导法将CT829537-OE和CT829537- RNAi载体分别转化到化感水稻PI312777中, 获得CT829537-OE和CT829537-RNAi的T₀代的转基因PI312777。转基因水稻经GUS染色检验显示水稻根部被染成蓝色, 而相同处理的野生型水稻根系颜色未发生变化(图1), 说明OsMYB (CT829537)基因的RNAi和OE表达质粒载体成功转入供试水稻中。进一步以T₁代转基因水稻根部cDNA为模板, 进行潮霉素基因(Hpt)和GUS基因的PCR检测, 电泳结果显示RNAi与OE载体有效遗传至T₁代(图2)。
图1
Fig. 1

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	图1 阳性转基因水稻和野生型水稻的根系GUS染色 WT: 野生型化感水稻PI312777; CT829537-RNAi: CT829537抑制转基因水稻PI312777; CT829537-OE: CT829537过表达转基因水稻PI312777。Fig. 1 GUS dyeing of positive transgenic rice and wild type (WT) rice roots WT: wild type plant of allelopathic rice PI312777; CT829537-RNAi: CT829537 silience transgenic rice PI312777; CT829537-OE: CT829537 overexpression transgenic rice PI312777.

图2
Fig. 2

	Figure OptionViewDownloadNew Window
	图2 T1代转基因水稻的潮霉素磷酸转移酶基因(Hpt)和GUS基因PCR检测Fig. 2 Amplification of GUS and Hpt gene in T1 transgenic rice plants M: DNA marker (100 bp ladder)

2.2 转基因植株中CT829537的表达 CT829537-OE转基因PI312777的CT829537基因表达量明显高于野生型植株, 而该基因在CT829537-RNAi转基因PI312777中的表达量则较野生型植株明显降低(图3)。
图3
Fig. 3

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	图3 半定量PCR检测CT829537基因在转基因水稻与野生型水稻中的表达量 缩写同图1。Fig. 3 Gene expression level of CT829537 in transgenic rice and WT detected by semi-quantitative RT-PCR Abbreviations are the same as those given in Fig. 1.

2.3 与稗草共培养的转基因水稻和野生型植株酚酸代谢关键基因的表达变化如图4所示, 与稗草共生7 d后, CT829537-OE转基因水稻中酚酸代谢途径7个关键酶基因的表达均高于对照。其中苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)和羟化酶基因(HYL)上调了3倍和4倍, 肉桂酸-4-羟化酶基因(C4H)、辅酶A连接酶基因(4CL)、肉桂酰辅酶A基因(CCA)分别上调2.14、1.23和2.46倍, 肉桂酸脱氢酶基因(CDA)、O-甲基转移酶基因(OMT)基因表达量分别上调7.26倍和3.73倍。而在CT829537-RNAi转基因水稻中, 与对照植株相比, 除C4H表现微弱上调表达外, 其余6个基因表达均下调, 其中4CL、CCA、HYL下调了6.68、4.20和4.08倍, PAL、CDA、OMT分别下调1.50、1.64和2.14倍。稗草共生长处理后, 7个基因中只有C4H在RNA干扰和过表达转基因水稻中上调表达, 且在CT829537-OE转基因水稻中的表达量高于CT829537- RNAi转基因水稻。
图4
Fig. 4

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	图4 与稗草共培养下, 转基因PI312777与其野生型植株的酚酸代谢关键基因的表达变化 缩写同图1。Fig. 4 Relative expression analysis of the genes relative to phenolic acid synthesis in transgenic PI312777 and WT under rice/BYG co-cultured condition Abbreviations are the same as those given in Fig. 1

2.4 水稻根系和水培液中的总酚含量与稗草共培养7 d后, 各水稻根系及其培养液中的总酚含量均高于相应的单一种植的对照水稻组(表3)。CT829537-RNAi的转基因水稻根部及其培养液中总酚含量均低于野生型水稻, CT829537-OE的转基因水稻则高于野生型水稻。通过检测3种水稻的根系和培养液中总酚含量显示, OsMYB (CT829537)能够调控化感水稻的总酚合成。
表3
Table 3
表3(Table 3)

