摘要： 【目的】本研究旨在克隆鉴定家蝇Musca domestica中8-羟基鸟嘌呤糖苷酶1(8-hydroxyguanineglycosylase 1, OGG1)编码基因Mdogg1，明确其是否参与家蝇氧化应激调控。【方法】根据家蝇转录组数据，利用RT-PCR克隆Mdogg1基因cDNA序列，并进行生物信息学分析；利用qRT-PCR检测Mdogg1在家蝇不同发育阶段(卵、1-3龄幼虫、蛹和成虫)的表达变化、3龄幼虫不同组织(血细胞、肌肉、肠道和脂肪体)中的表达分布以及不同胁迫处理［2.5~100 mmol/L CdCl2胁迫24 h, 0.1 g/L盐酸阿霉素(DOX)浸泡30min并恢复培养6, 12和24 h, 以及280-315 nm紫外线(UV)(强度5 J/cm2)处理5~30 min］ 后2龄幼虫中的转录水平变化；通过RNAi技术敲低家蝇2龄幼虫Mdogg1表达，并检测其丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性和8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine, 8-oxoG)含量的变化。【结果】Mdogg1(GenBank登录号:AYK27449.1) cDNA序列全长1 062 bp，编码353个氨基酸，该蛋白的理论分子量和等电点分别为41.08 kD和9.02。MdOGG1氨基酸序列中含有螺旋-发夹-螺旋(HhH)结构域，并包含核酸内切酶Ⅲ保守结构域ENDO3c。qRT-PCR结果显示，Mdogg1主要在家蝇卵和3龄幼虫脂肪体中呈高水平表达。2龄幼虫暴露于2.5~100 mmol/L CdCl2下，Mdogg1表达量呈现先上升再下降趋势，并伴有8-oxoG含量的持续升高。2龄幼虫浸泡于0.1 g/L DOX 30 min并恢复培养12和24 h以及UV照射30 min后，Mdogg1表达量较未处理对照均显著上调。利用RNAi技术敲低家蝇2龄幼虫体内Mdogg1的表达后，家蝇幼虫体内的ROS水平、MDA含量和8-oxoG含量较注射dsGFP的对照组显著增高，而SOD活性下降。【结论】Mdogg1参与家蝇氧化还原平衡的维持，具有保护机体抵抗氧化损伤的生物学效应。
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Mdogg1基因参与家蝇体内氧化还原平衡的维持
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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