摘要： 【目的】克隆一种梨小食心虫Grapholita molesta触角中谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase, GST）基因并分析其结构特征，明确其表达特点及该基因编码蛋白的酶学特征，以期为该基因的功能研究提供理论依据。【方法】根据梨小食心虫雌虫触角转录组数据，利用RT-PCR克隆梨小食心虫GST基因；通过实时荧光定量PCR测定该基因在成虫触角、头（去触角）、胸、腹、足和翅中的转录水平；利用原核表达系统和Ni离子亲和层析技术表达和纯化梨小食心虫GST重组蛋白，并对重组蛋白的稳定性和酶促动力学参数进行分析。【结果】获得了梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶基因GmolGST6（GenBank登录号: MF503496）的完整编码序列，开放阅读框为645 bp，编码214个氨基酸，分子量为24.21 kD，理论等电点为5.10；进化树分析和三维结构模拟表明GmolGST6属于Delta亚家族。qPCR测定结果表明，GmolGST6基因在雌雄成虫触角中高丰度表达，且在雄虫触角中的表达量显著高于雌虫。重组蛋白GmolGST6具有催化通用底物CDNB的活性，并且在pH 7.5， 40℃时具有最高的酶活力。重组蛋白GmolGST6的米氏常数Km为0.21±0.06 mmol/L，最大反应速度Vmax为14.02±1.40 μmol/min·mg。【结论】根据GmolGST6的表达特点及其重组酶对模式底物CDNB的催化活性，推测在触角中高丰度表达的GmolGST6具有参与降解外源物质、保护嗅觉系统免受外源性物质毒害的功能。
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梨小食心虫谷胱甘肽S-转移酶GmolGST6的基因克隆、原核表达和酶学特征
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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