李璐 1 ,
安叶娟 1 ,
乔春雷 1 ,
杨晓华 2 , * , ,
张华峰 1 , * , ,
薛梦莹 1 1 陕西师范大学食品工程与营养科学学院, 西北濒危药材资源开发国家工程实验室, 中俄食品与健康科学国际联合研究中心, 西安 7101192 西安交通大学医学部, 卫生部法医学重点实验室, 西安 710061Li Lu 1 ,
An Yejuan 1 ,
Qiao Chunlei 1 ,
Yang Xiaohua 2 , * , ,
Zhang Huafeng 1 , * , ,
Xue Mengying 1 1 International Joint Research Center of Shaanxi Province for Food and Health Sciences, National Engineering Laboratory for Resources Development of Endangered Crude Drugs in Northwest China, College of Food Engineering and Nutritional Science, Shaanxi Normal University, Xi’an 710119, China;2 Key Laboratory of Ministry of Health for Forensic Sciences, School of Medicine, Xi'an Jiaotong University, Xi’an 710061, China;引用本文 李璐 ,
安叶娟 ,
乔春雷 ,
杨晓华 ,
张华峰 ,
薛梦莹 . 淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取及其 对HeLa细胞的抑制作用. 植物学报, 2018, 53(3): 341-352
贡献者
* 通讯作者。E-mail: xhyang@mail.xjtu.edu.cn ; isaacsau@sohu.com 基金资助
中央高校基本科研业务费专项资金(No.GK2016CSZ008, No.GK201703076)、陕西省科技合作项目(No.2014SJ-01, No.2014SJ- 08)和陕西省科学技术研究发展计划(No.2016SF-350) ;
接受日期:2017-05-23接受日期:2017-08-30网络出版日期:2018-05-20
-->Copyright
2018《植物学报》编辑部
Contributors
* Author for correspondence. E-mail: xhyang@mail.xjtu.edu.cn ; isaacsau@sohu.com History
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摘要: 建立了药用植物心叶淫羊藿(Epimedium brevicornum )生物碱的超声波-微波协同提取工艺, 探讨了提取机理, 分析了生物碱的化学组成及其对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用。采用正交试验法优化得到了淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取工艺: 浸泡时间为40分钟, 超声波-微波协同作用18分钟, 微波功率250 J∙s-1 , 液固比为30 mL∙g-1 , 乙醇溶液浓度为70%。超声波-微波协同提取法的提取率可达16.146 mg∙g-1 , 显著高于超声波提取法、微波提取法和加热提取法。扫描电子显微镜观察结果表明, 超声波-微波协同作用可使淫羊藿叶片样品表面出现大量裂隙。激光粒度分析显示, 超声波-微波协同提取后, 中、低粒度范围的样品量明显增多, 而高粒度范围的样品量明显减少。薄层色谱和高效液相色谱分析结果表明, 淫羊藿生物碱含有木兰花碱, 不含小檗碱或含量很低。淫羊藿生物碱对HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用, 并且呈现出剂量依赖性。研究结果为药用植物淫羊藿资源的开发利用提供理论依据。 关键词 :
心叶淫羊藿 ;
生物碱 ;
超声波-微波协同提取 ;
机理 ;
HeLa细胞 Abstract :
A protocol of ultrasound-microwave-assisted extraction was developed to isolate alkaloids from the medicinal plant Epimedium brevicornum , and the extraction mechanism is discussed. The chemical composition of the alkaloid extract was analyzed. The inhibitory effect of E. brevicornum alkaloids on human cervical cancer HeLa cells was investigated. The optimal condition for ultrasound-microwave-assisted extraction of E. brevicornum alkaloids was achieved by using an orthogonal test: steeped time, 40 min; ultrasound-microwave time, 18 min; microwave power, 250 J∙s-1 ; liquid-to-solid ratio, 30 mL∙g-1 ; and ethanol concentration, 70%. Extraction yield of alkaloids by ultrasound- microwave-assisted extraction reached 16.146 mg∙g-1 , which was significantly higher than that by ultrasound-assisted extraction, microwave-assisted extraction and heating extraction. Scanning electron micrographs showed that the synergism between the ultrasound and microwave resulted in many interstices on the surface of leaf samples of E. brevicornum . Laser diffraction particle sizing analysis revealed that the amount of small and medium particles of leaf samples increased and that of large particles decreased after ultrasound-microwave-assisted extraction. Thin-layer chromatography and high-performance liquid chromatography revealed that the alkaloid extract contained magnoflorine, and berberine was not detectable. E. brevicornum alkaloids exhibited a significant dose-dependent inhibitory activity against human cervical cancer HeLa cells. The present research may be helpful for the exploitation and utilization of Epimedium resources. Key words :
Epimedium brevicornum ;
alkaloids ;
ultrasound-microwave-assisted extraction ;
mechanism ;
HeLa cells 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 )。陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法。本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 )。
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A。
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱。
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性。本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 )。研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值。超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 )。研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 )。迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道。
大量研究表明, 植物中很多生物碱都具有较强的抗肿瘤活性, 长春新碱(vincristine)和喜树碱(camp- tothecin)等已经成为临床抗肿瘤药物(
van de Velde et al., 2017 ;
Patil and Akamanchi, 2017 )。小檗科小檗属(
Berberis )植物中广泛分布的小檗碱(berberine)也具有较强的抗肿瘤活性(
Kou et al., 2016 )。但是, 有关小檗科淫羊藿属植物中生物碱抗肿瘤活性鉴定的研究迄今未见报道。鉴于此, 本研究选择《中国药典》收录的心叶淫羊藿(
E. brevicornum )作为实验材料, 采用正交试验法优选淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取工艺, 用扫描电子显微镜和激光粒度分析法探讨提取机理, 采用薄层色谱法和高效液相色谱法分析生物碱的化学组成, 在此基础上研究淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用, 以期为药用植物淫羊藿资源的开发利用提供理论依据。
1 材料与方法1.1 植物材料及试剂与仪器植物材料地上部分采自秦岭北麓, 经鉴定为心叶淫羊藿(
Epimedium brevicornum Maxim)。分拣去除淫羊藿的根和其它杂质, 将叶片用自来水和蒸馏水依次漂洗, 阴干后粉碎过80目筛, 置55-60°C烘箱中干燥至恒重, 存于干燥器中备用。
