, 刘洋2, 吴葆辉2 1. 衡水市精神病医院, 河北 衡水 053000;
2. 衡水市人民医院, 河北 衡水 053000
2020-06-01 收稿, 2020-08-20 录用
基金项目: 衡水市科技计划项目（2018014026Z）资助
*通讯作者: 吴肖升
摘要: 本研究选取18例男性乳腺恶性肿瘤患者作为研究组，纳入同期41例男性良性乳腺肿瘤及50例健康体检男性分别作为良性对照组和健康对照组，通过对比分析发现，研究组CDFI参数[搏动指数（PI）、阻力指数（RI）、血流速度（PSV）]高于良性对照组和健康对照组（P < 0.05）；PI、RI、PSV联合诊断男性乳腺恶性肿瘤的AUC高达0.854，具有较高应用价值；研究组患者PI、RI、PSV与CXC型趋化因子配体1（CXCL1）、GRB相关蛋白2（Gab2）、微血管密度（MVD）水平间存在正相关关系（P < 0.05）。由此可见，CDFI在鉴别男性乳腺良恶性肿瘤方面具有较高应用价值，且与患者CXCL1、Gab2、MVD表达呈正相关。
关键词: 乳腺癌男性彩色多普勒超声CXC型趋化因子配体1GRB相关蛋白2微血管密度
The Value of CDFI in Identifying Benign and Malignant Tumors of Male Breast and Its Correlation with CXCL1, Gab2 and MVD
WU Xiaosheng1
, LIU Yang2, WU Baohui2 1. Hengshui Mental Hospital, Hengshui 053000, Hebei, P. R. China;
2. Hengshui People's Hospital, Hengshui 053000, Hebei, P. R. China
*Corresponding author: WU Xiaosheng
Abstract: In this article, 18 male patients with malignant breast tumors were selected as the research group, while 41 male with benign breast tumors and 50 healthy males in the same period were included as benign control group and healthy control group. Through comparative analysis, it was found that the CDFI parameters[pulse index (PI), resistance index (RI), blood flow velocity (PSV)] of the research group were higher than those of the benign control group and the healthy control group (P < 0.05). The combined AUC value of PI, RI and PSV in the diagnosis of male breast malignant tumors was as high as 0.854, which was of a high application value. In the research group, there was a positive correlation between PI, RI, PSV and the level of CXC type chemokine ligand 1 (CXCL1), as well as the level of GRB related protein 2 (Gab2) and microvessel density (MVD) (P < 0.05). Our research showed that CDFI had a high application value in identifying benign and malignant breast tumors in men, and it is positively correlated with the expression of CXCL1, Gab2 and MVD in patients.
