赵绪生^,1, 齐永志^,1,2, 甄文超^,2,3,41河北农业大学植物保护学院,河北保定 071001
²省部共建华北作物改良与调控国家重点实验室,河北保定 071001
³河北农业大学农学院,河北保定 071001
⁴河北省作物生长调控重点实验室,河北保定 071001

Composition and Distribution Characteristics of Pathogens Causing Wheat Sharp Eyespot in Wheat and Maize Double Cropping System

ZHAO XuSheng^,1, QI YongZhi^,1,2, ZHEN WenChao^,2,3,41College of Plant Protection, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, Hebei
²State Key Laboratory of North China Crop Improvement and Regulation, Baoding 071001, Hebei
³College of Agronomy, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, Hebei
⁴Key Laboratory of Regulation and Control of Crop Growth of Hebei, Baoding 071001, Hebei

通讯作者: 甄文超,Tel：0312-7528996;E-mail：wenchao@hebau.edu.cn

赵绪生和齐永志为同等贡献作者
责任编辑: 岳梅
收稿日期:2020-04-20接受日期:2020-05-18网络出版日期:2020-08-16

基金资助:

国家重点研发计划.2017YFD0300906 国家重点研发计划.2018YFD0300502 河北省现代农业产业技术体系.HBCT2018010205 河北省教育厅项目.ZD2016162

Received:2020-04-20Accepted:2020-05-18Online:2020-08-16
作者简介 About authors
赵绪生,Tel：0312-7521823;E-mail：zhaoxusheng2000@yeah.net

齐永志,E-mail：qiyongzhi1981@163.com




摘要
【目的】小麦纹枯病在河北、山东、河南冬小麦、夏玉米一年两熟秸秆还田种植区发生严重。本研究通过广泛调查,明确河北、山东、河南麦区小麦纹枯病发生程度、病原菌群体结构与优势病原菌的农田分布特征,为小麦纹枯病的防治提供依据。【方法】采用随机5点取样法调查河北、山东、河南小麦、玉米两熟区小麦纹枯病的发生程度,通过细胞核染色、菌丝融合反应和rDNA-ITS序列分析鉴定病原菌群体特征,利用盆栽试验测定120株禾谷丝核菌（Rhizoctonia cerealis）的致病力,采用实时荧光定量PCR技术测定禾谷丝核菌在小麦、玉米两熟秸秆还田种植体系中的分布特征。【结果】河北、山东、河南麦区纹枯病发生程度由重到轻依次为河南麦区、山东麦区和河北麦区。采自3省11个不同生态类型区72个采样点的小麦纹枯病病原菌包括421株双核禾谷丝核菌、24株多核立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）,可划分为AG-D、AG-B(0)、AG-2和AG-5 4类融合群,分别占供试菌株总数的91.91%、2.70%、3.82%和1.57%。根据石新828、济麦22和周麦22病情指数,120个供试禾谷丝核菌菌株可分为VT1、VT2、VT3、VT4和VT5 5个致病类型,各类型病情指数依次为44.0、39.4、34.2、29.6和27.2。其中,采自河南麦区菌株整体致病力最强,河北麦区最弱。在小麦全生育期,禾谷丝核菌含量在地上部和根系中均呈先升后降趋势。三叶期地上部菌量最低,起身期含量最高,为3 774.60 ng DNA/g鲜组织;而根系中菌量在拔节期达到最高峰。三叶期至分蘖期菌量增速最快,小麦地上部和根系中菌量增幅分别高达28.17倍和17.26倍。禾谷丝核菌菌量在小麦根际土壤中和玉米地上部均呈逐渐上升趋势。在玉米根际土壤中禾谷丝核菌含量呈先降后升趋势,抽雄期最低,为170.6 ng DNA/g干土。【结论】河南麦区纹枯病发生程度最重,山东麦区次之,河北麦区最轻。强致病力双核禾谷丝核菌为3省优势病原菌,菌量在小麦三叶期至分蘖期增速最快,在小麦秸秆中相对含量最高、玉米秸秆中最低。生产中可有针对性的在还田秸秆粉碎过程中与冬前小麦幼苗期加强纹枯病的监测与防控。
关键词： 小麦纹枯病;禾谷丝核菌;群体组成;实时荧光定量PCR;分布特征

Abstract
【Objective】Wheat sharp eyespot (WSE) occurs seriously in wheat and maize double cropping system with straw returning to field in Hebei, Shandong and Henan provinces. The objective of this study is to determine the disease occurrence, pathogen population structure and the farmland distribution characteristics of dominant pathogen by extensive investigation, and to provide a basis for the WSE control.【Method】The random five-point sampling method was used to investigate the occurrence degree of WSE in wheat and maize double cropping system with straw returning to field in Hebei, Shandong and Henan provinces. The population characteristics of Rhizoctonia isolates were identified by nuclear staining, hyphal fusion reaction and rDNA sequence analysis. The pathogenicity of 120 R. cerealis strains was determined by pot experiment, and the distribution characteristics of R. cerealis in the field of wheat and maize double cropping system were analyzed by real-time fluorescent quantitative PCR.【Result】The occurrence degree of WSE from serious to light was in the order of Henan, Shandong and Hebei. There were 421 binucleate R. cerealis strains and 24 multinucleate R. sonalis strains collected from 72 collection sites of 11 different ecological regions in Hebei, Shandong and Henan provinces, which could be divided into four types: AG-D, AG-B (0), AG-2 and AG-5 fusion groups, accounting for 91.91%, 2.70%, 3.82% and 1.57% of the total number of tested strains, respectively. According to the disease index of Shixin 828, Jimai 22 and Zhoumai 22, the 120 tested strains could be divided into five pathogenic types: VT1, VT2, VT3, VT4 and VT5. The disease indexes of each type were 44.0, 39.4, 34.2, 29.6 and 27.2 in turn, respectively. Among them, most of the strains from the wheat region in Henan Province had the strongest pathogenicity, and those collected from the wheat region in Hebei Province was the weakest. During the whole growth stage of wheat, the content of R. cerealis increased first and then decreased in overground and root systems. The amount of R. cerealis in the shoot was the lowest at the three-leaf stage, and the highest at the rising stage, with the value of 3 774.60 ng DNA/g fresh tissue. The amount of R. cerealis in the roots reached the peak at the jointing stage. The growth rate of R. cerealis amount was the fastest from the three-leaf stage to the tillering stage. The increase of R. cerealis content in the aboveground parts and roots of wheat was up to 28.17 and 17.26 times, respectively. The amount of R. cerealis increased gradually in rhizosphere soil of wheat and in the shoots of maize. In the rhizosphere soil of maize, the content decreased first and then increased, and the lowest at the tasseling stage was 170.6 ng DNA/g dry soil.【Conclusion】The most serious degree of WSE occurs in wheat area in Henan Province, followed by Shandong and Hebei. The strong pathogenicity of dinucleus R. cerealis is the dominant pathogen in the three wheat areas, the amount of which increases the fastest from the three-leaf stage to the tillering stage, and the relative content in wheat straw is the highest and that in maize straw is the lowest. In the process of crushing returning-straw and at wheat seedling stage before the winter, the monitoring and control of WSE should be strengthened.
Keywords：wheat sharp eyespot;Rhizoctonia cerealis;population composition;real-time fluorescent quantitative PCR;distribution characteristics


