氧化苦参碱改善缺氧缺血引起的HaCaT细胞氧化应激损伤

刘淑丹,张飞燕,郭松林,梁雪云,陈冬梅

发布日期:2021-04-06
通讯作者:陈冬梅. E-mail:chendm1981@163.com

基金资助:国家自然科学基金(81960355);宁夏自然科学基金(2018AAC03147)

Oxymatrine ameliorates oxidative stress injury of HaCaT cells induced by hypoxia ischemia

LIU Shudan, ZHANG Feiyan, GUO Songlin, LIANG Xueyun, CHEN Dongmei

Human Stem Cell Institute, General Hospital of Ningxia Medical University;
Ningxia Key Laboratory of Stem Cell and Regenerative Medicine, Yinchuan 750004, Ningxia, China

Published:2021-04-06

摘要/Abstract

摘要： 目的 探讨氧化苦参碱(OMT)对缺氧缺血环境下角质形成细胞损伤的保护作用。 方法 选择体外培养的人角质形成细胞系HaCaT细胞,分为正常对照组(NC组)、模型组(HI组)、OMT低剂量组(0.05 g/L OMT组)、OMT高剂量组(0.1 g/L OMT组)4组。采用活细胞数量检测试剂盒CCK8检测HaCaT细胞增殖抑制率和活力,磷脂结合蛋白V(Annexin V)染色检测凋亡率,线粒体膜电位探针JC-1检测HaCaT细胞线粒体膜电位变化,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测HaCaT细胞活性氧(ROS)水平,比色法检测HaCaT细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总抗氧化能力(T-AOC)活力, Western blotting检测凋亡基因天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)、Cleaved-Caspase 3、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)及TGF-β1/SMAD3通路蛋白的表达量。 结果 与NC组相比,HI组HaCaT细胞Ki67阳性率［(13.52±2.89)%,P<0.001)［和线粒体膜电位降低(0.54±0.03,P<0.001),凋亡细胞数量(13.83±0.81,P<0.001)、ROS水平(164.31±16.93,P<0.001)升高,细胞中GSH-Px(0.96±0.05,P<0.001)、 SOD(0.67±0.06,P<0.001)和T-AOC(1.90±0.02,P<0.001)水平下降。 0.05 g/L OMT干预后,HaCaT细胞Ki67阳性率［(57.98±9.81)%,P<0.001)］和线粒体膜电位升高(0.81±0.04,P<0.001),凋亡细胞数量(8.10±0.53,P<0.001)、ROS水平(175.94±15.75,P<0.001)降低,细胞中GSH-Px(1.04±0.05,P<0.001)、SOD(0.86±0.04,P<0.001)和T-AOC(2.08±0.03,P<0.001)水平升高;Western blotting结果显示:HI处理使HaCaT细胞中TGF-β1信号通路蛋白TGF-β1(1.15±0.14,P=0.010)、 p-SMAD3(0.13±0.03,P=0.112)表达上调,凋亡信号蛋白Caspase-3(0.37±0.045,P=0.001)、Cleaved-Caspase 3(0.54±0.03,P=0.108)蛋白相对表达量较正常培养组均上调;添加0.05 g/L OMT处理后,与HI模型组相比,HaCaT细胞中TGF-β1(0.69±0.13,P=0.005)、 p-SMAD3(0.07±0.01,P<0.001)、 Caspase-3(0.21±0.041,P=0.006)、Cleaved-Caspase 3(0.29±0.054,P=0.016)蛋白相对表达量均下降,Bcl-2蛋白相对表达量升高(0.35±0.013, P=0.015); 0.1 g/L OMT组与0.05 g/L OMT组相比,除Ki67阳性率(P<0.001)、SOD活力(P<0.001)和Bcl-2表达(P=0.045)差异有统计学意义外,其他指标差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论 0.05~0.1 g/L的OMT能够通过抑制TGFβ1/SMAD3通路来减轻缺氧缺血诱导的细胞线粒体功能障碍、氧化损伤和凋亡,从而保护角质形成细胞的存活。


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