人宫颈癌HeLa细胞由西安交通大学医学部提供。硅胶G薄层板购自青岛海洋化工厂分厂。木兰花碱、小檗碱和硫酸长春花碱(vinblastin sulfate)对照品购自上海源叶生物科技有限公司(纯度≥95%)。无水乙醇等均为国产分析纯试剂。主要仪器包括: MS2000型激光粒度分析仪(Malvern仪器公司, 英国); CW- 2000型超声波-微波协同萃取仪(上海新拓仪器科技有限公司); HSY2-SP型水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司); Breeze型高效液相色谱仪(Waters公司, 美国); TU-1810型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司); PB-10/C酸度计(Sartorius科学仪器有限公司, 德国); S-3400N型扫描电子显微镜(Hitachi公司, 日本); RE-52型旋转蒸发仪(上海安亭实验仪器有限公司); SW-CJ型超净工作台(北京华威中仪科技有限公司); LGJ-18C型真空冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂); Elx800型酶标仪(BioTek公司, 美国); WJ-II型CO
2 细胞培养箱(Thermo公司, 美国)。
1.2 淫羊藿生物碱提取方法1.2.1 超声波-微波协同提取法
称取淫羊藿样品(叶片粉末), 倾入250 mL萃取瓶中, 按照特定液固比(10、20、30、40、50和60 mL∙g
-1 )加入一定体积浓度(0、20%、40%、60%、80%和100%, v/v)的乙醇水溶液, 充分混合后, 在室温下密封浸泡一段时间(0、10、20、40和60分钟), 每隔5分钟振荡混匀1次。然后将萃取瓶置于超声波-微波协同萃取仪中, 在特定微波功率(50、100、150、200、250和300 J∙s
-1 )下超声波-微波协同提取一定时间(2、6、10、14、18和22分钟)。提取结束后将提取液在3 776 ×
g 下离心15分钟, 取上清液, 即为淫羊藿生物碱样品溶液。
1.2.2 超声波提取法
使用超声波-微波协同萃取仪进行超声波辅助提取。除不施加微波作用外, 超声波提取法的操作条件与超声波-微波协同提取法相同。提取条件如下: 乙醇溶液浓度为70%, 液固比为30 mL∙g
-1 , 室温浸泡40分钟, 超声波辅助提取18分钟。
1.2.3 微波提取法
使用超声波-微波协同萃取仪进行微波辅助提取。除不施加超声波作用外, 微波提取法的操作条件与超声波-微波协同提取法相同。提取条件为: 乙醇溶液浓度为70%, 液固比为30 mL∙g
-1 , 室温浸泡40分钟, 微波辅助提取18分钟, 微波功率为250 J∙s
-1 。
1.2.4 加热提取法
使用水浴锅进行加热提取。除不施加超声波和微波作用外, 加热提取法的操作条件与超声波-微波协同提取法相同。提取条件为: 乙醇溶液浓度为70%, 液固比为30 mL∙g
-1 , 室温浸泡40分钟, 加热提取18分钟, 温度采用超声波-微波协同萃取仪的平均温度(50°C)。
1.3 淫羊藿生物碱纯化制备
参考刘春明等(2003) 的方法纯化淫羊藿生物碱。将淫羊藿生物碱样品溶液减压浓缩成深绿色溶液, 在浓缩液中加入等量蒸馏水后离心沉降, 除去叶绿素。然后加入酸性水溶液(pH2.0, 用浓盐酸调配)溶解, 过滤除去其中不溶于水的亲脂性杂质。再将酸性水溶液碱化(pH10.0, 用浓氨水调配), 使生物碱游离出来。然后用0.45 μm水系滤膜过滤3次, 收集上清液。先蒸发浓缩, 后真空冻干, 即得淫羊藿生物碱样品。
1.4 淫羊藿生物碱定性和定量分析1.4.1 碘化铋钾定性法
使用碘化铋钾试剂对淫羊藿生物碱进行定性分析(
郝淼等, 2015 ;
国家药典委员会, 2015 )。
1.4.2 薄层色谱法
参考《中国药典》所述方法对淫羊藿生物碱进行薄层色谱分析(
国家药典委员会, 2015 )。用甲醇分别配制1 mg∙mL
-1 的木兰花碱、小檗碱对照品溶液和10 mg∙mL
-1 的淫羊藿生物碱供试溶液。吸取上述溶液各2 μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(6:3:3:2:1, v/v)为展开剂(
李艳等, 2014 ), 置于氨蒸气预饱和15分钟的层析缸内展开。晾干后在紫外光(365 nm)下检视。
1.4.3 紫外分光光度法
采用本实验室建立的紫外分光光度法测定淫羊藿提取液中生物碱的含量(
郝淼等, 2015 )。淫羊藿生物碱提取率计算公式如下:
Y =
m a /
m s 式中,
Y 为提取率(mg∙g
-1 ),
m a 为提取液中生物碱的质量(mg),
m s 为淫羊藿样品(叶片粉末)的质量(g)。
1.4.4 高效液相色谱法
采用
陈翠萍等(1996) 建立的高效液相色谱法对淫羊藿生物碱进行分离。根据色谱峰保留时间(retention time)和共注射(co-injection)结果对生物碱组分进行定性分析(
陈翠萍等, 1996 ;
Zhou and Liu, 2006 )。
1.5 激光粒度测定将用不同提取方法处理后的淫羊藿样品自然晾干, 以未经提取的淫羊藿样品为对照, 以蒸馏水为分散剂, 分别投入激光粒度分析仪高速循环样品池, 采用通用模式在0.02-2 000 μm范围内测定粒度分布(
Fida- leo et al., 2017 )。激光粒度分析仪参数设置如下: 颗粒折射率为2.600; 颗粒吸收率为0; 分散剂为去离子水; 分散剂折射率为1.330。
1.6 扫描电子显微镜观察用扫描电子显微镜观察不同提取方法下淫羊藿样品的超微结构(
Zhang et al., 2013a )。
1.7 细胞实验在培养温度为37°C、CO
2 体积分数为5%的饱和湿度培养箱中培养HeLa细胞, 选用含10%胎牛血清、1×10
5 U∙L
-1 青霉素和链霉素的RPMI-1640培养基。每2-3天继代1次, 取对数生长期细胞进行实验。将HeLa细胞浓度调整为1.5×10
4 个∙mL
-1 , 接种于96孔板, 每孔加细胞悬液200 μL, 分别用浓度为0、20、50、100、200、300和400 μg∙mL
-1 的淫羊藿生物碱样品溶液处理细胞, 每个浓度设6个复孔, 同时设二甲基亚砜(DMSO)对照组。所有处理及对照均置于CO
2 细胞培养箱中培养24、48和72小时,然后每孔加入20 μL 5 mg∙mL
-1 MTT (3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)溶液, 继续温育4小时后终止培养。弃孔内上清液, 每孔加入200 μL DMSO, 振荡10分钟, 使结晶充分溶解(
Nikoloff et al., 2016 )。用酶标仪分别测定实验组(
A test )和对照组(
A ck )在490 nm波长处的吸光度, 计算细胞增殖抑制率(
I )。
I =(1-
A test /
A ck )×100%
按照
Lopez-Acevedo等(2014) 的方法计算50%细胞抑制浓度(
IC 50 )和25%细胞抑制浓度(
IC 25 )。
1.8 数据分析每组处理设3-4次重复, 数据取平均值。使用Micro- soft Excel (Microsoft公司, 美国)和SPSS 12.0软件(SPSS公司, 美国)对实验数据进行统计分析。多重比较采用One-way ANOVA方法,
P <0.05和
P <0.01分别表示差异显著和极显著。
2 结果与讨论2.1 淫羊藿生物碱超声波-微波协同提取工艺的优化2.1.1 单因素实验
2.1.1.1 浸泡时间对提取率的影响
在微波功率为100 J∙s
-1 、乙醇溶液浓度为50%、液固 比为50 mL∙g
-1 、超声波-微波协同作用10分钟的条件下, 浸泡时间对淫羊藿生物碱提取率的影响如
图1A 所示。当浸泡时间由10分钟延长到40分钟, 生物碱的提取率逐渐提高; 此后随着浸泡时间的延长, 生物碱提取率逐渐降低。因此, 浸泡时间以40分钟为宜。
图1 https://www.chinbullbotany.com/article/2018/1674-3466/1674-3466-53-3-341/img_1.png <b>图1</b> 浸泡时间(A)、超声波-微波协同作用时间(B)、微波功率(C)、液固比(D)与乙醇溶液浓度(E)对淫羊藿生物碱提取率的影响<br/>不同小写字母表示差异显著(<i>P</i><0.05)。<br/><b>Figure 1</b> Effects of steeped time (A), ultrasound- microwave time (B), microwave power (C), liquid to solid ratio (D), and ethanol concentration (E) on extraction yield of <i>Epimedium brevicornum</i> alkaloids<br/>Different lowercase letters indicate significant differences (<i>P</i><0.05). Figure 1 https://www.chinbullbotany.com/article/2018/1674-3466/1674-3466-53-3-341/img_1.png <b>图1</b> 浸泡时间(A)、超声波-微波协同作用时间(B)、微波功率(C)、液固比(D)与乙醇溶液浓度(E)对淫羊藿生物碱提取率的影响<br/>不同小写字母表示差异显著(<i>P</i><0.05)。<br/><b>Figure 1</b> Effects of steeped time (A), ultrasound- microwave time (B), microwave power (C), liquid to solid ratio (D), and ethanol concentration (E) on extraction yield of <i>Epimedium brevicornum</i> alkaloids<br/>Different lowercase letters indicate significant differences (<i>P</i><0.05). 在新窗口打开 下载 下载原图ZIP 生成PPT 图1
浸泡时间(A)、超声波-微波协同作用时间(B)、微波功率(C)、液固比(D)与乙醇溶液浓度(E)对淫羊藿生物碱提取率的影响
不同小写字母表示差异显著(
P <0.05)。
Figure 1
Effects of steeped time (A), ultrasound- microwave time (B), microwave power (C), liquid to solid ratio (D), and ethanol concentration (E) on extraction yield of
Epimedium brevicornum alkaloids
Different lowercase letters indicate significant differences (
P <0.05).
