摘要： 【目的】探究Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂KaSPI在大豆蚜Aphis glycines的生长发育、消化和免疫防御等过程中的作用。【方法】基于大豆蚜转录组数据PCR克隆大豆蚜Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因cDNA序列；qRT-PCR分别检测AgKaSPI在大豆蚜1-4龄若虫和成虫以及蜡蚧刺束梗孢菌Akanthomyces
lecanii侵染3, 6, 12, 24, 48和72 h时大豆蚜成虫中的表达水平； siRNA干扰AgKaSPI 3, 6, 12, 24和48 h后qRT-PCR检测RNAi干扰效率，并记录RNAi后12, 24, 48和96 h时大豆蚜成虫死亡数和产蚜量；双抗体夹心法检测蜡蚧刺束梗孢菌侵染和RNAi干扰AgKaSPI后大豆蚜成虫体内AgKaSPI蛋白含量以及丝氨酸蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性变化；观察并记录RNAi干扰AgKaSPI后6 h蜡蚧刺束梗孢菌侵染大豆蚜成虫12, 24, 48和96 h时的死亡数。【结果】在大豆蚜体内克隆得到了一条丝氨酸蛋白酶抑制剂基因AgKaSPI的cDNA序列(GenBank登录号: MK440557)，序列全长1 019 bp，开放阅读框长324 bp，编码107个氨基酸。AgKaSPI具有Kazal结构域，推测分子量和等电点分别为11.43 kD和9.24。基因表达模式研究发现，AgKaSPI在大豆蚜各个龄期均有表达。大豆蚜成虫经蜡蚧刺束梗孢菌侵染24 h时，AgKaSPI基因表达量显著上调，为对照的4.31倍；相应AgKaSPI蛋白含量也显著上调，为对照的1.69倍；而丝氨酸蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性受到抑制。RNAi干扰AgKaSPI 6 h时，大豆蚜成虫体内AgKaSPI表达量下降了71.05%；KaSPI蛋白含量在干扰12 h时下降了51.11%，丝氨酸蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性显著增强；干扰96 h时每百头大豆蚜产蚜量减少了49头且大豆蚜成虫的死亡率增加了10.12%。【结论】AgKaSPI在大豆蚜各个龄期均有表达，且在蜡蚧刺束梗孢菌侵染24 h后表达量显著上调。AgKaSPI可能通过调节丝氨
酸蛋白酶活性参与了大豆蚜对蜡蚧刺束梗孢菌的免疫反应。
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大豆蚜Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因AgKaSPI 对蜡蚧刺束梗孢菌侵染的表达响应
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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