Key words: breast cancermalecolor doppler flow imagingCXC-type chemokine ligand 1GRB-related protein 2microvessel density
乳腺癌为临床最常见恶性肿瘤之一，其患者中约99%为女性，男性患者仅占1%左右，但近年男性乳腺癌发病率呈逐渐升高趋势[1]。迄今为止男性乳腺癌尚未引起医患重视，存在漏诊、误诊现象，严重影响患者预后，尽早检出对改善患者预后至关重要[2]。超声是临床早期筛查乳腺癌的首选影像学方法，彩色多普勒超声(color Doppler flow imaging, CDFI)可通过清晰显现血流方向、速度等信息对肿瘤进行量化评估，进而为肿瘤良恶性判断提供依据[3]。此外，近年来研究显示CXC型趋化因子配体1(CXC-motif chemokine ligand 1，CXCL1)、GRB相关蛋白2(GRB-associated binding protein 2，Gab2)、微血管密度(micro vessel density，MVD)与恶性肿瘤的发生发展密切相关[4-5]。基于此，本研究探究了CDFI鉴别男性乳腺良恶性肿瘤价值及与CXCL1、Gab2、MVD的相关性，旨在为男性乳腺癌的早期诊断、治疗提供参考。
1 资料与方法1.1 一般资料选取2015年1月~2019年12月期间收治的18例男性乳腺恶性肿瘤患者作为研究组，均经超声引导下细针穿刺活检确诊，纳入同期的41例男性良性乳腺肿瘤及50例健康体检男性分别作为良性对照组和健康对照组。对比三组研究对象的婚姻状况、年龄、体质量、乳腺癌家族史、吸烟及饮酒情况，均无显著差异(P>0.05)。详见表 1。
表1
 表 1 各组一般资料对比
| 表 1 各组一般资料对比 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1.2 选例标准纳入标准：①男性，年龄≥18岁；②自主行为能力良好，可配合完成研究；③无精神系统疾病；④既往无肿瘤手术史；⑤研究对象知晓本研究，已签署同意书。
排除标准：①合并其他恶性肿瘤患者；②血液系统疾病患者；③自身免疫性疾病患者；④严重心脑血管疾病、肝肾功能障碍患者；⑤严重感染性疾病患者。
1.3 方法CDFI检查方法：采用美国通用公司生产的HDI 3500型彩色多普勒显像仪进行检测，探头频率4~10 MHz。患者取仰卧位，双臂上举，充分暴露乳房及腋窝，以乳头为中心作扇形及纵横扫查，探头中心频率8 MHz，观察病灶的大小、形态、与周围组织的关系、质地及活动度，并与健侧乳房作对比；扫查双侧腋窝有无异常淋巴结；观察乳腺回声，记录腺体大小、有无肿块及肿块的大小、边缘、形态、内部回声及血供情况，并实施多点取样，对平均流速、舒张末期流速、收缩期流速峰值等进行记录，记录CDFI参数，包括搏动指数(pulse index，PI)、阻力指数(resistance index，RI)、收缩期峰值血流速度(peak systolic velocity，PSV)。并利用彩色多普勒及频谱多普勒功能观察病灶内部及周边的血流状况。患者资料及图像均由图文工作站保留。
实验室指标检测方法：术中取研究组患者的肿瘤组织标本，由专业检测师经细胞裂解、氯仿溶解、高速离心取无色水相、沉淀RNA、样品cRNA合成、目标基因扩增等步骤，扩增增殖基因CXCL1、侵袭基因Gab2。基因表达量经电脑荧光聚合酶链式反应技术曲线读取。并采用SP免疫组化法检测肿瘤组织中MVD表达水平，兔抗人单克隆抗体购自北京中杉公司，采用国际常用的Weidner改进式方法测量MVD水平，记录5个高倍视野内的微血管数，取其平均数作为最终MVD值。
超声引导下细针穿刺活检的方法：确定乳腺肿块位置，选定穿刺点，局部皮肤常规消毒，左手固定肿块，右手持10 mL注射器、7号针头，顶压下快速抽吸数次，解除负压退针。肿瘤组织学活检标本均匀涂薄片23张，于95%乙醇内固定，HE染色，光学显微镜下阅片、诊断。患者的组织学活检标本由质量分数10%的甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片，采用免疫组织化学染色确认分型。