2.1.1.2 超声波-微波协同作用时间对提取率的影响
在浸泡时间为40分钟、微波功率为100 J∙s
-1 、乙醇溶液浓度为50%、液固比为50 mL∙g
-1 的条件下, 超声波- 微波协同作用时间对淫羊藿生物碱提取率的影响如
图1B 所示。在2-22分钟区间内, 随着提取时间的延长, 提取率呈现逐渐增加的趋势。当提取时间由2分钟延长至18分钟, 提取率增幅较大(
P <0.05); 当提取时间超过18分钟, 提取率增幅变小。这可能是由于提取18分钟后淫羊藿样品中的大部分生物碱已经溶出。因此, 将超声波-微波协同作用时间控制在18分钟较为合适。
2.1.1.3 微波功率对提取率的影响
在浸泡时间为40分钟、超声波-微波协同作用20分钟、乙醇溶液浓度为50%、液固比为50 mL∙g
-1 的条件下, 微波功率对淫羊藿生物碱提取率的影响如
图1C 所示。当微波功率由50 J∙s
-1 升高到200 J∙s
-1 时, 生物碱的提取率显著提高(
P <0.05); 微波功率超过200 J∙s
-1 时, 生物碱提取率的增幅减小。因此, 微波功率以200 J∙s
-1 为宜。
2.1.1.4 液固比对提取率的影响
在浸泡时间为40分钟、超声波-微波协同作用20分钟、微波功率为200 J∙s
-1 、乙醇溶液浓度为50%的条件下, 随着液固比的增大(提取溶剂体积不变), 淫羊藿生物碱的提取率呈现先增加后降低的趋势(
图1D )。在10-40 mL∙g
-1 范围内, 增加液固比有利于生物碱的溶出(
P <0.05); 当液固比达到40 mL∙g
-1 时, 生物碱的提取率最高; 当液固比超过40 mL∙g
-1 时, 继续增加液固比, 生物碱的提取率反而显著下降(
P <0.05)。
Chen等(2016) 在用超声波-微波辅助提取紫斑牡丹(
Paeo- nia rockii )种子中白藜芦醇(resveratrol)时, 发现提取率随着液固比的增加先升高后降低。在常规的溶剂提取过程中, 液固比越大, 提取率通常越高(
Zhang et al., 2013a )。但是, 在超声波-微波协同作用过程中, 过量的超声波-微波能量可能导致目标化合物发生降解或转化(
Vinatoru, 2001 ;
Zhang et al., 2011 )。在淫羊藿生物碱提取过程中, 随着液固比的增加(提取溶剂体积不变), 淫羊藿样品的质量和生物碱的溶出量均不断减少, 单位生物碱吸收的超声波、微波能量逐渐增多, 其降解率或转化率可能随之增高, 从而造成液固比过高时提取率反而降低。因此, 将液固比控制在40 mL∙g
-1 较为合适。
2.1.1.5 乙醇溶液浓度对提取率的影响
在浸泡时间为40分钟、超声波-微波协同作用20分钟、微波功率为200 J∙s
-1 、液固比为40 mL∙g
-1 的条件下, 乙醇溶液浓度对淫羊藿生物碱提取率的影响见
图1E 。当乙醇溶液浓度在0-80%范围内时, 随着乙醇浓度的增加, 生物碱提取率逐渐增大(
P <0.05); 当乙醇浓度超过80%时, 提取率显著减小(
P <0.05); 当浓度为80%时, 提取率最高。其原因可能包括: (1) 淫羊藿生物碱在80%乙醇溶液中的溶解性较好; (2) 乙醇溶液浓度超过80%时, 淫羊藿样品中的蛋白质等大分子物质易发生凝聚作用(
牛丽丽等, 2014 ), 从而阻碍生物碱的溶出。
2.1.2 正交试验
从单因素实验结果(
图1 )可知, 浸泡时间、超声波-微波协同作用时间、微波功率、液固比及乙醇浓度5个因素对淫羊藿生物碱提取率均有较大影响。为了进一步优化提取工艺, 采用L
25 (56) 正交试验进一步优化提取条件(
表1 )。由极差分析结果可知, 5个因素对生物碱提取率的影响依次为: D>E>B>C>A (
表1 ), 这与方差分析得出的结果(
表2 )一致。方差分析结果表明, 浸泡时间对提取率有显著影响(
P <0.05), 超声波-微波协同作用时间、微波功率、液固比和乙醇溶液浓度有极显著影响(
P <0.01)。根据极差分析结果(
表1 ), 淫羊藿生物碱超声波-微波协同提取优化工艺方案是A
4 B
5 C
5 D
1 E
3 , 即浸泡时间40分钟、超声波-微波协同作用18分钟、微波功率250 J∙s
-1 、液固比30 mL∙g
-1 、乙醇浓度70%。
表1 Table 1 表1 表1 正交试验设计、结果与极差分析
Table 1 Design, result and extreme difference of orthogonal test
Test No. Factor Mean extraction yield (mg∙g-1 ) (A) (B) (C)-1 ) Blank (D)-1 ) (E) 1 A1 16 B1 2 C1 50 1 D1 30 E1 50 14.361 2 A1 16 B2 6 C2 100 2 D2 35 E2 60 13.343 3 A1 16 B3 10 C3 150 3 D3 40 E3 70 12.015 4 A1 16 B4 14 C4 200 4 D4 45 E4 80 10.966 5 A1 16 B5 18 C5 250 5 D5 50 E5 90 9.221 6 A2 24 B1 2 C2 100 3 D4 45 E5 90 9.430 7 A2 24 B2 6 C3 150 4 D5 50 E1 50 9.696 8 A2 24 B3 10 C4 200 5 D1 30 E2 60 15.878 9 A2 24 B4 14 C5 250 1 D2 35 E3 70 14.259 10 A2 24 B5 18 C1 50 2 D3 40 E4 80 11.946 11 A3 32 B1 2 C3 150 5 D2 35 E4 80 12.869 12 A3 32 B2 6 C4 200 1 D3 40 E5 90 11.181 13 A3 32 B3 10 C5 250 2 D4 45 E1 50 10.934 14 A3 32 B4 14 C1 50 3 D5 50 E2 60 9.948 15 A3 32 B5 18 C2 100 4 D1 30 E3 70 15.833 16 A4 40 B1 2 C4 200 2 D5 50 E3 70 9.967 17 A4 40 B2 6 C5 250 3 D1 30 E4 80 15.758 18 A4 40 B3 10 C1 50 4 D2 35 E5 90 12.806 19 A4 40 B4 14 C2 100 5 D3 40 E1 50 12.022 20 A4 40 B5 18 C3 150 1 D4 45 E2 60 11.251 21 A5 48 B1 2 C5 250 4 D3 40 E2 60 11.895 22 A5 48 B2 6 C1 50 5 D4 45 E3 70 10.764 23 A5 48 B3 10 C2 100 1 D5 50 E4 80 9.765 24 A5 48 B4 14 C3 150 2 D1 30 E5 90 14.588 25 A5 48 B5 18 C4 200 3 D2 35 E1 50 13.640 T 1 59.906 58.522 59.824 60.817 76.417 60.652 T 2 61.209 60.741 60.393 60.779 66.917 62.315 T 3 60.766 61.398 60.418 60.791 59.059 62.839 T 4 61.803 61.784 61.632 61.196 53.345 61.303 T 5 60.652 61.891 62.086 60.753 48.598 57.226 K 1 11.981 11.704 11.965 12.163 15.284 12.131 K 2 12.242 12.148 12.079 12.156 13.383 12.463 K 3 12.153 12.280 12.084 12.158 11.812 12.568 K 4 12.361 12.357 12.326 12.239 10.669 12.261 K 5 12.131 12.378 12.414 12.151 9.720 11.445 R 0.379 0.674 0.449 0.089 5.564 1.123
R : 极差; Blank: 空白对照R : Extreme difference; Blank: Control 表1
正交试验设计、结果与极差分析
Table 1
Design, result and extreme difference of orthogonal test
表2 Table 2 表2 表2 正交试验方差分析
Table 2 Variance analysis of orthogonal test
Source Sum of squares dƒ Mean square F P Significance (A) Steeped time (min) 0.394 4 0.099 14.375 0.012 * (B) Ultrasound-microwave time (min) 1.537 4 0.384 56.051 0.001 ** (C) Microwave power (J∙s-1 ) 0.708 4 0.177 25.825 0.004 ** Blank 0.027 4 0.007 (D) Liquid to solid ratio (mL∙g-1 ) 97.760 4 24.440 3564.343 0.0001 ** (E) Ethanol concentration (%) 3.896 4 0.974 142.039 0.0001 ** Error 0.027 4 0.007 Total 104.323 28
Blank: 空白对照。* 差异显著(P <0.05); ** 差异极显著(P <0.01)。 Blank: Control. * Significant difference (P <0.05); ** Extremely significant difference (P <0.01). 表2
正交试验方差分析
Table 2
Variance analysis of orthogonal test
2.1.3 超声波-微波协同提取工艺验证
由于超声波-微波协同提取的优化工艺方案(A
4 B
5 C
5 D
1 E
3 )并未包含在正交试验的25组实验组合中, 因此我们在该提取条件下进行了验证实验, 并与正交试验中提取率最高的第8组实验进行了对比。结果表明, 优化工艺方案下的平均提取率(16.146 mg∙g
-1 )略高于第8组实验结果(15.857 mg∙g
-1 ), 说明通过正交试验优选得到的优化工艺方案合理可行。
2.1.4 超声波-微波协同提取法与其它提取法的比较
从
表3 可以看出, 超声波-微波协同提取法对淫羊藿生物碱的提取率显著高于其它3种提取方法(
P <0.05), 其提取率比超声波提取法、微波提取法和加热提取法分别高出5%、4%和6%。从
表3 还可看出, 超声波-微波协同提取法的可重复性相对较高(RSD=0.197)。
表3 Table 3 表3 表3 不同提取方法的提取效果比较
Table 3 Comparison of extraction yields between ultrasound-microwave assisted extraction and other extraction methods
Method Extraction yield (mg∙g-1 ) RSD (%) Replicate 1 Replicate 2 Replicate 3 Mean Ultrasound-microwave assisted 15.915 16.262 16.262 16.146 a 0.197 Ultrasound assisted extraction 15.780 15.453 14.972 15.402 bc 0.401 Microwave assisted extraction 15.626 15.357 15.626 15.536 bc 0.154 Heating extraction 15.472 14.952 15.472 15.299 c 0.296
同列数值后不同小写字母表示差异显著(P <0.05)。RSD: 相对标准偏差 The different lowercase letters in the same column mean significant differences (P <0.05). RSD: Relative standard deviation 表3
不同提取方法的提取效果比较
Table 3
Comparison of extraction yields between ultrasound-microwave assisted extraction and other extraction methods