PDF (892KB)元数据多维度评价相关文章导出EndNote|Ris|Bibtex收藏本文
本文引用格式
赵绪生, 齐永志, 甄文超. 小麦、玉米两熟区小麦纹枯病菌群体组成及其农田分布特征[J]. 中国农业科学, 2020, 53(16): 3269-3279 doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2020.16.006
ZHAO XuSheng, QI YongZhi, ZHEN WenChao. Composition and Distribution Characteristics of Pathogens Causing Wheat Sharp Eyespot in Wheat and Maize Double Cropping System[J]. Scientia Acricultura Sinica, 2020, 53(16): 3269-3279 doi:10.3864/j.issn.0578-1752.2020.16.006

0 引言

【研究意义】由禾谷丝核菌（Rhizoctonia cerealis）或立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）引起的小麦纹枯病（wheat sharp eyespot,WSE）是一种世界性土传病害,20世纪80年代初在北美洲和欧洲小麦产区严重发生^[1]。进入21世纪以来,随着气候变暖、秸秆还田以及氮肥用量提高,加之小麦纹枯病抗性品种匮乏,造成该病害已成为中国黄淮海小麦、玉米两熟区的小麦主要病害,严重影响了小麦的优质高产^[2]。据统计,近十年来,小麦纹枯病在河北、河南和山东等省麦区每年发生总面积高达420万公顷以上,一般发病地块减产5%—30%,严重地块减产超过50%^[3,4,5]。自2012年,小麦纹枯病成为河北省仅次于白粉病的第二大病害^[4]。调查河北、山东、河南麦区纹枯病发生程度,探析3省不同生态类型区小麦纹枯病菌的群体差异及优势病原菌在小麦-玉米秸秆还田种植体系中的分布特征,对该病害的科学防控具有重要意义。【前人研究进展】已有研究表明,中国小麦纹枯病菌的优势菌群多为禾谷丝核菌,其中,以CAG1（AG-D）、CAG-3、CAG-6、AGC1菌丝融合群为主^{[6,7,8,9,10,11]}。李海燕等^[3]研究发现,2014年采自河北省3个不同生态类型麦区的196株纹枯病菌包括AG-D、AG-B (0)、AG-I、AG-5和AG-4 5种融合群,且以强致病力AG-D融合群为主;汪敏等^[12]研究表明,2011年采自河南周口等13个地区的157株纹枯病菌包括156株双核丝核菌AG-D融合群和1株双核丝核菌为AG-B (0)融合群;于金凤等^[13]研究发现,2002年采自山东麦区的55株纹枯病菌中有54株为双核丝核菌AG-D融合群。汪敏等^[12]根据标准菌株致病力强弱,将采自河南省13个麦区的119株菌株划分为强、中等和弱致病力3种类型;李海燕等^[3]根据196株分离所得菌株及6株标准致病力菌株接种3个小麦品种后的平均病情指数,可将202株菌株划分为极强、强、中等和弱4种致病力类型;杜文珍^[14]从江苏等5省麦区分离鉴定的237株双核丝核菌株中,强致病力和弱致病力菌株数仅分别为46株和30株;陈莹等^[15]明确了中国北纬33°地区小麦纹枯病菌约96%菌株均属于强致病力AG-D融合群,但不同地区菌株间的致病力均无显著差异。【本研究切入点】受长期少免耕和秸秆还田、小麦种子异地调运以及农机跨区作业等影响,当前河北、山东、河南麦区小麦纹枯病的病原菌群体组成、致病力差异需要系统调查;同时,小麦纹枯病菌强致病力优势菌群在中国北方小麦、玉米两熟区农田中的分布特征也未见报道。【拟解决的关键问题】调查河北、山东、河南3省小麦、玉米两熟区小麦纹枯病的发生程度,通过细胞核染色、菌丝融合反应和rDNA-ITS序列分析鉴定病原菌群体特征,分析优势病原菌禾谷丝核菌的菌株间致病力差异及其在小麦、玉米两熟秸秆还田种植体系中的分布特征。

1 材料与方法

1.1 材料

小麦品种：石新828（冀审麦2005004）、济麦22（国审麦2006018）、周麦22（国审麦2007007）,均为河北、山东、河南麦区种植的小麦主推品种,对小麦纹枯病抗性表现分别为高感、中感和感病。

小麦纹枯病菌菌丝融合群标准菌株：AG-D（CAG1）、AG-E、AG-B (0)和AG-Ba为禾谷丝核菌;AG-5和AG-2为立枯丝核菌,由河北省农林科学院植物保护研究所孔令晓研究员提供。

禾谷丝核菌致病力标准菌株：R0301、C16、R8433为强致病力菌株,R8401为中致病力菌株,R8406、D32为弱致病力菌株,由江苏省农业科学院陈怀谷研究员提供。

1.2 方法

1.2.1 小麦纹枯病样品采集与病害调查 2017—2018年,在小麦拔节至孕穗期,选取河北（黑龙港平原、山前平原和冀东平原）^[3]、山东（山东半岛、中部、西北部和西南部）^[16]、河南（南部、北部、中南部和中北部）^[17]11个不同生态类型麦区72个采样点（秸秆还田均15年以上）为检测点,每检测点随机选5块样田（约90 m²/块）,采用5点取样法,每点从1.1 m双行中选30个茎,按照小麦纹枯病成株期分级标准调查小麦纹枯病发病情况,计算病情指数;同时,采集小麦纹枯病组织样品,低温保存带回实验室。小麦纹枯病成株期分级标准：0级：无症状;1级：叶鞘有病斑,但未侵入茎秆;3级：病菌侵入小麦茎秆,病斑宽度环绕茎秆长度未长于茎秆周长1/2;5级：病斑环绕小麦茎秆长度达周长1/2—3/4;7级：病斑环绕小麦茎秆周长3/4以上;9级：形成小麦枯孕穗或白穗^[9]。

