摘要： 【目的】克隆中华按蚊Anopheles sinensis气味结合蛋白2(odorant binding protein 2, OBP2)基因AsinOBP2，分析该基因的表达及其重组蛋白与人体气味物质的结合能力。【方法】采用RT-PCR和RACE技术克隆AsinOBP2的全长cDNA序列，通过qPCR分析AsinOBP2基因在中华按蚊不同发育时期(雌雄蛹及羽化后第0, 1, 2, 3, 6和9天的成虫)、3日龄成虫不同嗅觉组织(触角、喙和下颚须)和吸血前后3日龄雌成虫中的表达水平；通过原核表达和亲和层析，表达并纯化AsinOBP2重组蛋白，运用荧光竞争结合实验
测定重组蛋白AsinOBP2与39种人体气味物质的结合能力。【结果】克隆并测序了AsinOBP2的全长cDNA序列(GenBank登录号: MT700441)，其开放阅读框长492 bp，编码163个氨基酸，N末端30个氨基酸为信号肽序列，具有气味结合蛋白典型的6个保守半胱氨酸结合位点，属于Classic亚家族成员。qPCR结果显示，AsinOBP2在中华按蚊羽化后的表达水平逐渐增强，羽化后第6天表达水平最高，随后开始下降；AsinOBP2主要在雌成蚊触角中表达；吸食血液后3日龄雌成虫中AsinOBP2的表达水平显著下降。荧光竞争结合实验显示，在测定的39种人体气味物质中，重组蛋白AsinOBP2与12种化合物具有结合活性，其中与吲哚结合能力较强，解离常数Ki=27.15 μmol /L，其次是与正丙胺、2-甲基丁醛和葵醛，解离常数Ki分别为42.49, 48.33和47.90 μmol /L。【结论】根据AsinOBP2基因的表达特点及其重组蛋白与人体气味物质的结合能力，后者表明AsinOBP2对人体气味物质具有明显的选择结合特性，我们推断AsinOBP2在雌蚊追寻宿主的行为中起着重要的作用。
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中华按蚊气味结合蛋白AsinOBP2的基因克隆、表达谱及与人体气味物质的结合特性分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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