2.2 淫羊藿生物碱超声波-微波协同提取机理2.2.1 扫描电子显微镜观察
为了揭示淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取机理, 我们用扫描电子显微镜观察了不同提取方法处理后淫羊藿叶片样品与未经提取处理样品的超微结构。结果(
图2 )显示, 未处理的淫羊藿样品表面基本平整, 没有明显损伤, 而经过超声波-微波协同提取处理后, 样品表面凹凸不平, 出现很多裂痕。类似地, 经过超声波提取法、微波提取法和加热提取法处理后的样品表面也表现不平整, 并出现一定数量的裂隙。
图2 https://www.chinbullbotany.com/article/2018/1674-3466/1674-3466-53-3-341/img_2.png <b>图2</b> 不同提取方法处理后淫羊藿样品的扫描电子显微图像<br/>(A) 超声波-微波协同提取法; (B) 超声波提取法; (C) 微波提取法; (D) 加热提取法; (E) 未处理<br/><b>Figure 2</b> Scanning electron micrographs of <i>Epime- dium brevicornum</i> leaf samples processed by different extraction methods<br/>(A) Ultrasound-microwave assisted extraction; (B) Ultrasound assisted extraction; (C) Microwave assisted extraction; (D) Heating extraction; (E) Untre- ated Figure 2 https://www.chinbullbotany.com/article/2018/1674-3466/1674-3466-53-3-341/img_2.png <b>图2</b> 不同提取方法处理后淫羊藿样品的扫描电子显微图像<br/>(A) 超声波-微波协同提取法; (B) 超声波提取法; (C) 微波提取法; (D) 加热提取法; (E) 未处理<br/><b>Figure 2</b> Scanning electron micrographs of <i>Epime- dium brevicornum</i> leaf samples processed by different extraction methods<br/>(A) Ultrasound-microwave assisted extraction; (B) Ultrasound assisted extraction; (C) Microwave assisted extraction; (D) Heating extraction; (E) Untre- ated 在新窗口打开 下载 下载原图ZIP 生成PPT 图2
不同提取方法处理后淫羊藿样品的扫描电子显微图像
(A) 超声波-微波协同提取法; (B) 超声波提取法; (C) 微波提取法; (D) 加热提取法; (E) 未处理
Figure 2
Scanning electron micrographs of
Epime- dium brevicornum leaf samples processed by different extraction methods
(A) Ultrasound-microwave assisted extraction; (B) Ultrasound assisted extraction; (C) Microwave assisted extraction; (D) Heating extraction; (E) Untre- ated
超声波在液体中传播时, 可以产生负压, 形成空穴。空穴的形成、增长以及向内破裂合称为空化现象(cavitation)。空化现象可产生高速液流, 冲击固体表面, 使之受到严重破坏(
Luque-Garciá and Luque de Castro, 2003 ;
Zhang et al., 2009 )。微波可以穿透植物材料并与其中的极性分子发生相互作用。极性分子吸收微波能量后迅速升温, 由此导致的过热现象(superheating)可使细胞壁或组织破裂(
Zhang et al., 2011 ,
2013a )。这可能是超声波-微波协同提取后淫羊藿样品超微结构出现严重破坏的原因。
2.2.2 激光粒度分析
为进一步了解超声波-微波协同提取后淫羊藿叶片样品的群体微观结构变化, 我们采用激光粒度分析技术对不同提取方法处理后样品与未经处理样品(阴性对照组)的粒度进行了监测。结果(
图3 )表明, 淫羊藿样品的粒度频率呈现正态分布, 其中100-250 μm粒度范围的样品量最多, 粒度小于1 μm和大于500 μm的样品量很少, 说明本研究所用样品规格整齐, 符合实验要求。超声波-微波协同提取后, 中、低粒度范围(50-100、10-50、5-10和1-5 μm)的样品量明显多于阴性对照组, 也略多于超声波提取法、微波提取法和加热提取法; 高粒度范围(100-250和250-500 μm)的样品量明显少于阴性对照组, 也略少于超声波提取法、微波提取法和加热提取法(
图3 )。激光粒度分析结果表明, 超声波-微波协同提取使淫羊藿叶片样品粒度明显减小, 这可能与超声波和微波对样品微观结构的破坏有关。
图3 https://www.chinbullbotany.com/article/2018/1674-3466/1674-3466-53-3-341/img_3.png <b>图3</b> 不同提取方法处理后淫羊藿样品粒度分布<br/><b>Figure 3</b> Particle size distribution of <i>Epimedium brevicornum</i> samples processed by different extraction methods Figure 3 https://www.chinbullbotany.com/article/2018/1674-3466/1674-3466-53-3-341/img_3.png <b>图3</b> 不同提取方法处理后淫羊藿样品粒度分布<br/><b>Figure 3</b> Particle size distribution of <i>Epimedium brevicornum</i> samples processed by different extraction methods 在新窗口打开 下载 下载原图ZIP 生成PPT 图3
不同提取方法处理后淫羊藿样品粒度分布
Figure 3
Particle size distribution of
Epimedium brevicornum samples processed by different extraction methods
大量研究表明, 植物生物碱可能是在液泡(vacuo- le)、叶绿体(chloroplast)或者特化小泡(vesicle)等细胞器中合成, 合成之后主要贮存于液泡中(
Blom et al., 1991 ;
Shitan and Yazaki, 2007 ;
Verma et al., 2012 )。在淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取过程中, 超声波产生的空化现象和微波引起的过热现象可能使淫羊藿叶片出现裂隙和破损, 造成细胞和细胞器损伤, 促进了生物碱从液泡等贮存部位溶出, 从而提高生物碱的提取率。
2.3 淫羊藿生物碱的鉴定2.3.1 碘化铋钾定性实验
本研究采用超声波-微波协同提取和纯化等工艺从淫羊藿中分离得到棕褐色的生物碱提取物。该提取物与碘化铋钾试剂反应结果呈阳性, 说明其中含有生物碱。
2.3.2 薄层色谱与高效液相色谱分析
淫羊藿生物碱的薄层色谱呈现出4个斑点, 其中1个斑点的迁移率、颜色与木兰花碱一致, 未发现与小檗碱相对应的斑点, 表明超声波-微波协同提取法制得的淫羊藿生物碱中含有木兰花碱, 不含小檗碱或其含量很低。高效液相色谱分析显示, 淫羊藿生物碱的色谱图中存在与木兰花碱对照品保留时间相一致的色谱峰; 将高浓度木兰花碱对照品溶液加入淫羊藿生物碱供试品溶液后, 该色谱峰面积会明显增加且保留时间不变。因此, 高效液相色谱分析结果也显示淫羊藿生物碱中含有木兰花碱。淫羊藿生物碱中的其它成分尚待进一步确认。
2.4 淫羊藿生物碱对HeLa细胞增殖的抑制作用由
图4 可知, 淫羊藿生物碱提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖具有显著的抑制作用。淫羊藿生物碱提取物作用24、48和72小时后, HeLa细胞的增殖明显受到抑制, 且呈现出剂量依赖性。作用72小时, 高浓度(400 μg∙mL
-1 )淫羊藿生物碱提取物对HeLa细胞增殖的抑制作用与木兰花碱无显著差异。总体上看, 木兰花碱对HeLa细胞增殖的抑制效果优于淫羊藿生物碱提取物, 但两者的抑制活性均低于硫酸长春花碱(
图4 ;
表4 )。
Li和Wang (2014) 的研究表明, 从马兜铃(
Aristolo- chia debilis )中分离得到的木兰花碱具有很强的酪氨酸激酶抑制活性, 表明木兰花碱可能具有一定的抗肿瘤作用。但是, 心叶淫羊藿中木兰花碱的含量非常低(0.003%-0.012%) (
高敏等, 2011 )。淫羊藿生物碱提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用可能与其中所含的木兰花碱有关, 但是木兰花碱所发挥的作用可能很有限, 淫羊藿生物碱提取物中可能还存在其它对HeLa细胞抑制活性较强的单体物质。因此, 淫羊藿生物碱的抗肿瘤活性与物质基础有待进一步探讨。
图4 https://www.chinbullbotany.com/article/2018/1674-3466/1674-3466-53-3-341/img_4.png <b>图4</b> 淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制率<br/>(A) 24小时; (B) 48小时; (C) 72小时。不同小写字母表示差异显著(<i>P</i><0.05)。<br/><b>Figure 4</b> Inhibition rate of <i>Epimedium brevicornum</i> alkaloids on human cervical cancer HeLa cells<br/>(A) 24 h; (B) 48 h; (C) 72 h. Different lowercase letters indicate significant differences (<i>P</i><0.05). Figure 4 https://www.chinbullbotany.com/article/2018/1674-3466/1674-3466-53-3-341/img_4.png <b>图4</b> 淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制率<br/>(A) 24小时; (B) 48小时; (C) 72小时。不同小写字母表示差异显著(<i>P</i><0.05)。<br/><b>Figure 4</b> Inhibition rate of <i>Epimedium brevicornum</i> alkaloids on human cervical cancer HeLa cells<br/>(A) 24 h; (B) 48 h; (C) 72 h. Different lowercase letters indicate significant differences (<i>P</i><0.05). 在新窗口打开 下载 下载原图ZIP 生成PPT 图4
淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制率
(A) 24小时; (B) 48小时; (C) 72小时。不同小写字母表示差异显著(
P <0.05)。
Figure 4
Inhibition rate of
Epimedium brevicornum alkaloids on human cervical cancer HeLa cells
(A) 24 h; (B) 48 h; (C) 72 h. Different lowercase letters indicate significant differences (
P <0.05).