1.2.2 小麦纹枯病菌分离与鉴定 小麦纹枯病病原菌分离纯化与初步鉴定：无菌条件下剪取样品病健交界处组织块（2.0 mm×2.0 mm）,表面消毒后转移至含链霉素和利福平的PDA培养基,25℃黑暗培养5 d后单菌丝顶端分离、纯化、保存,根据病菌形态学特征进行初步鉴定。

供试菌株与融合群标准菌株的融合情况^[18]：采用对峙培养法判定,将供试菌株与标准菌株同时打取菌饼后,接种于载玻片上,25℃黑暗保湿对峙培养（相距2 cm）。每菌株3次重复,每皿1个菌饼。当菌丝生长至相互接触时,用番红O-KOH染色液染色5 min后,盖上盖玻片在显微镜下观察菌丝细胞的融合情况和细胞核数目。

小麦纹枯病病原菌分子鉴定^[19]：采用CTAB法提取菌株基因组DNA,采用真菌rDNA-ITS PCR扩增通用引物ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCG-3′）和ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）扩增待测菌株DNA序列片段。PCR扩增产物测序后,在NCBI中进行BLAST序列比对。

1.2.3 小麦纹枯病菌致病力测定 接菌体的制备：先于PDA培养基上活化不同生态类型区选出的120个供试禾谷丝核菌菌株（随机选40株/区）和6个标准致病力菌株,然后将10个直径5 mm纹枯病菌菌饼接种至含有80 g无菌麦粒的200 mL三角瓶中,25℃黑暗培养。培养期间每2 d摇匀1次,每供试菌株接种3瓶。40 d后得麦粒接菌体,直接粉碎后过20目筛,备用。

菌株致病力测定：小麦种子经1% HgCl₂表面消毒5 min后^[20],用无菌水冲洗3次,置于铺有3层湿润纱布的培养皿中,28℃黑暗保湿催芽,露白后播入装有0.5 kg灭菌土（121℃,间歇湿热灭菌3次,每次45 min,间隔时间3.5 h）直径为12 cm的营养钵中,每钵20粒;种子周围匀撒0.8 g接种体,表面覆盖3 cm厚灭菌土。以未接菌粉碎麦粒为对照。每供试菌株接种3个小麦品种,每品种3次重复,每重复6钵。25℃、14 h﹕10 h（光﹕暗）条件下培养,30 d后,参考汪敏等^[12]的小麦幼苗分级标准调查发病情况：0 级：无症状;1级：外层叶鞘变褐或有明显的纹枯病斑,但病斑直径小于叶鞘周长的1/2;3级：外层叶鞘有明显的纹枯病斑,病斑直径大于叶鞘周长的1/2,但内层叶鞘无症状;5级：内层叶鞘变褐或有明显的纹枯病斑,但病斑直径小于叶鞘周长的1/2;7 级：内层叶鞘有明显的纹枯病斑,病斑直径大于叶鞘周长的1/2,但植株不死苗：9级：植株死苗。

1.2.4 小麦、玉米两熟秸秆还田种植体系中禾谷丝核菌的检测 试验田基本情况：2017年10月至2018年10月,选择河北省保定市望都县河北农业大学实验基地（小麦品种为良星99）、山东省德州市乐陵市辛庄村（小麦品种为济麦22）、河南省洛阳市偃师市庞村（小麦品种为周麦22）作为检测点,各点均采用小麦、玉米两熟种植制度,已连续17年秸秆全量还田,小麦纹枯病历年发病率≥50%。每个试验基地均为沙壤土,肥力中等。0—20 cm耕层土壤pH 7.0。按常规生产方法进行栽培管理。

小麦、玉米生长季取样：（1）植株组织。采用随机5点取样法采样,在小麦三叶期、分蘖期、越冬期、返青期、起身期、拔节期、抽穗期,每点各取10株;在玉米三叶期、拔节期、大喇叭口期、抽雄期、乳熟期,每点各取3株;小麦、玉米整株样品（地上部和0—20 cm根系）置于低温冰盒中带回实验室,并于-20℃保存;（2）根际土壤。分别在小麦、玉米关键生育期（同1）采集根际土壤样品,采用大田挖掘法5点取样^[21],每点选择连续10株小麦、3株玉米,挖取0—40 cm土层的根系,轻轻抖去根系上脱落的土壤,保留附着于根的根际土壤,并及时放入无菌袋中混匀后,置于低温冰盒中带回实验室,于-20℃保存,用于禾谷丝核菌的定量测定。

植株组织和土壤样品中禾谷丝核菌实时荧光定量PCR检测：植物组织整株样品经粉碎后,分别用土壤和植物组织DNA提取试剂盒（型号分别为DP305和DP336,天根生化科技有限公司）提取禾谷丝核菌DNA,每份（1.0 g）土壤、组织样品分别提取份3份,提取方法按说明要求并稍作调整。禾谷丝核菌特异性引物为RtubF4（5′-CCTAAATGAGTCTGGAGTAAGT C-3′）和RtubR4（5′-GCTAGTGCGGTCAATGTATA G-3′） ^[22],由上海生工生物工程有限公司合成。荧光定量PCR体系（20 μL）：SYBR Premix Ex Tap^TM（2×）10 μL,上游引物（10 μmol·L^-1）0.4 μL,下游引物（10 μmol·L^-1）0.4 μL,ROX reference dye（50×）0.4 μL,DNA模板2.0 μL,ddH₂O 6.8 μL。荧光定量检测使用美国应用公司ABI StepOne荧光定量PCR仪,扩增程序^[23]：95℃预变性30 s,95℃变性5 s,60℃退火30 s,40个循环,熔解曲线分析：95℃ 0 s,60℃ 1 min,然后以0.3℃·s^-1升至95℃。以禾谷丝核菌BD-14的DNA为标准品进行梯度稀释（1.0×10^-6—1.0×10² ng·μL^-1）,经荧光定量检测后,以DNA起始浓度的对数值为x轴,以Ct值为y轴构建标准曲线。以梯度稀释的土壤和组织样品的DNA为模板,进行扩增检测,根据标准曲线,得到待测样品Ct值,即可获得对应DNA样品的浓度值。

1.2.5 数据统计与分析 根据所测定数据,对比分析11个不同生态类型麦区小麦纹枯病发生程度差异、纹枯病菌致病力差异及优势病原菌禾谷丝核菌在小麦-玉米秸秆还田种植体系的农田分布特征。用Excel 2010和DPS 7.0软件对试验数据进行统计分析,采用Duncan’s新复极差法比较菌株致病力差异,采用非加权配对算术平均法对病菌致病力进行聚类分析^[20]。

