葡萄E3泛素酶HOS1基因克隆、表达及抗血清制备

俞沁含¹, 焦淑珍¹, 吴楠¹, 张宁波², 徐伟荣^2,*()

¹宁夏大学农学院,银川 750021
²宁夏大学食品与葡萄酒学院,银川 750021

收稿日期:2020-12-21修回日期:2021-03-21出版日期:2021-06-25发布日期:2021-07-08
通讯作者:徐伟荣E-mail:xuwr@nxu.edu.cn

基金资助:国家重点研发计划项目(2019YFD1002500);国家自然科学(31860542)

Molecular Cloning,Expression and Polyclonal Antibody Preparation of E3 Ubiquitin Ligase Gene HOS1 from Vitis vinifera

YU Qinhan¹, JIAO Shuzhen¹, WU Nan¹, ZHANG Ningbo², XU Weirong^2,*()

¹College of Agronomy,Ningxia University,Yinchuan 750021,China
²School of Food and Wine,Ningxia University,Yinchuan 750021,China

Received:2020-12-21Revised:2021-03-21Online:2021-06-25Published:2021-07-08
Contact:XU Weirong E-mail:xuwr@nxu.edu.cn

摘要/Abstract

摘要： HOS1（High expression of osmotically responsive genes 1）编码1个具有E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确。以欧洲酿酒葡萄品种‘霞多丽'的叶片为供试材料,克隆了VvHOS1基因,其全长2 931 bp,编码976个氨基酸,在第74 ~ 106个氨基酸处存在RING类型的锌指结构域（zf-C3H4_3）。系统发育分析表明,葡萄属植物的HOS1蛋白与番茄、烟草、茶树的亲缘关系最近。将VvHOS1抗原表位丰富肽段（1 ~ 320 aa）构建至原核表达载体pET28a-SUMO的BamHⅠ与Hind Ⅲ位点,转化大肠杆菌。经IPTG诱导发现,pET28a- VvHOS1^1-320在大肠杆菌Rosetta（DE3）中高表达,融合蛋白主要以包涵体形式存在。将纯化后的重组蛋白作为抗原免疫大耳白兔,获得anti-VvHOS1多克隆抗体,ELISA检测效价为1︰51 200,具有较强的Western特异性。该抗血清能够特异性检测‘霞多丽'葡萄叶片中的VvHOS1蛋白。（4 ℃）低温胁迫6、36与48 h时VvHOS1上调表达显著。
中图分类号:
S663.1

引用本文

俞沁含, 焦淑珍, 吴楠, 张宁波, 徐伟荣. 葡萄E3泛素酶HOS1基因克隆、表达及抗血清制备[J]. 园艺学报, 2021, 48(6): 1173-1180.
YU Qinhan, JIAO Shuzhen, WU Nan, ZHANG Ningbo, XU Weirong. Molecular Cloning,Expression and Polyclonal Antibody Preparation of E3 Ubiquitin Ligase Gene HOS1 from Vitis vinifera[J]. Acta Horticulturae Sinica, 2021, 48(6): 1173-1180.





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