表4 Table 4 表4 表4 淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用(平均值±标准误)
Table 4 Inhibitory effect of
Epimedium brevicornum alkaloids on human cervical cancer HeLa cells (means±SD)
Concentration-1 ) Inhibition rate (%) Epimedium brevicornum alkaloidsMagnoflorine Vinblastin sulfate 24 h 48 h 72 h 24 h 48 h 72 h 24 h 48 h 72 h 0 0.000± 0.000± 0.000± 0.000± 0.000± 0.000± 0.000± 0.000± 0.000± 20 1.354± 1.239± 4.435± 6.150± 13.541± 15.408± 19.142± 23.967± 28.283± 50 7.472± 9.010± 11.156± 23.583± 31.737± 32.191± 30.362± 43.853± 42.140± 100 18.811± 27.799± 30.129± 42.173± 57.217± 59.882± 56.205± 67.590± 71.598± 200 28.827± 42.880± 67.410± 54.315± 72.024± 75.961± 77.961± 82.618± 91.609± 300 35.134± 67.263± 82.682± 67.496± 76.609± 88.300± 86.866± 90.539± 95.317± 400 47.724± 74.015± 94.238± 73.354± 78.255± 93.591± 89.346± 95.637± 97.515± IC 50 >400 193.301 121.816 147.478 93.513± 77.672± 78.571± 57.159± 50.468± IC 25 130.490 71.873 56.048 48.857 31.541± 31.103± 29.803± 20.712± 18.863±
表4
淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用(平均值±标准误)
Table 4
Inhibitory effect of
Epimedium brevicornum alkaloids on human cervical cancer HeLa cells (means±SD)
2.5 讨论淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取优化工艺条件为: 浸泡时间40分钟, 超声波-微波协同作用18分钟, 微波功率为250 J∙s
-1 , 液固比为30 mL∙g
-1 , 乙醇溶液浓度为70%。超声波-微波协同提取法的提取率显著高于超声波提取法、微波提取法和加热提取法。超声波-微波协同作用可使淫羊藿叶片样品表面出现裂隙, 导致中、低粒度范围的样品量明显增多, 而高粒度范围的样品量明显减少。超声波-微波协同作用提高生物碱提取率的机理可能是超声波和微波使淫羊藿样品出现裂隙和破损, 造成细胞和细胞器损伤, 促进了生物碱从液泡等贮存部位中溶出。淫羊藿生物碱中含有木兰花碱, 不含小檗碱或其含量很低。超声波-微波协同提取法制取的淫羊藿生物碱提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖具有显著的抑制作用。本研究优选的超声波-微波协同提取技术提取率较高, 重复性较好, 且能够较好地保留生物碱提取物的某些活性成分, 因此在淫羊藿生物碱定量分析的样品制备(sample pre- paration)和规模化提取中具有一定的应用前景。由于设备等方面的限制, 本研究尚未开展中试和规模化试产, 需要今后加以补充。此外, 本研究虽然通过薄层色谱和高效液相色谱技术对淫羊藿生物碱中的木兰花碱和小檗碱进行了初步分析, 但是并未完全阐明生物碱提取物的化学组成。今后可考虑运用质谱和核磁共振等技术进一步揭示淫羊藿生物碱组分的化学结构。
The authors have declared that no competing interests exist. 参考文献 文献选项 原文顺序 文献年度倒序 文中引用次数倒序 被引期刊影响因子 [1] 陈翠萍 , 沙明 , 杨松松 , 张振学 (1996 ). 朝鲜淫羊藿中木兰碱的定量研究. 中国中药杂志 21, 681 -682, 704 .[2] 高敏 , 刘京晶 , 孙欣光 , 黄文华 , 郭宝林 , 肖培根 (2011 ). 中药淫羊藿主要资源种类木兰花碱含量的研究. 中国中药杂志 36, 16 -18 .[3] 国家药典委员会 (2015 ). 中华人民共和国药典(四部) . 北京: 中国医药科技出版社. pp. 57 -59, 322 . [4] 郝淼 , 张华峰 , 陈乐 , 李璐 (2015 ). 淫羊藿生物碱定量分析方法的建立与应用. 中国食品学报 15(4 ), 201 -207 .[5] 李璐 , 胡欢欢 , 张华峰 , 杨善慧 , 乔春雷 , 郝淼 (2016 ). 淫羊藿生物碱对大肠杆菌的抑菌作用. 陕西师范大学学报(自然科学版) 44(6 ), 74 -79 .[6] 李艳 , 杜蕾蕾 , 张小灵 , 刘川 , 赖先荣 , 张艺 , 范刚 (2014 ). 藏药小檗花的质量标准研究. 中药与临床 5(6 ), 6 -8, 12 .[7] 刘春明 , 刘志强 , 窦建鹏 , 李丽 , 刘淑莹 (2003 ). 朝鲜淫羊藿中生物碱类新成分的分离提取及结构鉴定. 高等学校化学学报 24, 2215 -2217 .[8] 牛丽丽 , 张华峰 , 陈乐 , 杨晓华 , 李璐 (2014 ). 基于近红外漫反射光谱快速测定淫羊藿蛋白质含量. 植物学报 49, 611 -617 .[9] 孙晨倩 , 陈乐 , 张华峰 , 杨晓华 , 杨娟 (2015 ). 一种快速定量分析药用植物淫羊藿生物碱的方法. 植物学报 50, 746 -753 .[10] 薛耀碧 , 张华峰 , 杨晓华 , 牛丽丽 , 张翔 , 刘冬 , 李建科 (2013 ). 近红外漫反射光谱法快速测定药用植物淫羊藿总黄酮含量. 植物学报 48, 65 -71 .[11] 袁航 , 曹树萍 , 陈抒云 , 过立农 , 郑健 , 林瑞超 (2014 ). 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Sequential ultrasound-microwave assisted acid extraction (UMAE) of pectin from pomelo peels.Int J Biol Macromol 93, 426 -435 .[20] Lopez-Acevedo M Grace L Teoh D Whitaker R Adams DJ Jia JQ Nixon AB Secord AA 2014 ). Dasatinib (BMS-35482) potentiates the activity of gemcitabine and docetaxel in uterine leiomyosarcoma cell lines.Gynecol Oncol Res Pract 1, 2 .[21] Luque-Garcı?a JL De Castro MDL 2003 ). Ultrasound: a powerful tool for leaching.Trends Analyt Chem 22, 41 -47 .[22] Nikoloff N Ponzinibbio MV Padula G De Luca JC Golijow CD Seoane A 2016 ). Folic acid enhances the apop- totic and genotoxic activity of carboplatin in HeLa cell line.Toxicol Vitro 37, 142 -147 .[23] Patil DM Akamanchi KG 2017 ). Ultrasound-assisted rapid extraction and kinetic modelling of influential factors: extraction of camptothecin from Nothapodytes nimmoniana plant. Ultrason Sonochem 37, 582 -591 .[24] Shitan N Yazaki K 2007 ). Accumulation and membrane transport of plant alkaloids.Curr Pharm Biotechnol 8, 244 -252 .[25] Van De Velde ME Kaspers GL Abbink FCH Wilhelm AJ Ket JCF Van Den Berg MH 2017 ). Vincristine-induced peripheral neuropathy in children with cancer: a systematic review.Crit Rev Oncol Hematol 114, 114 -130 .[26] Verma P Mathur AK Srivastava A Mathur A 2012 ). Emerging trends in research on spatial and temporal organization of terpenoid indole alkaloid pathway in Catharanthus roseus : a literature update. Protoplasma 249, 255 -268 .[27] Vinatoru M 2001 ). An overview of the ultrasonically assisted extraction of bioactive principles from herbs.Ultrason So- nochem 8, 303 -313 .[28] Zhang HF Yang XH 2012 ). Asian medicine: protect rare plants.Nature 482, 35 .[29] Zhang HF Yang XH Wang Y 2011 ). Microwave assisted extraction of secondary metabolites from plants: current status and future directions.Trends Food Sci Technol 22, 672 -688 .[30] Zhang HF Yang XH Zhao LD Wang Y 2009 ). 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朝鲜淫羊藿中木兰碱的定量研究
2
1996
... 采用
陈翠萍等(1996) 建立的高效液相色谱法对淫羊藿生物碱进行分离.根据色谱峰保留时间(retention time)和共注射(co-injection)结果对生物碱组分进行定性分析(
陈翠萍等, 1996 ;
Zhou and Liu, 2006 ). ...