2 结果

2.1 河北、山东和河南不同生态类型区小麦纹枯病发病程度

由表1可知,2017—2018年3省11个生态类型区小麦纹枯病均有发生。省际间比较,发病程度由重到轻依次为河南、山东和河北。河南4个生态类型区小麦纹枯病发病率均在38.7%以上,各区差异不显著,但北部麦区病情指数显著低于南部、中南部;山东西南部麦区纹枯病发病率为38.1%,显著高于山东半岛、西北部,但该区病情指数与山东半岛麦区无显著差异;河北省黑龙港平原麦区纹枯病发病最重,发病率和病情指数分别为32.7%和10.8,均显著高于山前平原和冀东平原。

Table 1
表1
表1不同生态类型区小麦纹枯病的发生程度
Table 1Incidences of wheat sharp eyespot in different ecological regions

省份 Province	生态区 Ecological region	发病率 Incidence rate (%)	发病率平均值 Mean of incidence rate (%)	病情指数 Disease index	病情指数平均值 Mean of disease index
河北 Hebei	黑龙港平原 Heilonggang Plain	32.7±2.6bc	21.9±1.8c	10.8±0.9c	7.8±0.6c
	山前平原 Piedmont Plain	22.5±1.8d		8.5±0.7d
	冀东平原 Eastern Hebei Plain	10.4±0.9e		4.1±0.3e
山东 Shandong	山东半岛 Shandong Peninsula	30.9±2.5c	34.7±2.8b	11.8±0.6c	11.6±0.6b
	中部 Middle Shandong	35.7±2.9bc		13.5±0.9ab
	西北部 Northwest Shandong	30.4±2.6c		9.7±0.8d
	西南部 Southwest Shandong	38.1±3.1ab		11.7±0.7c
河南 Henan	南部 Southern Henan	43.5±3.6a	42.0±3.3a	15.8±1.3a	13.4±1.1a
	中南部 Mid-south Henan	42.7 ± 2.5a		14.4±1.2a
	中北部 Mid-north Henan	44.6±3.7a		13.7±1.1ab
	北部 Northern Henan	38.7±3.0ab		12.1±0.9bc

表中数据为2017—2018年各监测点的平均数±标准差;同列数据后不同小写字母表示经Duncan氏新复极差法检验在P<0.05水平下差异显著
Data are mean±SD in monitoring points from 2017 to 2018. Different lowercase letters in the same column indicate significant difference at P<0.05 level by Duncan’s new multiple range test

新窗口打开|下载CSV

2.2 不同生态类型区小麦纹枯病菌菌丝融合群种群分布

从11个不同生态类型麦区72个采样点采集的小麦纹枯病株中,分离、纯化出445个菌株,其中河北、山东、河南麦区分别为179、149和117株。通过番红O-KOH染色、菌丝融合和分子鉴定（相似性比对均在98%—100%）,表明这些分离物分别属于具有双核的禾谷丝核菌（421个）和多核的立枯丝核菌（24个）,分别占分离总数的94.61%和5.39%,菌株菌丝融合群分属AG-D、AG-B (0)、AG-2和AG-5 4个融合群（表2、图1）,各融合菌群菌株数量分别为409、12、17和7株,占比91.91%、2.70%、3.82%和1.57%。

Table 2
表2
表2不同生态类型区445株小麦纹枯病菌分布及其细胞核数量
Table 2Nucleolus number and distribution of 445 Rhizoctonia strains on wheat in different ecological regions

省份 Province	采样点 Collection site	数量Number		采样点 Collection site	数量Number		采样点 Collection site	数量Number
		B	M		B	M		B	M
河北 Hebei	临漳杜村 Du V, Linzhang C	10	2	广平胜营镇 Shengying T, Guangping C	10	2	望都高岭乡 Gaoling T, Wangdu C	5	0
	馆陶房寨镇 Fangzhai T, Guantao C	12	0	威县章台镇 Zhangtai T, Wei C	8	1	磁县白土镇 Baitu T, Ci C	8	1
	青县金牛镇 Jinniu T, Qing C	8	1	大名孙村镇 Suncun T, Daming C	7	0	临城东镇乡 Dongzhen T, Lincheng C	11	0
	饶阳五公镇 Wugong T, Raoyang C	9	0	成安商城镇 Shangcheng T, Cheng’an C	11	0	安平马店镇 Madian T, Anping C	6	2
	宁晋凤凰镇 Fenghuang T, Ningjin C	4	1	定州杨家庄乡 Yangjiazhuang T, Dingzhou C	6	1	赵县东杨村 Dongyang V, Zhao C	6	1
	隆尧东良乡 Dongliang T, Longyao C	8	0	藁城长安镇 Chang’an T, Gaocheng C	6	0	辛集前营乡 Qianying T, Xinji C	5	0
	清苑李庄乡 Lizhuang T, Qingyuan C	6	0	博野小王乡 Xiaowang T, Boye C	7	1	安新寨里乡 Zhaili T, Anxin C	4	0
	玉田虹桥镇 Hongqiao T, Yutian C	8	0	丰南孙庄乡 Sunzhuang T, Fengnan C	5	0	滦南程庄镇 Chengzhuang T, Luannan C	5	0
	乐亭王滩镇 Wangtan T, Laoting C	4	0
山东 Shandong	德州辛庄乡 Xinzhuang T, Dezhou C	12	0	聊城赵庄乡 Zhaozhuang T, Liaocheng C	11	0	烟台观水镇 Guanshui T, Yantai C	9	0
	淄博场口村 Changkou V, Zibo C	8	1	泰安大津口乡 Dajinkou T, Taian C	8	2	蓬莱刘家沟镇 Liujiagou T, Penglai C	7	0
	诸城李子园村 Liziyuan V, Zhucheng C	5	0	商河沙河镇 Shahe T, Shanghe C	5	0	费县新埠村 Xinbu V, Fei C	4	0
	肥城潮泉镇 Chaoquan T, Feicheng C	9	0	蒙阴联城镇 Liancheng T, Mengyin C	4	1	莱芜和庄镇 Hezhuang T, Laiwu C	6	0
	高青青城镇 Qingcheng T, Gaoqing C	5	0	平阴安城镇 Ancheng T, Pingyin C	9	0	沾化下河乡 Xiahe T, Zhanhua C	5	0
	阳信河流镇 Heliu T, Yangxin C	5	0	陵县陵城镇 Lingcheng T, Ling C	4	0	利津明集乡 Mingji T, Lijin C	7	0
	单县莱河镇 Laihe T, Shan C	4	0	菏泽吴楼乡 Wulou T, Heze C	4	0	临沭朱村 Zhu V, Linshu C	3	0
	临沂朱家庄 Zhujiazhuang V, Linyi C	4	0	平邑铜石镇 Tongshi T, Pingyi C	3	0	济宁陈庄村 Chenzhuang V, Jining C	8	0
河南 Henan	新乡小王庄 Xiaowang V, Xinxiang C	5	1	孟县化工镇 Huagong T, Meng C	6	0	范县辛庄乡 Xinzhuang T, Fan C	5	0
	濮阳八公桥镇 Bagongqiao T, Puyang C	4	0	新乡八里畈镇 Balifan T, Xinxiang C	6	0	新乡七里营镇 Qiliying T, Xinxiang C	6	1
	原阳师寨镇 Shizhai T, Yuanyang C	5	0	温县农场 Farm of Wen County	4	0	封丘司庄乡 Sizhuang T, Fengqiu C	3	0
	民权王桥镇 Wangqiao T, Minquan C	8	0	洛阳庞村镇 Pangcun T, Luoyang C	7	1	巩义米河镇 Mihe T, Gongyi C	4	1
	鲁山马楼乡 Malou T, Lushan C	4	0	周口城关乡 Chengguan T, Zhoukou C	4	1	商水许庙村 Xumiao V, Shangshui C	8	0
	西平环城乡 Huancheng T, Xiping C	6	1
	正阳王庄乡 Wangzhuang T, Zhengyang C	4	0	光山七里镇 Qili T, Guangshan C	5	0	固始汪棚镇 Wangpeng T, Gushi C	6	0
	信阳郝堂村 Haotang V, Xinyang C	3	1	固始泉河铺乡 Quanhepu T, Gushi C	6	0	南召小店乡 Xiaodian T, Nanzhao C	3	0
	南阳马山口镇 Mashankou T, Nanyang C	5	0

