山葡萄低温诱导酵母双杂三框cDNA文库构建和VaCIPK18互作蛋白筛选鉴定
郑巧玲1，申 威1，姚文孔1，徐伟荣2,3,4,*1宁夏大学农学院，银川 750021；2宁夏大学食品与葡萄酒学院，银川 750021；3中国葡萄酒产业技术研究院，银川 750021；4宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室，银川 750021
出版日期:2020-12-25发布日期:2021-01-06基金资助:国家重点研发计划项目（2019YFD1002500）； 国家地区科学基金项目（31560550，31860542）；宁夏回族自治区重点研发计划重大（重点）项目（2019BBF02022-02）；国家科技重大专项（106001000000150012）Construction of Yeast Two-hybrid Three-frame cDNA Library of Vitis amurensis and Screening of VaCIPK18 Interaction Protein
ZHENG Qiaoling1，SHEN Wei1，YAO Wenkong1，and XU Weirong2,3,4,*1College of Agronomy，Ningxia University，Yinchuan 750021，China；2School of Food and Wine，Ningxia University，Yinchuan 750021，China；3China Wine Industry Technology Institute，Yinchuan 750021，China；4Key Laboratory of Modern Molecular Breeding of Dominant and Special Crops in Ningxia，Yinchuan 750021，China
Online:2020-12-25Published:2021-01-06摘要/Abstract
摘要： 类钙调磷酸酶B亚基蛋白CBL（calcineurin B-like protein）与其互作蛋白激酶CIPK（CBL-interacting protein kinase）组成的CBL-CIPK系统，在真核生物钙信号转导及各种胁迫应答途径中发挥重要作用。采用SMART与LD-PCR技术构建了山葡萄‘双丰’（Vitis amurensis Rupr. ‘Shuangfeng’）叶片组织低温胁迫下的均一化酵母双杂交三框cDNA文库，库容量分别为1.7 × 106、1.3 × 106与1.9 × 106 cfu ? mL-1，外源基因插入片段长度约为500 ~ 2 000 bp，重组率为100%，符合后续双杂交筛选要求。以本课题组前期鉴定受低温诱导表达、具有核质亚细胞定位的山葡萄VaCIPK18全长（VaCIPK18）、激酶结构域缺失（VaCIPK18△S_TKc）以及NAF结构域缺失（VaCIPK18△NAF）为诱饵，进行酵母双杂交筛选，获得了17个候选互作靶蛋白；从中选取并克隆了7个参与非生物胁迫的候选互作蛋白进行酵母回转验证，仅发现1个ABA信号通路上游信号调节因子VaPYL9与VaCIPK18有互作关系。通过酵母双杂交和双分子荧光互补验证，确定了VaPYL9可与VaCIPK18和VaCIPK18△NAF在酵母中物理互作，而在植物拟南芥原生质体中VaPYL9与VaCIPK18△S_TKc和VaCIPK18△NAF互作，但与全长VaCIPK18不互作。
中图分类号:
S 663.1
引用本文
郑巧玲, 申 威, 姚文孔, 徐伟荣, . 山葡萄低温诱导酵母双杂三框cDNA文库构建和VaCIPK18互作蛋白筛选鉴定[J]. 园艺学报, 2020, 47(12): 2301-2316.
ZHENG Qiaoling, SHEN Wei, YAO Wenkong, and XU Weirong, . Construction of Yeast Two-hybrid Three-frame cDNA Library of Vitis amurensis and Screening of VaCIPK18 Interaction Protein[J]. Acta Horticulturae Sinica, 2020, 47(12): 2301-2316.
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