... 建立的高效液相色谱法对淫羊藿生物碱进行分离.根据色谱峰保留时间(retention time)和共注射(co-injection)结果对生物碱组分进行定性分析(
陈翠萍等, 1996 ;
Zhou and Liu, 2006 ). ...
中药淫羊藿主要资源种类木兰花碱含量的研究
1
2011
... 由
图4 可知, 淫羊藿生物碱提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖具有显著的抑制作用.淫羊藿生物碱提取物作用24、48和72小时后, HeLa细胞的增殖明显受到抑制, 且呈现出剂量依赖性.作用72小时, 高浓度(400 μg∙mL
-1 )淫羊藿生物碱提取物对HeLa细胞增殖的抑制作用与木兰花碱无显著差异.总体上看, 木兰花碱对HeLa细胞增殖的抑制效果优于淫羊藿生物碱提取物, 但两者的抑制活性均低于硫酸长春花碱(
图4 ;
表4 ).
Li和Wang (2014) 的研究表明, 从马兜铃(
Aristolo- chia debilis )中分离得到的木兰花碱具有很强的酪氨酸激酶抑制活性, 表明木兰花碱可能具有一定的抗肿瘤作用.但是, 心叶淫羊藿中木兰花碱的含量非常低(0.003%-0.012%) (
高敏等, 2011 ).淫羊藿生物碱提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用可能与其中所含的木兰花碱有关, 但是木兰花碱所发挥的作用可能很有限, 淫羊藿生物碱提取物中可能还存在其它对HeLa细胞抑制活性较强的单体物质.因此, 淫羊藿生物碱的抗肿瘤活性与物质基础有待进一步探讨. ...
国家药典委员会
2
2015
... 使用碘化铋钾试剂对淫羊藿生物碱进行定性分析(
郝淼等, 2015 ;
国家药典委员会, 2015 ). ...
... 参考《中国药典》所述方法对淫羊藿生物碱进行薄层色谱分析(
国家药典委员会, 2015 ).用甲醇分别配制1 mg∙mL
-1 的木兰花碱、小檗碱对照品溶液和10 mg∙mL
-1 的淫羊藿生物碱供试溶液.吸取上述溶液各2 μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(6:3:3:2:1, v/v)为展开剂(
李艳等, 2014 ), 置于氨蒸气预饱和15分钟的层析缸内展开.晾干后在紫外光(365 nm)下检视. ...
淫羊藿生物碱定量分析方法的建立与应用
3
2015
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
... 使用碘化铋钾试剂对淫羊藿生物碱进行定性分析(
郝淼等, 2015 ;
国家药典委员会, 2015 ). ...
... 采用本实验室建立的紫外分光光度法测定淫羊藿提取液中生物碱的含量(
郝淼等, 2015 ).淫羊藿生物碱提取率计算公式如下: ...
淫羊藿生物碱对大肠杆菌的抑菌作用
1
2016
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
藏药小檗花的质量标准研究
1
2014
... 参考《中国药典》所述方法对淫羊藿生物碱进行薄层色谱分析(
国家药典委员会, 2015 ).用甲醇分别配制1 mg∙mL
-1 的木兰花碱、小檗碱对照品溶液和10 mg∙mL
-1 的淫羊藿生物碱供试溶液.吸取上述溶液各2 μL, 分别点于同一硅胶G薄层板上, 以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水(6:3:3:2:1, v/v)为展开剂(
李艳等, 2014 ), 置于氨蒸气预饱和15分钟的层析缸内展开.晾干后在紫外光(365 nm)下检视. ...
朝鲜淫羊藿中生物碱类新成分的分离提取及结构鉴定
2
2003
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
...
参考刘春明等(2003) 的方法纯化淫羊藿生物碱.将淫羊藿生物碱样品溶液减压浓缩成深绿色溶液, 在浓缩液中加入等量蒸馏水后离心沉降, 除去叶绿素.然后加入酸性水溶液(pH2.0, 用浓盐酸调配)溶解, 过滤除去其中不溶于水的亲脂性杂质.再将酸性水溶液碱化(pH10.0, 用浓氨水调配), 使生物碱游离出来.然后用0.45 μm水系滤膜过滤3次, 收集上清液.先蒸发浓缩, 后真空冻干, 即得淫羊藿生物碱样品. ...
基于近红外漫反射光谱快速测定淫羊藿蛋白质含量
2
2014
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
... 在浸泡时间为40分钟、超声波-微波协同作用20分钟、微波功率为200 J∙s
-1 、液固比为40 mL∙g
-1 的条件下, 乙醇溶液浓度对淫羊藿生物碱提取率的影响见
图1E .当乙醇溶液浓度在0-80%范围内时, 随着乙醇浓度的增加, 生物碱提取率逐渐增大(
P <0.05); 当乙醇浓度超过80%时, 提取率显著减小(
P <0.05); 当浓度为80%时, 提取率最高.其原因可能包括: (1) 淫羊藿生物碱在80%乙醇溶液中的溶解性较好; (2) 乙醇溶液浓度超过80%时, 淫羊藿样品中的蛋白质等大分子物质易发生凝聚作用(
牛丽丽等, 2014 ), 从而阻碍生物碱的溶出. ...
一种快速定量分析药用植物淫羊藿生物碱的方法
1
2015
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
近红外漫反射光谱法快速测定药用植物淫羊藿总黄酮含量
1
2013
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
RRLC-DAD-ESI-MS
2 分析天平山淫羊藿中的11个化学成分
1
2014
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
药用植物淫羊藿资源可持续利用现状与展望
1
2009
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
1
2017
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
1
1991
... 大量研究表明, 植物生物碱可能是在液泡(vacuo- le)、叶绿体(chloroplast)或者特化小泡(vesicle)等细胞器中合成, 合成之后主要贮存于液泡中(
Blom et al., 1991 ;
Shitan and Yazaki, 2007 ;
Verma et al., 2012 ).在淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取过程中, 超声波产生的空化现象和微波引起的过热现象可能使淫羊藿叶片出现裂隙和破损, 造成细胞和细胞器损伤, 促进了生物碱从液泡等贮存部位溶出, 从而提高生物碱的提取率. ...
2
2016
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
... 在浸泡时间为40分钟、超声波-微波协同作用20分钟、微波功率为200 J∙s
-1 、乙醇溶液浓度为50%的条件下, 随着液固比的增大(提取溶剂体积不变), 淫羊藿生物碱的提取率呈现先增加后降低的趋势(
图1D ).在10-40 mL∙g
-1 范围内, 增加液固比有利于生物碱的溶出(
P <0.05); 当液固比达到40 mL∙g
-1 时, 生物碱的提取率最高; 当液固比超过40 mL∙g
-1 时, 继续增加液固比, 生物碱的提取率反而显著下降(
P <0.05).
Chen等(2016) 在用超声波-微波辅助提取紫斑牡丹(
Paeo- nia rockii )种子中白藜芦醇(resveratrol)时, 发现提取率随着液固比的增加先升高后降低.在常规的溶剂提取过程中, 液固比越大, 提取率通常越高(
Zhang et al., 2013a ).但是, 在超声波-微波协同作用过程中, 过量的超声波-微波能量可能导致目标化合物发生降解或转化(
Vinatoru, 2001 ;
Zhang et al., 2011 ).在淫羊藿生物碱提取过程中, 随着液固比的增加(提取溶剂体积不变), 淫羊藿样品的质量和生物碱的溶出量均不断减少, 单位生物碱吸收的超声波、微波能量逐渐增多, 其降解率或转化率可能随之增高, 从而造成液固比过高时提取率反而降低.因此, 将液固比控制在40 mL∙g
-1 较为合适. ...