M和B分别代表多核立枯丝核菌和双核禾谷丝核菌;C、T和V分别代表市（县）、乡（镇）和村
M and B stand for multinucleate R. solani and binucleate R. cerealis, respectively; C, T and V stand for City (County), Town and Village, respectively

新窗口打开|下载CSV

图1

新窗口打开|下载原图ZIP|生成PPT
图1小麦纹枯病菌菌核数量及菌丝融合反应类型

A、B、C、D分别代表多核、双核、完全融合和完全不融合（400×）
Fig. 1Number of nucleolus and types of hyphal anastomosis reaction of Rhizoctonia strains on wheat

A, B, C and D stand for multinucleate, binucleate, anastomosis and no-anastomosis (400×)

2.3 不同生态类型区禾谷丝核菌致病力差异

对120个禾谷丝核菌菌株在3个小麦品种上进行了致病力测定,结果表明采自河北麦区的禾谷丝核菌对石新828和济麦22的致病力无显著差异,但显著强于在周麦22上的致病力;接种采自山东麦区的禾谷丝核菌后,石新828的病情指数显著高于另外2个供试品种;采自河南麦区的菌株对3个小麦品种致病力由强到弱依次是石新828、济麦22和周麦22（表3）。综合对比,采自河南的禾谷丝核菌致病力显著强于山东和河北麦区,河北麦区菌株致病力最弱。

Table 3
表3
表3不同生态类型区120株禾谷丝核菌对3个小麦品种的致病力
Table 3Pathogenicity of 120 R. cerealis strains collected from the different ecological regions on three wheat cultivars

省份 Province	病情指数Disease index			平均值±标准差 Mean±SD
	石新828 Shixin 828	济麦22 Jimai 22	周麦22 Zhoumai 22
河北Hebei	40.2±3.2a	36.3±3.2a	30.1±2.0b	35.6±2.9c
山东Shandong	46.4±2.2a	40.3±3.1b	36.0±2.4b	40.9±2.6b
河南Henan	52.7±2.0a	45.7±2.6b	40.2±2.0c	46.2±2.3a

表中数据均为3组重复的平均值;同期测定的同行病情指数或同列平均值数据后不同字母表示在P=0.05水平上显著差异
Values in table are the mean of each group with three replicates; The different letters in the same row following the value of disease index or in the same column following the means indicate significant difference among treatments at P=0.05 level

新窗口打开|下载CSV

2.4 不同生态类型区禾谷丝核菌致病力区域特征

对120个禾谷丝核菌菌株和6株致病力标准菌株在石新828、济麦22和周麦22 3个小麦品种上的致病力进行了聚类分析,结果表明（图2）,河北、山东、河南麦区禾谷丝核菌致病力由强到弱依次可划分为VT1、VT2、VT3、VT4和VT5 5个致病力类型（d=2.37）,平均病情指数分别为44.0、39.4、34.2、29.6和27.2;各类型中供试病原菌菌株数分别有7、50、41、18和4株。

图2

新窗口打开|下载原图ZIP|生成PPT
图2随机选取不同生态类型区55株禾谷丝核菌对石新828、济麦22和周麦22致病力聚类分析

图中55株禾谷丝核菌来自河北、山东和河南11个生态类型区,每区随机选取5株
Fig. 2Clustering analysis of the pathogenicity of 55 R. cerealis strains collected from 11 ecological regions to Shixin 828, Jimai 22 and Zhoumai 22

55 R. cerealis strains in the figure were from 11 ecological regions in Hebei, Shandong and Henan, with 5 strains randomly selected from each region


最强致病力VT1类型中仅有山东西南部3个菌株和河南南部4个菌株;VT2类型中包括河南28个（南部、中南部和中北部分别8、11、9个）、山东12个（中部、西南部各6个）和河北10个（黑龙港平原、山前平原分别8、2个）;VT3类型中包括河南12个（北部、中北部分别为9、3个）,山东10个（中部、西北部各5株）,河北19个（黑龙港平原、山前平原、冀东平原分别3、10、6个）;VT4类型中包括河南2个（北部）、山东12个（西北部、山东半岛分别10、2个）、河北4株（冀东平原）;VT5类型中仅包括山东4个（西北部）。

2.5 小麦、玉米两熟秸秆还田种植体系中禾谷丝核菌的分布特征

河北、山东和河南小麦、玉米两熟秸秆还田种植体系中,小麦季禾谷丝核菌在地上部组织、根系和根际土壤中的分布差异较大（图3-A）。随着生育进程,小麦地上部组织和根系中的禾谷丝核菌DNA含量均呈先升高、后降低的趋势。地上部植物组织中病原菌菌量在起身期含量最高,达3 774.6 ng DNA/g鲜组织;与三叶期相比,分蘖期菌量增长幅度最高,为28.17倍,其次是起身期。根系中的含菌量在拔节期最高,为193.1 ng DNA/g鲜组织;与三叶期相比,其分蘖期含菌量增长幅度也最高,达17.26倍。而3省根际土壤中的平均菌量呈逐渐升高的趋势,在抽穗期最高达309.0 ng DNA/g干土。

