摘要： 【目的】蜕皮激素对孤雌蚜翅两型性分化具有重要调控作用。在前期研究中我们发现5个微小RNA(microRNA, miRNA)在豌豆蚜Acyrthosiphon pisum翅两型性分化中也发挥关键作用，但蜕皮激素是否与miRNA互作参与蚜虫翅型分化未知。本研究旨在探索蜕皮激素对5个miRNA及其预测靶基因表达的影响，揭示蜕皮激素与miRNA协同调控蚜虫翅型分化的机理。【方法】选择5个与豌豆蚜翅两型性分化相关的miRNA (Let-7, miR-92a, miR-92b, miR-92a-1-p5和miR-277)，使用0.1 mol/L蜕皮激素类似物20-羟基蜕皮酮(20E)分别处理孤雌生殖豌豆蚜2龄若蚜10 min和30 min，48 h后取样；qPCR检测这些miRNA及其预测靶基因在20E处理后的表达量；利用双荧光素酶活性检测法对miR-92a-1-p5的预测靶基因flightin进行验证；利用纳米载体/变性剂在孤雌生殖豌豆蚜4龄若蚜中敲低miR-92a-1-p5表达，验证miR-92a-1-p5与其预测靶基因flightin的互作关系。【结果】0.1 mol/L 20E处理30 min可极显著诱导孤雌生殖豌豆蚜2龄若蚜5个miRNA的表达；处理10 min则miR-92a-1-p5和miR-92b表达量较对照极显著下降，而Let-7和miR-277较对照极显著上升。Let-7与预测靶基因abrupt在0.1 mol/L 20E处理后孤雌生殖豌豆蚜豌2龄若蚜中表达趋势相反，miR-92a和miR-277的预测靶基因wingless和Uba1在0.1 mol/L 20E处理10 min时表达量极显著下降，与两个对应的miRNA表达趋势相反；miR-92a-1-p5的预测靶基因flightin在0.1 mol/L 20E处理30 min后表达量极显著下降，与miRNA表达趋势相反。双荧光素酶活性检测结果显示，共转染miR-92a-1-p5模拟物和flightin CDS过表达载体pmirGlO ［flightin］后与转染对照NC mimics相比，荧光素酶活性下降40%，达极显著水平；敲低孤雌生殖豌豆蚜4龄若蚜中miR92a1p5后其表达量下调83%，其预测靶基因flightin表达量上升48%，均达极显著水平，表明flightin是miR-92a-1-p5的真实靶基因。【结论】蜕皮激素能够诱导豌豆蚜体内miRNA的表达；miR-92a-1-p5可能通过调控flightin参与孤雌蚜翅型分化；纳米载体/变性剂可以在蚜虫个体中实现miRNA的有效干涉。该研究为进一步探索蜕皮激素和miRNA互作参与孤雌蚜翅两型性分化机制奠定了基础。
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豌豆蚜翅分化相关miRNA及其预测靶基因对蜕皮激素的应答及miR-92a-1-p5靶基因的验证
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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