摘要： 【目的】本研究旨在构建用于小菜蛾Plutella xylostella蛹期特异表达基因Br-Z2/3 dsRNA合成的体外原核表达系统，研究RNAi抑制Br-Z2/3基因对小菜蛾Br-Z2/3和细胞凋亡基因表达及化蛹的影响。【方法】构建小菜蛾L4440-Br-Z2/3重组载体，转化大肠杆菌Escherichia coli HT115感受态细胞，经IPTG诱导大量获得Br-Z2/3 dsRNA，显微注射Br-Z2/3 dsRNA至小菜蛾4龄幼虫进行RNAi；qPCR检测干扰Br-Z2/3基因12和24 h后小菜蛾4龄幼虫Br-Z2/3及其下游细胞凋亡基因reaper, caspase-9和Gadd45g的表达量；观察并统计Br-Z2/3 RNAi后小菜蛾4龄幼虫的化蛹率、平均化蛹时间、蛹畸形率和幼虫死亡率。【结果】成功实现了Br-Z2/3 dsRNA的原核表达。qPCR结果表明，RNAi干扰Br-Z2/3后，小菜蛾4龄幼虫Br-Z2/3基因和相关联的细胞凋亡基因reaper表达量显著下降，但caspase-9和Gadd45g表达量显著上升。注射Br-Z2/3 dsRNA的处理组，化蛹率显著低于对照组，且化蛹高峰期推迟，幼虫死亡率显著高于对照组且畸形蛹率增加。【结论】本研究成功构建了用于小菜蛾Br-Z2/3基因dsRNA合成的体外原核表达系统，利用显微注射法对Br-Z2/3进行RNA干扰，证明Br-Z2/3是调控小菜蛾化蛹的关键基因。
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RNAi抑制小菜蛾Br-Z2/3基因对下游细胞凋亡基因表达及化蛹的影响
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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