表3 稗草共培养处理对转基因水稻和野生型水稻的总酚含量影响 Table 3 Comparison of total phenol content between transgenic PI312777 and WT under rice/BYG co-cultured condition 处理 Treatment 供试材料 Experimental materials 根系总酚含量 Total phenol content in root (μ mol g-1) 水培液总酚含量 Total phenol content in culture solution (μ mol L-1) 与稗草共培 Co-cultured with BYG WT 19.69 a 24.17 b CT829537-RNAi 15.20 b 13.74 d CT829537-OE 20.28 a 26.90 a 无稗草共培 Without BYG WT 15.21 b 14.20 d CT829537-RNAi 13.52 c 13.18 d CT829537-OE 16.92 b 20.88 c Values followed by different small letters within a column are significantly different at the 0.05 level. Abbreviations are the same as those given in Fig. 1 同列不同小写字母表示差异显著(P< 0.05)。缩写同图1。

表3 稗草共培养处理对转基因水稻和野生型水稻的总酚含量影响 Table 3 Comparison of total phenol content between transgenic PI312777 and WT under rice/BYG co-cultured condition

2.5 室内化感抑草潜力评价从图5可以看出, CT829537-OE转基因水稻根系分泌物对稗草干重的抑制率达36.7%, 显著高于野生型植株, 后者根系分泌物的抑草潜力为30.08%。而CT829537-RNAi转基因水稻的化感作用最弱, 仅为16.4%。
图5
Fig. 5

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	图5 转基因PI312777及野生型PI312777的根系分泌物对稗草干重的抑制率 缩写同图1。a、b、c表示不同处理之间存在显著差异(P< 0.05)。Fig. 5 Inhibitory rates of root exudates from transgenic PI312777and WT on dry weight of BYG Abbreviations are the same as those given in Fig. 1. Superscript letters indicate statistical groups that are significantly different (P< 0.05).

3 讨论已有研究表明, 逆境胁迫下, 水稻化感物质合成相关基因增强表达。Song等^[30]应用抑制消减杂交技术(SSH)比较了低氮胁迫下化感水稻PI312777的基因表达变化, 发现参与酚酸类化感物质合成的PAL及O-甲基转移酶基因(OMT)均上调表达, 且其上调表达倍数高于相同处理下的非化感水稻Lemont, 同时PI312777也显示出更强的化感抑草潜力。Xiong等^[31]利用荧光定量PCR系统比较了低氮胁迫下化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont的7个酚酸合成相关基因的表达变化差异, 结果显示低氮胁迫下PI312777的7个酚酸类合成相关基因的上调倍数大部分高于Lemont, 且PI312777的酚酸含量也高于Lemont; 此外, 萜类合成相关基因在两种水稻中的表达差异不明显^[32]。此外, 已有研究也表明, 田间旱育条件下, PI312777对田间杂草的抑制率高于土壤水分充足条件下的杂草抑制率, 并显著高于相同种植条件下非化感水稻Lemont的田间抑草率^[33]。通过检测水稻根际土壤中的酚酸含量发现, 旱育条件下PI312777根际土壤中的酚酸类物质含量显著提高, 且明显高于Lemont的根际土壤, 表明了酚酸类化合物在水稻化感抑草过程中的重要作用^[34]。
基因表达的转录受植物中最重要的一类调节基因(转录因子, TF)的调控。Junaedi等^[35]发现了一些转录调控因子在稗草共培养下的化感水稻中增强表达。Fang等^{[23, 24]}的研究结果也显示转录因子OsMYB (CT829537)在稗草共培养下的化感水稻PI312777中的表达增强。MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一, 目前已有大量文献报道MYB转录因子生理作用非常广泛, 并参与植物次生代谢和生长发育的各个方面, 其中包括合成酚酸类物质、花色素苷、木质素、黄酮类的苯丙烷代谢途径^{[36, 37]}。Moyano等^[38]研究发现2个参与调控金鱼草苯丙烷代谢第一个酶PAL合成的转录因子AmMYB305与AmMYB340, 它们能够竞争性地结合在目的基因的启动子上, 并通过内部协调机制参与苯丙烷代谢。大豆中3个MYB基因ZmMYBZ2、ZmMYBJ6和ZmMYBJ7也均被证实可调控苯丙烷代谢途径部分关键酶的表达^[39]。然而, MYB是否也调控水稻的化感作用, 尚未见相关报道。本研究结果显示化感水稻PI312777的OsMYB (CT829537)正调控其苯丙烷代谢途径中酚酸类合成相关基因的表达。过量表达PI312777中的CT829537基因后, 其酚酸类化合物合成相关的酶基因表达也增强, 酚酸类物质含量增加, 水稻化感抑草能力提高, 抑制PI312777中该基因的表达则呈现相反的趋势。该结果表明CT829537能够通过调控化感水稻的酚酸类代谢, 进而影响水稻的化感抑草能力。研究结果也初步揭示了水稻化感抑草作用的转录调控过程。
4 结论转录因子OsMYB (CT829537)正调控化感水稻PI312777的酚酸类物质代谢, 抑制PI312777的CT829537基因表达, 水稻的酚酸类合成相关基因表达下调, 酚酸类化感物质合成量减少, 抑草能力下降。过量表达该基因, 水稻的酚酸类合成相关基因表达增强, 酚酸类化感物质合成量增加, 抑草能力提高。然而, 这种调控作用究竟是通过转录因子与基因启动子直接互作实现的, 还是通过其他间接途径实现对基因表达的调控, 有待进一步研究阐明。
The authors have declared that no competing interests exist.