图3

新窗口打开|下载原图ZIP|生成PPT
图3小麦、玉米两熟区小麦季（A）和玉米季（B）禾谷丝核菌农田分布特征

地上部和根系禾谷丝核菌菌量为组织鲜重,土壤为干重;小麦生育时期THS、TIS、OS、RES、RIS、JS和HS分别代表三叶、分蘖、越冬、返青、起身、拔节和抽穗期;玉米生育时期TLS、JS、TRS、TAS和MS分别代表三叶、拔节、大喇叭口、抽雄和乳熟期
Fig. 3Distribution characteristics of R. cerealis in wheat (A) and maize (B) double cropping system

Content of R. cerealis was in fresh weight for the aboveground and root tissue, and was dry weight for soil, respectively. THS, TIS, OS, RES, RIS, JS and HS in growth stage of wheat stand for three-leaf stage, tillering stage, overwintering stage, regreening stage, rising stage, jointing stage and heading stage, respectively. TLS, JS, TRS, TAS and MS in growth stage of maize stand for three-leaf stage, jointing stage, trumpet stage, tasseling stage and milking stage, respectively


图3-B为玉米季禾谷丝核菌在地上部组织、根系和根际土壤中的分布情况。随着生育进程,玉米地上部组织中禾谷丝核菌DNA含量逐渐升高,河北、山东乳熟期达到最高,分别为1 245.4、2 047.6 ng DNA/g 鲜组织,河南在抽雄期达最高,为1 846.3 ng DNA/g鲜组织;与三叶期相比,拔节期和大喇叭口期菌量增长倍率均在6.0倍以上。根系中的菌量在玉米季变化幅度较小,在10.5—73.7 ng DNA/g鲜组织。根际土壤中的菌量基本呈现降低趋势,抽雄期最低为170.6 ng DNA/g干土,乳熟期略有增长。

3 讨论

从河北、山东和河南小麦、玉米两熟秸秆还田的11个不同生态类型区分离获得的445株小麦纹枯病菌中,强致病力AG-D（CAG1）融合群占91.91%。此结果与已有报道基本一致,如2011年,汪敏等^[12]发现河南麦区纹枯病菌AG-D融合群占比高达99.36%;李海燕等^[3]研究证明,双核丝核菌占河北省小麦纹枯病菌群体的89.8%,AG-D和AG-B (0)各占88.3%和1.5%,另外,还鉴定出部分AG-I、AG-4融合群;而李永娟等^[24]从河北麦区分离的小麦纹枯病病菌仅包括双核禾谷丝核菌AG-D融合群;于金凤等^[13]分离的55株山东小麦纹枯病菌中AG-D融合群占比高达98.2%。本研究中未检测到已报道过的部分多核丝核菌（AG-4融合群）,究其原因可能是样本采集样点或样品数量不同所致;亦有可能是病菌在适应小麦、玉米长期秸秆还田耕作条件过程中,病菌群体构成发生了微小变化。经SPSS统计软件K-S检验发现,随机选定河北、山东和河南不同生态类型麦区120株禾谷丝核菌的致病力强弱参数（3个小麦品种平均病情指数）的均值、标准差、Z值分别为36.3、3.97、0.623,P值（sig 2-tailed）=0.832>0.05,数据呈正态分布,基本可代表河北、山东、河南麦区禾谷丝核菌的整体特征。石新828、济麦22和周麦22对纹枯病的抗性分别表现为高感、中感和感病。但接种河北麦区禾谷丝核菌后,石新828与济麦22病情指数差异不明显;接种山东麦区禾谷丝核菌后,济麦22和周麦22病情指数差异也不明显。上述结果可能是因不同小麦品种纹枯病的室内抗性与田间抗性表现略有差异所致。

在不同致病力类型群体中,较强致病力VT1、VT2类型中河南、山东和河北麦区分别有32、15和10株,中间致病力VT3、VT4类型中河南、山东和河北麦区分别有14、22和23株,而弱致病力类型中仅包括山东地区4株。由菌株群体致病力聚类分析发现,河南麦区禾谷丝核菌群体致病力明显强于山东麦区和河北麦区,强致病力菌株数量也较多。河南麦区该类强致病力菌株数量多以及小麦纹枯病抗性品种的匮乏,可能是该区纹枯病发生较重的主要原因。接种山东半岛、山东西北部麦区菌株后3个小麦品种平均病情指数均显著低于接种西南部麦区菌株病情指数;采自河北麦区菌株平均致病力由强到弱为黑龙港麦区>山前平原>冀东平原麦区。因此,导致山东西南部麦区纹枯病发生程度明显重于山东半岛、西北部麦区,河北黑龙港麦区发生程度明显重于山前平原、冀东平原麦区的主要原因可能是各区菌株致病力差异所致。此外,河南、山东和河北各生态类型区禾谷丝核菌或立枯丝核菌菌株之间的遗传多样性也需要进一步研究。

作物病害的发生程度与病原菌致病力强弱、环境中的菌量及增殖速度紧密相关。研究致病菌在农田中分布特征,对探明土传病菌致病机理及制定科学防控措施具有重要作用^[25,26]。王建明等研究发现,尖镰孢（Fusarium oxysporum）菌丝在西瓜和棉花地上部植株体内的相对含量和枯萎病发病程度呈显著正相关^[27,28]。本研究通过对河北、山东和河南麦区定位检测发现,从三叶期至分蘖期,小麦植株体内禾谷丝核菌菌量增幅近30倍,在全生育期中增速最快;根系中菌量增幅度也高达17倍。本研究室前期研究发现,冬小麦、夏玉米一年两熟秸秆还田土壤中含有机酸、酯、烃、酰胺及醛类等化学物质,有机酸类物质相对含量最高,达29.98%;且其中的3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-2-丙烯酸和4-甲氧基邻氨基苯甲酸对禾谷丝核菌菌丝生长和菌核形成均具有显著促进作用^[29]。因此,从三叶期至分蘖期禾谷丝核菌增速较快的原因可能与玉米秸秆腐解物中的酸类物质密切相关。对于生产中有纹枯病发病史的麦区,在分蘖期就应加强纹枯病监测和防控;其次,还田秸秆作为主要病残体始终存在于小麦、玉米两熟周年种植体系中,所以田间麦玉秸秆粉碎还田时也应该注重化学或生防药剂处理。在起身期至抽穗期,小麦植株体内的禾谷丝核菌含量呈明显下降趋势,可能是由于该阶段小麦植株生物量增速加快或茎秆硬度增强影响了病菌在植株体内扩展。玉米全生育期植株体内菌量相对较低可能主要因为是禾谷丝核菌对玉米的侵染力较弱造成的。