1
2017
... 将用不同提取方法处理后的淫羊藿样品自然晾干, 以未经提取的淫羊藿样品为对照, 以蒸馏水为分散剂, 分别投入激光粒度分析仪高速循环样品池, 采用通用模式在0.02-2 000 μm范围内测定粒度分布(
Fida- leo et al., 2017 ).激光粒度分析仪参数设置如下: 颗粒折射率为2.600; 颗粒吸收率为0; 分散剂为去离子水; 分散剂折射率为1.330. ...
1
2016
... 大量研究表明, 植物中很多生物碱都具有较强的抗肿瘤活性, 长春新碱(vincristine)和喜树碱(camp- tothecin)等已经成为临床抗肿瘤药物(
van de Velde et al., 2017 ;
Patil and Akamanchi, 2017 ).小檗科小檗属(
Berberis )植物中广泛分布的小檗碱(berberine)也具有较强的抗肿瘤活性(
Kou et al., 2016 ).但是, 有关小檗科淫羊藿属植物中生物碱抗肿瘤活性鉴定的研究迄今未见报道.鉴于此, 本研究选择《中国药典》收录的心叶淫羊藿(
E. brevicornum )作为实验材料, 采用正交试验法优选淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取工艺, 用扫描电子显微镜和激光粒度分析法探讨提取机理, 采用薄层色谱法和高效液相色谱法分析生物碱的化学组成, 在此基础上研究淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用, 以期为药用植物淫羊藿资源的开发利用提供理论依据. ...
1
2014
... 由
图4 可知, 淫羊藿生物碱提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖具有显著的抑制作用.淫羊藿生物碱提取物作用24、48和72小时后, HeLa细胞的增殖明显受到抑制, 且呈现出剂量依赖性.作用72小时, 高浓度(400 μg∙mL
-1 )淫羊藿生物碱提取物对HeLa细胞增殖的抑制作用与木兰花碱无显著差异.总体上看, 木兰花碱对HeLa细胞增殖的抑制效果优于淫羊藿生物碱提取物, 但两者的抑制活性均低于硫酸长春花碱(
图4 ;
表4 ).
Li和Wang (2014) 的研究表明, 从马兜铃(
Aristolo- chia debilis )中分离得到的木兰花碱具有很强的酪氨酸激酶抑制活性, 表明木兰花碱可能具有一定的抗肿瘤作用.但是, 心叶淫羊藿中木兰花碱的含量非常低(0.003%-0.012%) (
高敏等, 2011 ).淫羊藿生物碱提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用可能与其中所含的木兰花碱有关, 但是木兰花碱所发挥的作用可能很有限, 淫羊藿生物碱提取物中可能还存在其它对HeLa细胞抑制活性较强的单体物质.因此, 淫羊藿生物碱的抗肿瘤活性与物质基础有待进一步探讨. ...
1
2016
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
1
2014
... 按照
Lopez-Acevedo等(2014) 的方法计算50%细胞抑制浓度(
IC 50 )和25%细胞抑制浓度(
IC 25 ). ...
1
2003
... 超声波在液体中传播时, 可以产生负压, 形成空穴.空穴的形成、增长以及向内破裂合称为空化现象(cavitation).空化现象可产生高速液流, 冲击固体表面, 使之受到严重破坏(
Luque-Garciá and Luque de Castro, 2003 ;
Zhang et al., 2009 ).微波可以穿透植物材料并与其中的极性分子发生相互作用.极性分子吸收微波能量后迅速升温, 由此导致的过热现象(superheating)可使细胞壁或组织破裂(
Zhang et al., 2011 ,
2013a ).这可能是超声波-微波协同提取后淫羊藿样品超微结构出现严重破坏的原因. ...
1
2016
... 在培养温度为37°C、CO
2 体积分数为5%的饱和湿度培养箱中培养HeLa细胞, 选用含10%胎牛血清、1×10
5 U∙L
-1 青霉素和链霉素的RPMI-1640培养基.每2-3天继代1次, 取对数生长期细胞进行实验.将HeLa细胞浓度调整为1.5×10
4 个∙mL
-1 , 接种于96孔板, 每孔加细胞悬液200 μL, 分别用浓度为0、20、50、100、200、300和400 μg∙mL
-1 的淫羊藿生物碱样品溶液处理细胞, 每个浓度设6个复孔, 同时设二甲基亚砜(DMSO)对照组.所有处理及对照均置于CO
2 细胞培养箱中培养24、48和72小时,然后每孔加入20 μL 5 mg∙mL
-1 MTT (3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)溶液, 继续温育4小时后终止培养.弃孔内上清液, 每孔加入200 μL DMSO, 振荡10分钟, 使结晶充分溶解(
Nikoloff et al., 2016 ).用酶标仪分别测定实验组(
A test )和对照组(
A ck )在490 nm波长处的吸光度, 计算细胞增殖抑制率(
I ). ...
1
2017
... 大量研究表明, 植物中很多生物碱都具有较强的抗肿瘤活性, 长春新碱(vincristine)和喜树碱(camp- tothecin)等已经成为临床抗肿瘤药物(
van de Velde et al., 2017 ;
Patil and Akamanchi, 2017 ).小檗科小檗属(
Berberis )植物中广泛分布的小檗碱(berberine)也具有较强的抗肿瘤活性(
Kou et al., 2016 ).但是, 有关小檗科淫羊藿属植物中生物碱抗肿瘤活性鉴定的研究迄今未见报道.鉴于此, 本研究选择《中国药典》收录的心叶淫羊藿(
E. brevicornum )作为实验材料, 采用正交试验法优选淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取工艺, 用扫描电子显微镜和激光粒度分析法探讨提取机理, 采用薄层色谱法和高效液相色谱法分析生物碱的化学组成, 在此基础上研究淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用, 以期为药用植物淫羊藿资源的开发利用提供理论依据. ...
1
2007
... 大量研究表明, 植物生物碱可能是在液泡(vacuo- le)、叶绿体(chloroplast)或者特化小泡(vesicle)等细胞器中合成, 合成之后主要贮存于液泡中(
Blom et al., 1991 ;
Shitan and Yazaki, 2007 ;
Verma et al., 2012 ).在淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取过程中, 超声波产生的空化现象和微波引起的过热现象可能使淫羊藿叶片出现裂隙和破损, 造成细胞和细胞器损伤, 促进了生物碱从液泡等贮存部位溶出, 从而提高生物碱的提取率. ...
1
2017
... 大量研究表明, 植物中很多生物碱都具有较强的抗肿瘤活性, 长春新碱(vincristine)和喜树碱(camp- tothecin)等已经成为临床抗肿瘤药物(
van de Velde et al., 2017 ;
Patil and Akamanchi, 2017 ).小檗科小檗属(
Berberis )植物中广泛分布的小檗碱(berberine)也具有较强的抗肿瘤活性(
Kou et al., 2016 ).但是, 有关小檗科淫羊藿属植物中生物碱抗肿瘤活性鉴定的研究迄今未见报道.鉴于此, 本研究选择《中国药典》收录的心叶淫羊藿(
E. brevicornum )作为实验材料, 采用正交试验法优选淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取工艺, 用扫描电子显微镜和激光粒度分析法探讨提取机理, 采用薄层色谱法和高效液相色谱法分析生物碱的化学组成, 在此基础上研究淫羊藿生物碱对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用, 以期为药用植物淫羊藿资源的开发利用提供理论依据. ...
1
2012
... 大量研究表明, 植物生物碱可能是在液泡(vacuo- le)、叶绿体(chloroplast)或者特化小泡(vesicle)等细胞器中合成, 合成之后主要贮存于液泡中(
Blom et al., 1991 ;
Shitan and Yazaki, 2007 ;
Verma et al., 2012 ).在淫羊藿生物碱的超声波-微波协同提取过程中, 超声波产生的空化现象和微波引起的过热现象可能使淫羊藿叶片出现裂隙和破损, 造成细胞和细胞器损伤, 促进了生物碱从液泡等贮存部位溶出, 从而提高生物碱的提取率. ...
1
2001
... 在浸泡时间为40分钟、超声波-微波协同作用20分钟、微波功率为200 J∙s
-1 、乙醇溶液浓度为50%的条件下, 随着液固比的增大(提取溶剂体积不变), 淫羊藿生物碱的提取率呈现先增加后降低的趋势(
图1D ).在10-40 mL∙g
-1 范围内, 增加液固比有利于生物碱的溶出(
P <0.05); 当液固比达到40 mL∙g
-1 时, 生物碱的提取率最高; 当液固比超过40 mL∙g
-1 时, 继续增加液固比, 生物碱的提取率反而显著下降(
P <0.05).
