摘要： 【目的】克隆褐飞虱Nilaparvata lugens ATP合酶b亚基基因全长cDNA序列，并通过RNA干扰技术对该基因的功能进行研究，探讨其在褐飞虱防治中的潜在价值。【方法】根据本实验室获得的褐飞虱转录组测序数据提供的ATP合酶b亚基基因部分核心序列信息，以水稻品种TN1饲养的褐飞虱为材料，应用cDNA末端快速扩增技术（RACE）获得全长cDNA；通过实时荧光定量PCR技术研究其在褐飞虱不同发育阶段和5龄若虫不同组织中的表达谱；并利用褐飞虱2龄若虫通过饲喂法对该基因进行RNAi实验。【结果】成功克隆了褐飞虱ATP合酶b亚基基因ATPSb的全长cDNA序列（GenBank登录号: MF973493）。该序列包含一个843 bp的完整开放阅读框，编码280个氨基酸。荧光定量PCR表明，ATPSb基因的mRNA水平在褐飞虱不同发育阶段以1-2龄若虫期为高，随着龄期增大呈下降趋势，在雌成虫中也随着羽化时间增加而下降，在雄成虫中的表达量高于雌成虫。在5龄若虫不同组织中的表达量以胸部中为最高，头部、中肠、卵巢和脂肪体中相对表达量较低。从靶向ATPSb基因的RNA干扰第6天起，处理组中靶标基因的mRNA水平降低，并且RNA干扰对褐飞虱若虫具有显著致死效果；在RNA干扰后第18天时，对照组个体存活率仍保持在约80%的较高水平，而饲喂dsATPSb的RNA干扰组基本无个体存活。【结论】本研究结果显示，ATPSb基因对褐飞虱的生存具有重要作用，靶向ATPSb基因的RNA干扰对褐飞虱具有显著的抑制效果，ATPSb基因可以作为褐飞虱防治的潜在靶标进行深入研究。
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褐飞虱ATP合酶b亚基基因ATPSb的克隆与功能分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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