摘要： 【目的】松墨天牛Monochamus alternatus是我国南方松林中的重要蛀干害虫，也是林业检疫性病害——松材线虫病的主要媒介昆虫，其分布范围较广，对温度的适应性强，本研究旨在初步探讨松墨天牛对温度胁迫适应性的分子机制。【方法】采用RT-PCR与RACE技术克隆松墨天牛小热激蛋白(small heat shock protein, sHSP)基因的全长cDNA，结合生物信息学方法分析小热激蛋白的结构特征；利用qPCR技术测定该基因在松墨天牛不同发育阶段、4龄幼虫不同组织及不同低温和高温胁迫下4龄幼虫中的表达谱，并用geNorm, NormFinder和BestKeeper软件对不同温度下内参基因稳定性进行评价。【结果】获得松墨天牛sHSP基因的cDNA全长序列，命名为MaltHSP21.20 (GenBank登录号: MH091811)，全长为871 bp，编码187个氨基酸，信号肽预测表明其N末端含有18个氨基酸的信号肽，成熟蛋白预测分子质量为21.20 kD，等电点为8.65。结构域预测符合小热激蛋白家族的特征，共含有10个β折叠片，在α结构域内含有7个β折叠片。进化树分析表明该蛋白氨基酸序列与光肩星天牛 Anoplophora glabripennis 的sHSP有较高的同源性。不同软件分析得到最稳定的内参基因存在差异，结合3种方法评价得出RPL10最为稳定。MaltHSP21.20在不同发育阶段的松墨天牛体内均有表达，滞育幼虫中表达量最高，卵期及蛹期表达量次之；在4龄幼虫不同组织中均有分布，脂肪体中表达量最高；4龄幼虫MaltHSP21.20对低温诱导无响应，其表达量在35℃时显著上调，45℃处理2和3 h最高，50℃时下降。【结论】RPL10是不同温度胁迫下较稳定的内参基因。相比其他热激蛋白基因，MaltHSP21.20对低温敏感性较低，推测其在幼虫滞育越冬及抵抗高温中发挥重要作用。
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松墨天牛小热激蛋白基因的克隆、表达谱及对温度胁迫的响应
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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