4 结论

河南麦区纹枯病发生程度最重,山东麦区次之,河北麦区最轻。强致病力双核禾谷丝核菌为3省优势病原菌。采自河南麦区菌株整体致病力最强,河北麦区最弱。禾谷丝核菌菌量在小麦三叶期至分蘖期增速最快,在小麦秸秆中相对含量最高、玉米秸秆中最低。生产中可有针对性的在还田秸秆粉碎过程中与冬前小麦幼苗期加强纹枯病的监测与防控。

参考文献 View Option 原文顺序
文献年度倒序
文中引用次数倒序
被引期刊影响因子

[1] LIU X, ZHU X L, WEI X N, LU C G, SHEN F D, ZHANG X W, ZHANG Z Y. The wheat LLM-domain-containing transcription factor TaGATA1 positively modulates host immune response to Rhizoctonia cerealis
Journal of Experimental Botany, 2020,71(1):344-355.
DOI:10.1093/jxb/erz409URLPMID:31536614 [本文引用: 1]
Wheat (Triticum aestivum) is essential for global food security. Rhizoctonia cerealis is the causal pathogen of sharp eyespot, an important disease of wheat. GATA proteins in model plants have been implicated in growth and development; however, little is known about their roles in immunity. Here, we report a defence role for a wheat LLM-domain-containing B-GATA transcription factor, TaGATA1, against R. cerealis infection and explore the underlying mechanism. Through transcriptomic analysis, TaGATA1 was identified to be more highly expressed in resistant wheat genotypes than in susceptible wheat genotypes. TaGATA1 was located on chromosome 3B and had two homoeologous genes on chromosomes 3A and 3D. TaGATA1 was found to be localized in the nucleus, possessed transcriptional activation activity, and bound to GATA-core cis-elements. TaGATA1 overexpression significantly enhanced resistance of transgenic wheat to R. cerealis, whereas silencing of TaGATA1 suppressed the resistance. Quantitative reverse transcription-PCR and ChIP-qPCR results indicated that TaGATA1 directly bound to and activated certain defence genes in host immune response to R. cerealis. Collectively, TaGATA1 positively regulates immune responses to R. cerealis through activating expression of defence genes in wheat. This study reveals a new function of plant GATAs in immunity and provides a candidate gene for improving crop resistance to R. cerealis.

[2] CHEN J, LI G H, DU Z Y, QUAN W, ZHANG H Y, CHE M Z, WANG Z, ZHANG Z J. Mapping of QTL conferring resistance to sharp eyespot (Rhizoctonia cerealis) in bread wheat at the adult plant growth stage
Theoretical and Applied Genetics, 2013,126(11):2865-2878.
URLPMID:23989648 [本文引用: 1]

[3] 李海燕, 齐永志, 甄文超. 河北省小麦纹枯病菌群体组成及致病力分化
植物保护学报, 2015,42(4):497-503.
[本文引用: 5]

LI H Y, QI Y Z, ZHEN W C. Composition and pathogenic analyses of the pathogen of wheat sharp eyespot in Hebei Province
Journal of Plant Protection, 2015,42(4):497-503. (in Chinese)
[本文引用: 5]

[4] 徐芳, 齐永志, 张书敏, 甄文超, 张月辰. 新耕作制度下河北省冬小麦病虫草害发生状况的研究
中国农学通报, 2012,28(21):199-203.
[本文引用: 2]

XU F, QI Y Z, ZHANG S M, ZHEN W C, ZHANG Y C. Study on diseases, insect pests and weeds of winter wheat under the new farming system in Hebei Province
Chinese Agricultural Science Bulletin, 2012,28(21):199-203. (in Chinese)
[本文引用: 2]

[5] QU T L, ZHANG J L, MENG Z L, LIU X L, CAO Y S, LI J Q, HAO J J. Metabolism of fungicide 2-allylphenol in Rhizoctonia cerealis
Ecotoxicology and Environmental Safety, 2014,102:136-141.
URLPMID:24530843 [本文引用: 1]

[6] 潘以楼, 吴汉章. 江苏小麦纹枯病菌(Rhizoctonia Cerealis Vander Hoeven) CAG₁群菌株的特性和致病力分化
江苏农业学报, 1992,8(3):30-35.
[本文引用: 1]

PAN Y L, WU H Z. Characteristics and pathogenicity differentiation among CAG₁ isolates of Rhizoctonia cerealis Vander Hoeven from winter wheat in Jiangsu
Jiangsu Journal of Agricultural Sciences, 1992,8(3):30-35. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[7] 王裕中, 吴志凤, 史建荣, 陈怀谷, 邵伯坤. 江苏省小麦纹枯病发生规律与病害消长因素分析
植物保护学报, 1994,21(2):109-114.
[本文引用: 1]

WANG Y Z, WU Z F, SHI J R, CHEN H G, SHAO B K. Study on occurrence of wheat sharp eyespot in Jiangsu and the factors influencing its development in fields
Acta Phytophylacica Sinica, 1994,21(2):109-114. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[8] 陈怀谷, 方正, 陈厚德, 林玲, 王裕中. 小麦纹枯病菌核糖体基因内转录区序列比较
植物病理学报, 2005,35(1):24-29.
[本文引用: 1]

CHEN H G, FANG Z, CHEN H D, LIN L, WANG Y Z. Comparison of wheat sharp spot pathogenic isolates based on the internal transcribed spacer sequence
Acta Phytopathologica Sinica, 2005,35(1):24-29. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[9] 陈延熙, 唐文华, 张敦华, 简小鹰. 我国小麦纹枯病病原学的初步研究
植物保护学报, 1986,13(1):39-44.
[本文引用: 2]

CHEN Y X, TANG W H, ZHANG D H, JIAN X Y. A preliminary study on etiology of sharp eyespot of wheat in China
Acta Phytophylacica Sinica, 1986,13(1):39-44. (in Chinese)
[本文引用: 2]

[10] 吴帮承, 颜思齐. 四川省小麦纹枯病菌系研究
西南农业大学学报, 1993,15(2):125-129.
[本文引用: 1]

WU B C, YAN S Q. Studies on the strains of the pathogens of sheath blight of wheat in Sichuan Province
Journal of Southwest Agricultural University, 1993,15(2):125-129. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[11] 张会云, 陈荣振, 冯国华, 刘东涛, 王静, 王晓军, 楼辰军, 张凤. 中国小麦纹枯病的研究现状与展望
麦类作物学报, 2007,27(6):1150-1153.
[本文引用: 1]

ZHANG H Y, CHEN R Z, FENG G H, LIU D T, WANG J, WANG X J, LOU C J, ZHANG F. Research advances and prospect on wheat sharp eyespot in China
Journal of Triticeae Crops, 2007,27(6):1150-1153. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[12] 汪敏, 吕柏林, 邢小萍, 李洪连. 河南省小麦纹枯病菌的群体组成及其致病力分化研究
植物病理学报, 2011,41(5):556-560.
[本文引用: 4]