Chen等(2016) 在用超声波-微波辅助提取紫斑牡丹(
Paeo- nia rockii )种子中白藜芦醇(resveratrol)时, 发现提取率随着液固比的增加先升高后降低.在常规的溶剂提取过程中, 液固比越大, 提取率通常越高(
Zhang et al., 2013a ).但是, 在超声波-微波协同作用过程中, 过量的超声波-微波能量可能导致目标化合物发生降解或转化(
Vinatoru, 2001 ;
Zhang et al., 2011 ).在淫羊藿生物碱提取过程中, 随着液固比的增加(提取溶剂体积不变), 淫羊藿样品的质量和生物碱的溶出量均不断减少, 单位生物碱吸收的超声波、微波能量逐渐增多, 其降解率或转化率可能随之增高, 从而造成液固比过高时提取率反而降低.因此, 将液固比控制在40 mL∙g
-1 较为合适. ...
1
2012
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
3
2011
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
... 在浸泡时间为40分钟、超声波-微波协同作用20分钟、微波功率为200 J∙s
-1 、乙醇溶液浓度为50%的条件下, 随着液固比的增大(提取溶剂体积不变), 淫羊藿生物碱的提取率呈现先增加后降低的趋势(
图1D ).在10-40 mL∙g
-1 范围内, 增加液固比有利于生物碱的溶出(
P <0.05); 当液固比达到40 mL∙g
-1 时, 生物碱的提取率最高; 当液固比超过40 mL∙g
-1 时, 继续增加液固比, 生物碱的提取率反而显著下降(
P <0.05).
Chen等(2016) 在用超声波-微波辅助提取紫斑牡丹(
Paeo- nia rockii )种子中白藜芦醇(resveratrol)时, 发现提取率随着液固比的增加先升高后降低.在常规的溶剂提取过程中, 液固比越大, 提取率通常越高(
Zhang et al., 2013a ).但是, 在超声波-微波协同作用过程中, 过量的超声波-微波能量可能导致目标化合物发生降解或转化(
Vinatoru, 2001 ;
Zhang et al., 2011 ).在淫羊藿生物碱提取过程中, 随着液固比的增加(提取溶剂体积不变), 淫羊藿样品的质量和生物碱的溶出量均不断减少, 单位生物碱吸收的超声波、微波能量逐渐增多, 其降解率或转化率可能随之增高, 从而造成液固比过高时提取率反而降低.因此, 将液固比控制在40 mL∙g
-1 较为合适. ...
... 超声波在液体中传播时, 可以产生负压, 形成空穴.空穴的形成、增长以及向内破裂合称为空化现象(cavitation).空化现象可产生高速液流, 冲击固体表面, 使之受到严重破坏(
Luque-Garciá and Luque de Castro, 2003 ;
Zhang et al., 2009 ).微波可以穿透植物材料并与其中的极性分子发生相互作用.极性分子吸收微波能量后迅速升温, 由此导致的过热现象(superheating)可使细胞壁或组织破裂(
Zhang et al., 2011 ,
2013a ).这可能是超声波-微波协同提取后淫羊藿样品超微结构出现严重破坏的原因. ...
1
2009
... 超声波在液体中传播时, 可以产生负压, 形成空穴.空穴的形成、增长以及向内破裂合称为空化现象(cavitation).空化现象可产生高速液流, 冲击固体表面, 使之受到严重破坏(
Luque-Garciá and Luque de Castro, 2003 ;
Zhang et al., 2009 ).微波可以穿透植物材料并与其中的极性分子发生相互作用.极性分子吸收微波能量后迅速升温, 由此导致的过热现象(superheating)可使细胞壁或组织破裂(
Zhang et al., 2011 ,
2013a ).这可能是超声波-微波协同提取后淫羊藿样品超微结构出现严重破坏的原因. ...
3
2013
... 用扫描电子显微镜观察不同提取方法下淫羊藿样品的超微结构(
Zhang et al., 2013a ). ...
... 在浸泡时间为40分钟、超声波-微波协同作用20分钟、微波功率为200 J∙s
-1 、乙醇溶液浓度为50%的条件下, 随着液固比的增大(提取溶剂体积不变), 淫羊藿生物碱的提取率呈现先增加后降低的趋势(
图1D ).在10-40 mL∙g
-1 范围内, 增加液固比有利于生物碱的溶出(
P <0.05); 当液固比达到40 mL∙g
-1 时, 生物碱的提取率最高; 当液固比超过40 mL∙g
-1 时, 继续增加液固比, 生物碱的提取率反而显著下降(
P <0.05).
Chen等(2016) 在用超声波-微波辅助提取紫斑牡丹(
Paeo- nia rockii )种子中白藜芦醇(resveratrol)时, 发现提取率随着液固比的增加先升高后降低.在常规的溶剂提取过程中, 液固比越大, 提取率通常越高(
Zhang et al., 2013a ).但是, 在超声波-微波协同作用过程中, 过量的超声波-微波能量可能导致目标化合物发生降解或转化(
Vinatoru, 2001 ;
Zhang et al., 2011 ).在淫羊藿生物碱提取过程中, 随着液固比的增加(提取溶剂体积不变), 淫羊藿样品的质量和生物碱的溶出量均不断减少, 单位生物碱吸收的超声波、微波能量逐渐增多, 其降解率或转化率可能随之增高, 从而造成液固比过高时提取率反而降低.因此, 将液固比控制在40 mL∙g
-1 较为合适. ...
... 超声波在液体中传播时, 可以产生负压, 形成空穴.空穴的形成、增长以及向内破裂合称为空化现象(cavitation).空化现象可产生高速液流, 冲击固体表面, 使之受到严重破坏(
Luque-Garciá and Luque de Castro, 2003 ;
Zhang et al., 2009 ).微波可以穿透植物材料并与其中的极性分子发生相互作用.极性分子吸收微波能量后迅速升温, 由此导致的过热现象(superheating)可使细胞壁或组织破裂(
Zhang et al., 2011 ,
2013a ).这可能是超声波-微波协同提取后淫羊藿样品超微结构出现严重破坏的原因. ...
1
2013
... 淫羊藿为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(
Epi- medium )植物, 含有黄酮类化合物(flavonoids)、多糖(polysaccharides)、生物碱(alkaloids)以及木脂素(lig- nans)等多种生物活性物质(
张华峰等, 2009 ;
薛耀碧等, 2013 ), 是我国著名的药用植物(
Zhang and Yang, 2012 ;
牛丽丽等, 2014 ).陈翠萍等(1996)建立了定量分析朝鲜淫羊藿(
E. koreanum )中木兰花碱(magnoflorine)的高效液相色谱法.本实验室建立了定量分析淫羊藿生物碱的紫外分光光度法和近红外漫反射光谱法(
郝淼等, 2015 ;
孙晨倩等, 2015 ).
刘春明等(2003) 利用核磁共振与质谱技术从朝鲜淫羊藿中鉴定出淫羊藿碱A.
袁航等(2014) 采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法从天平山淫羊藿 (
E. myrianthum )中分离鉴定了木兰花碱.
Zhang等(2013b) 从朝鲜淫羊藿中分离得到了一种生物碱(epimediphine), 并证实其具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性.本实验室研究表明, 淫羊藿生物碱能抑制大肠杆菌(
Escherichia coli )对数期的生长, 使菌体之间相互粘连、聚团, 菌体表面出现孔洞和凹陷, 细胞外层严重破损(
李璐等, 2016 ).研究淫羊藿生物碱的分离提取与药理活性对于淫羊藿资源的科学开发和综合利用具有一定的实用价值.超声波-微波协同提取技术整合了超声波提取法与微波提取法的优势, 是一种具有较好应用前景的新兴提取技术(
Zhang et al., 2011 ;
Chen et al., 2016 ).研究表明, 超声波-微波协同提取法对雪柚(
Citrus grandis )果皮中果胶(pectin)的提取率显著高于超声波提取法和微波提取法(
Liew et al., 2016 ); 采用超声波-微波协同提取法从大冠香薄荷(
Satureja macrostema )中分离到的酚类化合物(phenolic compounds)其抗氧化活性明显高于回流提取法(
Alonso-Carrillo et al., 2017 ).迄今未见采用超声波-微波协同提取技术制备淫羊藿生物碱的报道. ...
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2006
... 采用
陈翠萍等(1996) 建立的高效液相色谱法对淫羊藿生物碱进行分离.根据色谱峰保留时间(retention time)和共注射(co-injection)结果对生物碱组分进行定性分析(
陈翠萍等, 1996 ;
Zhou and Liu, 2006 ). ...
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表1 正交试验设计、结果与极差分析 Table 1 Design, result and extreme difference of orthogonal test