作者已声明无竞争性利益关系。


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[1]	Olofsdotter M, Navarez D, Rebulanan M, Streibig J C. Weed-suppressing rice cultivars: does allelopathy play a role. Weed Res, 1999, 39: 441-454[本文引用:1]
[2]	Chou C H, Chang F J, Oka H I. Allelopathic potentials of wild rice, Oryza perennis. Taiwania, 1991, 36: 201-210[本文引用:1]
[3]	Chou C H. Adaptive autointoxication mechanisms of Oryza sativa. In: Olofsdotter M, ed. Allelopathy in Rice. Los Banzos, Philippines: IRRI, 1996. pp 25-27[本文引用:1]
[4]	Fujii Y. The allelopathic effect of some rice varities. In: Proceedings of the International Seminar Biological Control and Integrated Management of Paddy and Aquatic Weeds in Asia. Tsukuba, Japan, 1992. pp 160-165[本文引用:1]
[5]	Dilday R H, Lin J, Yan W. Identification of allelopathy in the USDA-ARS rice germplasm collection. Aust J Exp Agric, 1994, 34: 907-910[本文引用:1][JCR: 1.621]
[6]	Dilday R H, Yan W G, Moldenhauer K A K, Gravois K A. Allelopathic activity in rice for controlling major aquatic weeds. In: Olofsdotter M, ed. Proceedings of Workshop on Allelopathy in Rice. Manila, Philippines: IRRI, 1998. pp 7-26[本文引用:3]
[7]	Dilday R H, Nastasi P, Smith R J Jr. Allelopathic observation in rice (Oryza sativa L. ) to ducksalad (Heteranthera limosa). Proc Arkansas Acad Sci, 1989, 43: 21-22[本文引用:2]
[8]	Dilday R H, Lin J, Yan W. Identification of allelopathy in the USDA-ARS rice germplasm collection. Aust J Exp Agric, 1994, 34: 907-910[本文引用:2][JCR: 1.621]
[9]	Dilday R H, Mattice J D, Moldenhauer K A. An overview of rice allelopathy in the USA. In: Kim K U, Shin D H, eds. Rice Allelopathy. Taegu (Korea): Kyungpook National University, 2000. pp 15-26[本文引用:3]
[10]	Jensen L B, Courtois B, Shin L S, Li Z K, Olofsdotter M, Mauleon R P. Locating genes controlling allelopathic effects against barnyardgrass in upland rice. Agron J, 2001, 93: 21-26[本文引用:1][JCR: 1.518]
[11]	Ebana K, Yan W G, Dilday R, Namai H, Okuno K. Analysis of QTL associated with the allelopathic effect of rice using water soluble extracts. Breed Sci, 2001, 51: 47-51[本文引用:1][JCR: 1.04]
[12]	Xiong J, Jia X L, Deng J Y. Analysis of epistatic effect and QTL interactions with environment for allelopathy in rice (Oryza sativa L. ). Allelopathy J, 2007, 20: 259-268[本文引用:1][JCR: 0.685]
[13]	Lee S B, Seo K I, Koo J H, Hur H S, Shin J C. QTLs and molecular markers associated with rice allelopathy. In: Haper J D I, An M, Kent J H, eds. Proceedings of the Fourth World Congresson Allelopathy “Establishing the scientific base”. Australia: Charles Sturt Universit, Wagga Wagga, NSW, 2005. pp 505-507[本文引用:1]
[14]	Zeng D L, Qian Q, Teng S, Fujimoto H, Kunihifo Y, Zhu L H. Genetic analysis of rice allelopathy. Chin Sci Bull, 2003, 48: 265-268[本文引用:1][CJCR: 0.95]
[15]	王海斌, 何海斌, 熊君, 邱龙, 方长旬, 曾聪明, 严琳, 林文雄. 低钾胁迫对水稻(Oryza sativa L. )化感潜力变化的影响. 生态学报, 2008, 28: 6219-6227 Wang H B, He H B, Xiong J, Qiu L, Fang C X, Zeng C M, Yan L, Lin W X. Effects of potassium stress on allelopathic of rice (Oryza sativa L. ). Acta Ecol Sin, 2008, 28: 6219-6227 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1]