1.4 观察指标(1) 三组研究对象的CDFI参数(PI、RI、PSV)。(2)研究组不同临床特征患者的CDFI参数，临床特征包括年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期、肿瘤部位、肿瘤直径、肿瘤类型，肿瘤情况均参照《肿瘤病理诊断规范(乳腺癌)》[6]中相关标准，结合超声引导下细针穿刺活检结果进行评估。(3)探究CDFI参数诊断男性乳腺恶性肿瘤的价值。(4)以研究组患者PI、RI、PSV平均值作为分界点，将大于平均值的患者作为高PI、RI、PSV患者，小于平均值的患者作为低PI、RI、PSV患者，比较不同CDFI参数患者的CXCL1、Gab2、MVD水平。(5)探究CDFI参数与CXCL1、Gab2、MVD的相关性。
1.5 统计学方法数据处理采用SPSS 22.0软件，计量资料以(x±s)表示，采用t检验，多重比较采用LSD-t检验；计数资料以n(%)表示，采用χ2检验，采用Pearson进行相关性分析，采用受试者工作(receiver operating characteristic，ROC)曲线分析预测价值，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 三组研究对象的CDFI参数三组研究对象的PI、RI、PSV比较，差异有统计学意义(P < 0.05)；两组间比较，研究组PI、RI、PSV高于良性对照组、健康对照组，差异有统计学意义(P < 0.05)。详见表 2。
表2
表 2 三组研究对象的CDFI参数(x±s)
| 表 2 三组研究对象的CDFI参数(x±s) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.2 不同临床特征患者的CDFI参数将研究组患者按临床特征进行分组，不同肿瘤分化程度、淋巴结是否转移、不同临床分期、不同肿瘤直径组间PI、RI、PSV水平存在显著差异(P < 0.05)。见表 3。
表3
表 3 研究组不同临床特征患者的CDFI参数(x±s)
| 表 3 研究组不同临床特征患者的CDFI参数(x±s) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.3 CDFI参数诊断男性乳腺恶性肿瘤的价值绘制PI、RI、PSV诊断男性乳腺恶性肿瘤的ROC曲线(见图 1~2)，显示PI单一诊断的曲线下面积(area under the curve，AUC)为0.816，95%CI为0.693~0.905，截断值>1.43，对应诊断敏感度为66.67%、特异度为87.80%；RI单一诊断的AUC为0.786，95%CI为0.658~0.881，截断值>0.77，对应诊断敏感度为66.67%、特异度为92.86%；PSV单一诊断的AUC为0.745，95%CI为0.615~0.850，截断值>20.27 cm·s-1，对应诊断敏感度为55.56%、特异度为87.80%；PI、RI、PSV联合诊断的AUC为0.854，95%CI为0.738~0.933，统计值Z=6.898，最佳诊断敏感度为77.78%、特异度为80.49%。
图 1
 | 图 1 CDFI参数单一诊断的ROC曲线 |
图 2
 | 图 2 CDFI参数联合诊断的ROC曲线 |
2.4 研究组不同CDFI参数患者的CXCL1、Gab2、MVD水平以研究组患者PI、RI、PSV平均值(PI平均值为1.74，RI平均值为0.79，PSV平均值为22.45 cm·s-1)作为分界点，将大于平均值的患者作为高PI、RI、PSV患者，小于平均值的患者作为低PI、RI、PSV患者，结果证实研究组高PI、RI、PSV患者的CXCL1、Gab2、MVD水平高于低PI、RI、PSV患者(P < 0.05)。见表 4。
表4
表 4 研究组不同CDFI参数的患者的CXCL1、Gab2、MVD水平(x±s)
| 表 4 研究组不同CDFI参数的患者的CXCL1、Gab2、MVD水平(x±s) |
2.5 CDFI参数与CXCL1、Gab2、MVD相关性相关性分析表明，研究组患者的PI、RI、PSV与CXCL1、Gab2、MVD呈正相关(P < 0.05)。见表 5。
