摘要: 【目的】克隆草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的组织蛋白酶L(cathepsin L, CatL)基因,分析该基因的序列特征并制备该酶多克隆抗体,为探析其生理功能奠定基础。【方法】根据甜菜夜蛾Spodoptera exigua的组织蛋白酶L基因开放阅读框(ORF)序列两端直接设计引物克隆草地贪夜蛾组织蛋白酶L基因。利用生物信息学软件分析该基因的序列特征,利用ClustalX2软件进行同源比对和进化分析,利用同源建模预测该酶三维结构。通过原核表达重组蛋白,多次免疫新西兰大白兔制备该酶多克隆抗体。【结果】克隆获得了草地贪夜蛾的组织蛋白酶L基因SfCatL (GenBank登录号: HQ110065),ORF序列长1 035 bp,编码344个氨基酸,预测N-末端含有长度为16个氨基酸残基的信号肽序列,去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为36.8 kD, 等电点为6.69。SfCatL氨基酸序列与其他13个物种的组织蛋白酶L氨基酸序列比较有53.7%~96.8%的一致性,与甜菜夜蛾组织蛋白酶L氨基酸序列一致性最高,达96.8%。同源建模预测表明,SfCatL折叠成紧密而稳定的元宝状结构,含3个对结构有稳定作用的二硫键,亲水性氨基酸主要包被在蛋白的表面。原核表达、纯化SfCatL蛋白制备抗血清,其效价超过1∶40 000,Western blot鉴定结果表明抗血清与草地贪夜蛾Sf9细胞SfCatL蛋白能够特异性结合。【结论】获得了草地贪夜蛾SfCatL完整ORF序列,分析了其特征,经原核表达、纯化获得高纯度的融合蛋白,成功获得多克隆抗体。本研究为进一步研究该基因的功能并开发组织蛋白酶抑制剂类杀虫剂提供理论依据。
PDF全文下载地址:
http://www.insect.org.cn/CN/article/downloadArticleFile.do?attachType=PDF&id=6168
删除或更新信息,请邮件至freekaoyan#163.com(#换成@)
草地贪夜蛾组织蛋白酶L的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
相关话题/序列 组织 基因 结构 信号
中华蜜蜂转录因子AP-1基因的克隆及特性分析
摘要:【目的】克隆获得中华蜜蜂Apisceranacerana转录因子AP-1(transcriptionfactorAP-1)基因AccAP-1序列,分析其在中华蜜蜂不同发育时期和组织中以及不同非生物应激条件下的表达差异,为该基因的功能研究提供参考。【方法】以中华蜜蜂全组织cDNA为模板,利用RT ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03应用3D打印技术辅助识别昆虫脑解剖结构
摘要:【目的】明确烟芽夜蛾Heliothisvirescens雄成虫脑的结构,构建和打印脑的三维模型,并将该技术扩展应用到黑腹果蝇Drosophilamelanogaster、西方蜜蜂Apismellifera和沙漠蝗Schistocercagregaria上,制作这些模式昆虫脑的3D打印模型。【方 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03基于线粒体COI基因的青海省44种蚤类的分子鉴定及系统发育分析
摘要:【目的】本研究应用DNA条形码技术对青海省部分蚤种进行鉴定,旨在弥补蚤类传统形态分类方法的不足。【方法】通过PCR扩增3总科6科22属44种共182头蚤类标本的线粒体COI基因片段(约600bp)并进行测序和比对;用K2P模型计算种内及种间遗传距离;以邻接法(neighbor-joining, ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03黑毛皮蠹线粒体基因组分析及皮蠹科系统发育分析
摘要:【目的】分析黑毛皮蠹Attagenusunicolorjaponicus的线粒体基因组结构及皮蠹科的系统发育。【方法】本研究利用下一代测序方法测定了黑毛皮蠹的近完全线粒体基因组序列,并基于39种昆虫的cox1基因序列,通过最大似然法和贝叶斯法构建了皮蠹科的系统发育树。【结果】黑毛皮蠹线粒体基因 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03荒川库蠓雌雄成虫形态和超微结构
摘要:【目的】为了更加准确地进行蠓科(Ceratopogonidae)昆虫的分类鉴定,获得更全面、细致的荒川库蠓Culicoidesarakawai(Arakawa)雌雄成虫形态和超微结构特征。【方法】利用扫描电子显微镜对荒川库蠓雌雄成虫形态和超微结构特征进行观察研究。【结果】获得荒川库蠓雌雄成虫复 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03沙葱萤叶甲海藻糖酶基因GdTre1的克隆、分子特性和表达分析
摘要:【目的】海藻糖酶(trehalase,Tre)作为昆虫体内海藻糖代谢的关键性酶,在昆虫能量调节和生长发育中具有重要作用。本研究旨在克隆获得沙葱萤叶甲Galerucadaurica海藻糖酶基因,并对其表达模式进行定量分析,以期探究海藻糖酶在沙葱萤叶甲生长发育和成虫夏滞育中的作用。【方法】根据沙葱 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03中华蜜蜂气味受体基因AcOr10的克隆及表达分析
摘要:【目的】中华蜜蜂Apisceranacerana气味受体Or10是感受信息素的重要受体蛋白之一。本研究目的是克隆出该受体基因的序列,并分析该基因在雄蜂不同生理状态下触角和大脑中的表达特征,为该基因的功能研究提供理论依据。【方法】采集中华蜜蜂雄蜂触角,提取其总RNA,采用RT-PCR技术克隆中华 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03松墨天牛Mfe2基因的克隆、原核表达和表达谱分析
摘要:【目的】Mfe2为过氧化物酶体多功能酶类型2(peroxisomalmultifunctionalenzymetype2)基因,在脂肪酸的氧化中起到了极其重要的作用。本研究旨在获得和鉴定松墨天牛Monochamusalternatus的Mfe2基因,原核表达其编码蛋白,并分析其在该 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03家蚕基因组靶向编辑技术研究进展
摘要:人工核酸内切酶(engineeredendonuclease,EEN)系统介导的基因组编辑技术是进行基因组功能研究与生物遗传改良操作的重要工具。家蚕Bombyxmori是最早实现人工驯化和饲养的经济昆虫,同时也是后基因组时代用作功能基因分析的重要鳞翅目模式昆虫。近年来随着锌指核酸酶(zincf ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03烟蚜若蚜及有翅和无翅成蚜转录组及翅型相关基因的表达差异分析
摘要:摘要:【目的】旨在了解烟蚜Myzuspersicae不同翅型(有翅和无翅)的转录组特征,丰富烟蚜转录组数据信息,为探明烟蚜翅型分化的分子机制打下基础。【方法】利用高通量测序技术IlluminaHiSeqTM2000分别检测烟蚜若蚜、无翅成蚜和有翅成蚜转录组表达差异;通过实时荧光定量PCR(qP ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03