[16]	王海斌, 何海斌, 叶陈英, 邱龙, 方长旬, 林文雄. 不同化感潜力水稻秧苗响应低钾的光合生理特性. 中国生态农业学报, 2008, 16: 1474-1477 Wang H B, He H B, Ye C Y, Qiu L, Fang C X, Lin W X. Photosynthetic physiology of different allelopathic rice accessions at seedling stage under phtossium stress. Chin J Eco-Agric, 2008, 16: 1474-1477 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1][CJCR: 0.795]
[17]	王海斌, 何海斌, 曾聪明, 吴良展, 沈荔花, 熊君, 林瑞余, 林文雄. 低磷胁迫下不同化感潜力水稻秧苗生长的分子生理特性. 应用与环境生物学报, 2008, 14: 593-598 Wang H B, He H B, Zeng C M, Wu L Z, Shen L H, Xiong J, Lin R Y, Lin W X. Molecular physiological properties of different rice accessions mediated by different phosphorus supplies at seedling stage. Chin J Appl Environ Biol, 2008, 14: 593-598 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1][CJCR: 0.867]
[18]	Mattice J, Lavy T, Sdulman B, Dilday R H. Searching for allelochemicals in rice that control ducksalad. In: Olofsdotter M ed. Proceedings of Workshop on Allelopathy in Rice. Manila, Philippines: IRRI, 1998. pp81-98[本文引用:1]
[19]	Seal A N, Pratley J E, Haig T, An M. Identification and quantitation of compounds in a series of allelopathic and nonallelopathic rice root exudates. J Chem Ecol, 2004, 30: 1647-1662[本文引用:1][JCR: 2.462]
[20]	Macias F A, Chinchilla N, Varela R M, Molinllo J M G. Bioactive steroids from Oryza sativa L. Steroids, 2006, 71: 603-608[本文引用:1][JCR: 2.803]
[21]	He H B, Wang H B, Fang, C X, Lin Z H, Yu Z M, Lin W X. Separation of allelopathy from resource competition using rice/barnyardgrass mixed-cultures. PLoS One, 2012, 7(5): e37201[本文引用:1][JCR: 3.73]
[22]	Kato N H. Barnyard grass-induced rice allelopathy and momilactone B. Plant Physiol, 2011, 168: 1016-1020[本文引用:1][JCR: 6.555]
[23]	Fang C X, He H B, Wang Q S, Qiu L, Wang H B, Zhuang Y E, Xiong J, Lin W X. Genomic analysis of allelopathic response to low nitrogen and barnyardgrass competition in rice (Oryza sativa L. ). Plant Growth Regul, 2010, 61: 277-286[本文引用:2][JCR: 1.67]
[24]	Fang C X, Zhuang Y E, Xu T C, Li Y Z, Li Y, Lin W X. Changes in rice allelopathy and rhizosphere microflora by inhibiting rice henylalanine ammonia-lyase gene expression. J Chem Ecol, 2013, 39: 204-212[本文引用:2][JCR: 2.462]
[25]	Putu S, Tsutomu S, Hidenari S, Masahiro N, Masayuki N, Minco K. Development of simple and efficient in planta transformation method for rice (Oryza sativa L. ) using Agrobacterium tumefaciens. J Biosci Bioeng, 2005, 100: 391-397[本文引用:1][JCR: 1.737]
[26]	Fang C X, Wang Q S, Yu Y, Lin Q M, Zhang H L, Wu X C, Chen T, Lin W X. Suppression and overexpression of Lsi1 induce differential gene expression in rice under ultraviolet radiation. Plant Growth Regul, 2011, 65: 1-10[本文引用:1]
[27]	熊君, 王海斌, 方长旬, 邱龙, 吴文祥, 何海斌, 林文雄. 不同氮素供应下水稻酚类物质代谢关键酶基因差异表达. 植物生理与分子生物学学报, 2007, 33: 387-394 Xiong J, Wang H B, Fang C X, Qiu L, Wu W X, He H B, Lin W X. The differential expression of the genes of the key enzymes involved in phenolic compound metabolism in rice (Oryza sativa L. ) under different nitrogen supply. J Plant Physiol Mol Biol, 2007, 33: 387-394 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1][CJCR: 1.344]
[28]	Livak K J, Schmittgen T D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method. Methods, 2001, 25: 402-408[本文引用:1][JCR: 3.641]