表5
表 5 CDFI参数与CXCL1、Gab2、MVD相关性
| 表 5 CDFI参数与CXCL1、Gab2、MVD相关性 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3 讨论超声在乳腺癌筛查方面占据重要地位，具有经济、实惠、安全、可重复性高等特点，相对于其它检查具有不可替代的优势，患者受检率极高，既能及时发现乳腺病灶，对病灶性质作出初步判断，又能动态随访观察[7, 8]。但常规超声受检查者的主观性影响较大，无法对病变严重程度作出量化评估，具有一定局限性。
CDFI较常规超声分辨率更高，可清晰显示肿瘤形态、大小、位置等情况，同时可对肿瘤内部血供进行准确评估，从而鉴别肿瘤良恶性[9]。本研究发现，男性乳腺恶性肿瘤患者PI、RI、PSV明显高于良性乳腺肿瘤患者及健康体检者，与陈海涛等[10]针对女性乳腺恶性肿瘤的研究结果相近。乳腺恶性肿瘤能促进血管生成因子的合成、释放，以促进新生血管形成，为肿瘤增殖提供氧气与营养，所以乳腺恶性肿瘤血供较良性肿瘤和正常乳腺组织更加丰富，且恶性肿瘤内血管狭窄、扭曲，静脉回流受阻，血流速度缓慢[11, 12]。因此乳腺恶性肿瘤CDFI检查的结果表现为PI、RI、PSV明显升高，可据此对乳腺恶性肿瘤进行诊断。本研究通过ROC曲线分析发现，PI、RI、PSV联合诊断男性乳腺恶性肿瘤价值的AUC高达0.854，最佳诊断敏感度77.78%、特异度80.49%，对男性乳腺恶性肿瘤早期检出具有重要指导作用。
本研究结果还显示，不同分化程度、淋巴结转移、临床分期、肿瘤直径的男性乳腺恶性肿瘤患者的PI、RI、PSV存在显著差异，因此我们推测CDFI参数在评估男性乳腺恶性肿瘤恶性生物学特征方面具有一定作用。本研究中测得男性乳腺恶性肿瘤的PI平均值为1.74，RI平均值为0.79，PSV平均值为22.45 cm·s-1，与牛秋云[13]研究结果中女性乳腺癌患者RI平均值(0.78±0.10)、PSV平均值(22.46±5.17) cm·s-1及侯丽红[14]报道的女性乳腺癌患者的PI平均值(1.71±0.35)数据相近，证实我们的研究数据具有一定可靠性。以本研究中CDFI参数平均值作为分界值，发现随着男性乳腺恶性肿瘤PI、RI、PSV值升高，其肿瘤组织中CXCL1、Gab2、MVD表达水平亦逐渐升高，二者存在明显正相关关系。CXCL1属于趋化因子家族的成员，被认为是一种肿瘤增殖基因[15]。Kim等[16]报道指出，口腔鳞状细胞癌患者CXCL1表达明显升高，其可通过自分泌环诱导癌相关成纤维细胞成熟，促进癌细胞增殖。杨庭松等[17]通过一项对胃癌患者的研究发现，CXCL1可能通过调节MMP-3蛋白表达，发挥促进癌细胞的迁移和侵袭作用。Gab2是一种与乳腺癌细胞转移相关的侵袭基因，其编码的蛋白参与细胞内各种受体激活后的下游调节，临床已有研究证实，Gab2在卵巢癌[18]、胶质瘤[19]中的表达异常升高，且有报道[20]指出通过检测Gab2基因表达情况可衡量乳腺癌细胞侵袭活性。而MVD是目前用以衡量肿瘤新生血管程度的常用标志物，其表达水平越高，提示肿瘤组织内新生血管数量越多，而新生血管是恶性肿瘤增殖、转移的基础，其数量与肿瘤增殖、侵袭、转移等恶性生物学行为相关[21]。崔艳婷等[22]报道显示，通过检测乳腺癌患者癌组织中MVD表达情况，可评估其淋巴结转移风险。喻宏等[23]研究也指出，MVD值与三阴乳腺癌患者的淋巴转移及临床分期密切相关，可作为判断患者的疾病进展及预后的重要指标。结合上述分析及本研究结果可知，CDFI参数可在一定程度上反映男性乳腺恶性肿瘤患者肿瘤增殖、侵袭及转移能力。
综上可知，采用CDFI可对男性乳腺恶性肿瘤进行辅助诊断，且CDFI参数可在一定程度上反映CXCL1、Gab2、MVD表达情况，有助于临床评估肿瘤增殖、侵袭及转移风险。本研究创新之处在于明确了CDFI在鉴别男性乳腺良恶性肿瘤方面的价值及与CXCL1、Gab2、MVD表达的相关性，后续研究中我们将进一步探究CDFI在男性乳腺恶性肿瘤疗效评估方面的作用，以充分发挥其临床应用价值。
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