摘要： 【目的】通过RNAi技术分析明确对马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata黑色素形成重要的N-β-丙酰多巴胺(NBAD)水解酶基因的功能。【方法】NBAD水解酶基因通过马铃薯甲虫转录组数据分析和RT-PCR克隆获得，分别利用序列比对和系统发育分析确定该基因的完整性和系统发育；通过qPCR检测其在马铃薯甲虫各发育阶段和4龄幼虫不同组织及成虫精巢和卵巢中的表达量；采用喂食幼虫dsRNA的方法，观察该基因在马铃薯甲虫幼虫的生长发育过程中对体色的影响,并测定保幼激素和蜕皮激素对该基因表达的影响。【结果】克隆得到马铃薯甲虫NBAD水解酶基因，命名为Ldtan(GenBank登录号: KY221866)，其编码蛋白的氨基酸序列与鞘翅目赤拟谷盗Tribolium castaneum和山松大小蠹Dendroctonus ponderosae同源蛋白的氨基酸序列的一致性最高，聚为一支。Ldtan在马铃薯甲虫4龄幼虫腹神经索(99.36±0.95)、后肠(17.79±3.11)和表皮(9.21±0.12)中的相对表达量较高；在幼虫期随幼虫生长发育表达量逐渐升高，在成虫期的表达量最高。通过喂食2龄幼虫Ldtan的dsRNA能有效降低靶标基因的表达量，使幼虫体色变深呈一定的棕褐色，并且具有一定的致死效应。通过RNAi技术干涉保幼激素合成和信号途径相关基因，发现Ldtan表达量降低，而干扰蜕皮激素合成和信号途径相关基因，Ldtan表达量增加。【结论】结果提示Ldtan参与了马铃薯甲虫的黑色素合成，并且蜕皮激素和保幼激素可能影响其表达。
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马铃薯甲虫N-β-丙酰多巴胺水解酶基因的克隆及功能分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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