[29]	庄月娥. 水稻抑草作用关键基因的分子生态机制研究. 福建农林大学硕士学位论文, 福建福州, 2011 Zhuang Y E. Molecular Ecological Mechanism of the Key Gene for Weed-suppression in Allelopathic Rice. MS Thesis of Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, China, 2011 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1]
[30]	Song B Q, Xiong J, Fang C X, Qiu L, Lin R Y, Liang Y Y, Lin W X. Allelopathic enhancement and differential gene expression in rice under low nitrogen treatment. J Chem Ecol, 2008, 34: 688-695[本文引用:1][JCR: 2.462]
[31]	Xiong J, Wang H, Qiu L, Wu H W, Chen R S, He H B, Lin R Y, Lin W X. qRT-PCR analysis of key enzymatic genes related to phenolic acid metabolism in rice accessions (Oryza sativa L. ) exposed to low nitrogen treatment. Allelopathy J, 2010, 25: 345-356[本文引用:1][JCR: 0.685]
[32]	王海斌, 熊君, 方长旬, 邱龙, 吴文祥, 何海斌, 林文雄. 氮素胁迫下强、弱化感水稻萜类代谢途径中关键酶基因差异表达的FQ-PCR分析. 作物学报, 2007, 33(8): 1329-1334 Wang H B, Xiong J, Fang C X, Qiu L, Wu W X, He H B, Lin W X. FQ-PCR analysis on the differential expression of the key enzyme genes involved in isoprenoid metabolic pathway in allelopathic and weak allelopathic rice accessions (Oryza sativa L. ) under nitrogen stress condition. Acta Agron Sin, 2007, 33(8): 1329-1334 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1][CJCR: 1.667]
[33]	孙小霞, 王海斌, 林辉锋, 何海斌, 陆锦池, 曾聪明, 熊君, 林文雄. 田间旱育条件下不同化感潜力水稻的抑草效应分析. 中国生态农业学报, 2009, 17: 842-846 Sun X X, Wang H B, Lin H F, He H B, Lu J C, Zeng C M, Xiong J, Lin W X. Effects of weed suppression by different allelopathic rice varieties under dry-raising condition. Chin J Eco-Agric, 2009, 17: 842-846 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1][CJCR: 0.795]
[34]	孙小霞, 王海斌, 何海斌, 陆锦池, 林文雄. 田间旱育条件下不同化感潜力水稻根际土壤酚酸类和萜类物质分析. 中国生态农业学报, 2014, 22: 806-812 Sun X X, Wang H B, He H B, Lu J C, Lin W X. Analysis of phenolic acids and terpenoids in rhizosphere soils of different allelopathic rice varieties under dry field conditions. Chin J Eco-Agric, 2014, 22: 806-812 (in Chinese with English abstract)[本文引用:1][CJCR: 0.795]
[35]	Junaedi A, Jung W S, Chung I M, Kim K H. Differentially expressed genes of potentially allelopathic rice in response against barnyardgrass. J Crop Sci Biotechnol, 2007, 10: 231-236[本文引用:1]
[36]	Pazares J, Ghosal D, Wienand U, Peterson P A, Saedler H. There gulatory C1 locus of Zea mays encodes a proterin with homology to myb-oncogene products and with structural similarities to transcriptional activators. EMBO J, 1987, 6: 3553-3558[本文引用:1][JCR: 9.822]
[37]	Cone K C, Burr F A, Burr B. Molecular analysis of the maize anthocyanin regulatory locus C1. Proc Natl Acad Sci USA, 1986, 83: 9631-9635[本文引用:1][JCR: 9.737]
[38]	Moyano E, Martinez-Garcia J F, Martin C. Apparent redundancy in myb gene function provides gearing for the control of flavonoid biosynthesis in Antirrhinum flowers. Plant Cell, 1996, 8: 1519-1532[本文引用:1][JCR: 9.251]
[39]	Legay S, Lacombe E, Goicoechea M, Brière C, Séguin A, Mackay J, Grima-Pettenati J. Molecular characterization of EgMYB1, a putative transcriptional repressor of the lignin biosynthetic pathway. Plant Sci, 2007, 173: 542-549[本文引用:1][JCR: 2.922]