WANG M, Lü B L, XING X P, LI H L. Composition and virulence variation of the pathogen of wheat sharp eyespot from Henan Province
Acta Phytopathologica Sinica, 2011,41(5):556-560. (in Chinese)
[本文引用: 4]

[13] 于金凤, 张天宇, 张修国. 山东小麦纹枯病菌致病性与遗传分化关系的研究
植物病理学报, 2007,37(4):418-425.
[本文引用: 2]

YU J F, ZHANG T Y, ZHANG X G. Genetic and virulence variation of wheat sharp eyespot isolates (Rhizoctonia cerealis AG-D) from Shandong Province
Acta Phytopathologica Sinica, 2007,37(4):418-425. (in Chinese)
[本文引用: 2]

[14] 杜文珍. 小麦纹枯病菌的致病力、遗传多样性及其所含dsRNA的研究
[D]. 南京: 南京农业大学, 2012.
[本文引用: 1]

DU W Z. Pathogenicity and genetic diversity of Rhizoctonia cerealis and dsRNA within it
[D]. Nanjing: Nanjing Agricultural University, 2012. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[15] 陈莹, 李伟, 张晓祥, 张伯桥, 于汉寿, 陈怀谷. 中国北纬33度地区小麦纹枯病菌的群体组成及致病力研究
麦类作物学报, 2009,29(6):1110-1114.
[本文引用: 1]

CHEN Y, LI W, ZHANG X X, ZHANG B Q, YU H S, CHEN H G. Composition and virulence of pathogen of wheat sharp eyespot in north latitude 33°of China
Journal of Triticeae Crops, 2009,29(6):1110-1114. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[16] 李永庚. 山东省不同生态类型区小麦品质的差异及其生理基础
[D]. 泰安: 山东农业大学, 2001.
[本文引用: 1]

LI Y G. The difference on quality of winter wheat in different regions of Shandong Province and its physiological basis
[D]. Taian: Shandong Agricultural University, 2001. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[17] 张世成, 丁运华, 郭荣秀. 河南省小麦气候生态区划及生长发育特点
生态农业研究, 1996,4(3):70-73.
[本文引用: 1]

ZHANG S C, DING Y H, GUO R X. Climatic ecological division and growth characters of wheat in Henan Province
Eco-Agriculture Research, 1996,4(3):70-73. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[18] BANDONI R J. Safranin O as a rapid nuclear stain for fungi
Mycologia, 1979,71(4):873-874.
[本文引用: 1]

[19] SNEH B, JABAJU-HARE S, NEATE S, DIJST G. Rhizoctonia Species: Taxonomy, Molecular Biology, Ecology, Pathology and Disease Control
Netherlands: Kluwer Academic Publishers, 1996.
[本文引用: 1]

[20] LEMA?CZYK G, KWA?NA H. Effects of sharp eyespot (Rhizoctonia cerealis) on yield and grain quality of winter wheat
European Journal Plant Pathology, 2013,135:187-200.
[本文引用: 2]

[21] 于寒, 谷岩, 梁烜赫, 吴春胜. 玉米秸秆腐解规律及土壤微生物功能多样性研究
水土保持学报, 2015,29(2):305-309.
[本文引用: 1]

YU H, GU Y, LIANG X H, WU C S. Study on the decomposition characteristics of maize straw and soil microbial functional diversity
Journal of Soil and Water Conservation, 2015,29(2):305-309. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[22] GUO Y P, LI W, SUN H Y, WANG N, YU H S, CHEN H G. Detection and quantification of Rhizoctonia cerealis in soil using real-time PCR
Journal of General Plant Pathology, 2012,78(4):247-254.
[本文引用: 1]

[23] SCHMIDT P A, BALINT M, GRESHAKE B, BANDOW C, ROMBKE J, SCHMITT I. Illumina metabarcoding of a soil fungal community
Soil Biology and Biochemistry, 2013,65(5):128-132.
[本文引用: 1]

[24] 李永娟, 刘顺, 朱杰华, 成鹏. 河北省小麦及玉米纹枯病菌生物学特性初步研究
中国农业科技导报, 2007,9(1):47-51.
[本文引用: 1]

LI Y J, LIU S, ZHU J H, CHENG P. Biological characteristics of the pathogens from wheat sharp eyespot and corn sheath blight in Hebei Province
Review of China Agricultural Science and Technology, 2007,9(1):47-51. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[25] 葛慈斌, 刘波, 朱育菁, 肖荣凤, 车建美, 谢关林. 生防菌NH-BS-2000对西瓜枯萎病原菌抑制作用的研究
厦门大学学报 (自然科学版), 2004,43(增刊):87-90.
[本文引用: 1]

GE C B, LIU B, ZHU Y J, XIAO R F, CHE J M, XIE G L. Study on the inhibition of antagonistic bacteria, NH-BS-2000 against Fusarium oxysporum in the watermelon
Journal of Xiamen University (Natural Science), 2004,43(Suppl.):87-90. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[26] OZAKTAN H, BORA T. Biological control of Fusarium oxysporum f. sp. melonis by the formulations of fluorescent pseudomonads
Journal of Turkish Phytopathology, 2000,29(2/3):133-149.
[本文引用: 1]

[27] 王建明, 郑经武, 贺运春, 李志岗. 西瓜枯萎病菌在植株体内的存在状态、数量分布及扩展规律的研究
中国农业科学, 1993,26(3):69-74.
[本文引用: 1]

WANG J M, ZHENG J W, HE Y C, LI Z G. A study on the existing form, number of distribution and fluctuation laws of Fusarium oxysporum f. sp. niveum in watermelon plants
Scientia Agricultura Sinica, 1993,26(3):69-74. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[28] 贺运春, 王建明. 棉株体内枯萎病菌的存在状态及消长规律的研究
中国农业科学, 1988,21(4):55-61.
[本文引用: 1]

HE Y C, WANG J M. Studies on existence forms and fluctuation laws of Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum in cotton plants
Scientia Agricultura Sinica, 1988,21(4):55-61. (in Chinese)
[本文引用: 1]

[29] 赵绪生, 齐永志, 闫翠梅, 甄文超. 小麦、玉米两熟秸秆还田土壤中6种有机酸对小麦纹枯病的化感作用
中国农业科学, 2020,53(15):3095-3107.
[本文引用: 1]

ZHAO X S, QI Y Z, YAN C M, ZHEN W C. Allelopathy of six organic acids on wheat sheath blight in the soil of winter wheat- summer maize double cropping straw returning system
Scientia Agricultura Sinica, 2020,53(15):3095-3107. (in Chinese)
[本文引用: 1]