摘要： 【目的】明确家蚕Bombyx mori滞育关联基因山梨醇脱氢酶基因BmSDH（BmSDH-1, BmSDH-2a和BmSDH-2b）的转录特性。【方法】用5′RACE技术确定家蚕3个BmSDH基因的转录起始位点。利用PCR技术克隆3个BmSDH基因约1 kb及BmSDH-2a不同长度的启动子区序列，分别构建带有萤火虫荧光素酶报告基因的载体pGL3-BmSDH-P-luc，并与pRL-CMV报告质粒（含海肾荧光素酶报告基因）共转染家蚕BmN细胞，通过双荧光素酶检测系统检测BmSDH基因启动子活性；分别在BmN细胞培养基中添加昆虫保幼激素、蜕皮激素和滞育激素，通过双荧光素酶检测系统检测不同浓度激素处理对BmSDH-2a基因启动子活性的影响。【结果】BmSDH-1的转录起始位点为A（-41），BmSDH-2a的转录起始位点为C（-41），BmSDH-2b的转录起始位点为A（-40）（翻译起始位点为+1）。双荧光素酶检测结果表明，BmSDH-2a启动子活性极显著高于BmSDH-1和BmSDH-2b启动子，BmSDH-2a 355 bp长度片段的启动子活性极显著高于674 bp和1 117 bp长度片段。用不同浓度滞育激素处理BmN细胞后，BmSDH-2a的1 117 bp启动子活性随着滞育激素浓度的升高有上升的趋势，当浓度高于100 ng/mL时启动子活性有所降低但仍保持在较高水平；用保幼激素进行处理后，随着激素浓度的升高启动子活性逐渐降低；蜕皮激素处理后，0.1 ng/mL激素显著增强启动子活性，当激素浓度继续升高启动子活性逐渐降低。【结论】确定了BmSDH基因的转录起始位点。BmSDH-2a启动子活性显著高于BmSDH-1和BmSDH-2b启动子，一定浓度的蜕皮激素能显著提高BmSDH-2a启动子活性。研究结果有助于阐明BmSDH基因在家蚕滞育中的功能。
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家蚕滞育关联山梨醇脱氢酶基因的启动子活性分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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