梨愈伤组织双靶点CRISPR/Cas9基因编辑系统的建立
杨锋, 杨钦淞, 高雨豪, 马云晶, 许英, 滕元文, 白松龄*(
) 浙江大学农业与生物技术学院园艺系,农业部园艺植物生长发育与品质调控重点实验室,杭州 310058
收稿日期:2020-10-10修回日期:2021-01-26出版日期:2021-05-25发布日期:2021-06-07通讯作者:白松龄E-mail:songlingbai@zju.edu.cn基金资助:国家重点研发计划项目(2018YFD1000100);国家自然科学基金项目(31772272)Establishment of Dual-cut CRISPR/Cas9 Gene Editing System in Pear Calli
YANG Feng, YANG Qinsong, GAO Yuhao, MA Yunjing, XU Ying, TENG Yuanwen, BAI Songling*() Department of Horticulture,College of Agriculture and Biotechnology,Zhejiang University,State Agriculture Ministry Key Laboratory of Horticultural Plant Growth,Development & Quality Improvement,Hangzhou 310058,China
Received:2020-10-10Revised:2021-01-26Online:2021-05-25Published:2021-06-07Contact:BAI Songling E-mail:songlingbai@zju.edu.cn摘要/Abstract
摘要： 为了在梨愈伤组织中建立CRISPR/Cas9基因编辑体系,将proDAM3:GUS转入‘茄梨’愈伤组织,通过构建双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体,利用农杆菌介导的遗传转化法侵染proDAM3:GUS转基因梨愈伤组织,通过测序及GUS染色的方法检验敲除效果,分析靶基因突变类型。结果表明,共有4个转基因株系在靶位点处发生了基因突变,编辑效率为66.7%。对所有基因编辑株系的有效克隆进行分析,结果显示sgRNA1在靶位点GUST1的突变频率达到71.4%,高于sgRNA2在靶位点GUST2突变频率的46.4%,说明sgRNA1可以更有效地与靶位点结合。测序结果表明,4个基因编辑株系中GUS基因均被敲除,基因突变的类型包含碱基缺失、插入及两个靶点之间大片段的缺失,不存在碱基替换。GUS染色结果显示,基因敲除后的GUS转基因愈伤完全呈白色,说明利用CRISPR/Cas9多靶点基因编辑系统可以在梨愈伤组织中实现高效的基因敲除。
中图分类号:
S661.2
引用本文
杨锋, 杨钦淞, 高雨豪, 马云晶, 许英, 滕元文, 白松龄. 梨愈伤组织双靶点CRISPR/Cas9基因编辑系统的建立[J]. 园艺学报, 2021, 48(5): 873-882.
YANG Feng, YANG Qinsong, GAO Yuhao, MA Yunjing, XU Ying, TENG Yuanwen, BAI Songling. Establishment of Dual-cut CRISPR/Cas9 Gene Editing System in Pear Calli[J]. Acta Horticulturae Sinica, 2021, 48(5): 873-882.
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