摘要： 【目的】丝氨酸蛋白酶(serine protease, SP)是一类以丝氨酸为活性中心的重要的蛋白水解酶。本研究旨在克隆获得沙葱萤叶甲Galeruca daurica丝氨酸蛋白酶基因，分析其对温度胁迫的响应，以期为进一步揭示沙葱萤叶甲耐温性的调控机制及其他生理功能奠定基础。【方法】根据沙葱萤叶甲2龄幼虫转录组数据，采用RACE技术克隆得到沙葱萤叶甲丝氨酸蛋白酶基因的cDNA全长序列，并进行生物信息学分析；应用qPCR技术检测其在不同温度（-10, -5, 0, 5, 25和35℃）下处理1 h后及25℃下恢复30 min后在沙葱萤叶甲2龄幼虫中的表达量变化。【结果】自沙葱萤叶甲克隆获得一个丝氨酸蛋白酶基因，命名为GdSP（GenBank登录号: MG797556）。该基因全长1 110 bp，开放阅读框969 bp，编码322个氨基酸；蛋白预测分子量35.41 kD，等电点5.61; 编码蛋白具有丝氨酸蛋白酶的典型特征，具有一个跨膜结构，无信号肽。同源序列比对和系统发育分析表明，GdSP与光肩星天牛Anoplophora glabripennis SP的同源性最高，氨基酸序列一致性为30.53%。qPCR测定结果表明，不同温度处理间2龄幼虫中GdSP表达量差异不显著，但对各高低温(-10℃除外)胁迫处理回温后GdSP表达量显著上升。【结论】快速冷驯化对沙葱萤叶甲丝氨酸蛋白酶基因表达无显著影响，而回温可诱导其上调表达。
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沙葱萤叶甲丝氨酸蛋白酶基因GdSP的克隆及对温度胁迫的响应
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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