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未公开
长聘副教授
一种检测酿酒酵母染色体大片段重复的位置的方法

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酿酒酵母染色体的转移方法

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一种转换酵母交配型的方法

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酿酒酵母环形染色体的构建方法

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小片段DNA共转化替换大片段DNA的方法

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酿酒酵母基因组定点突变的方法
本发明涉及分子生物学领域,具体涉及一种快速检测酿酒酵母染色体大片段重复的位置的方法,利用基因组测序和核内复制回交相结合,快速确认重复大片段基因组DNA所在染色体位置。本发明所述核内复制回交方法可高效、快速检测酿酒酵母染色体大片段重复基因组DNA所在染色体位置,并进行修复,删除大片段重复基因组DNA,无需精确确认大片段重复位点所在位置,无需对待检测酿酒酵母进行繁琐的实验数据分析工作,操作简单,实验周期短。

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本发明涉及微生物领域,特别涉及酿酒酵母染色体的转移方法。本发明利用endoreduplication#backcross方法将合成型V号染色体酿酒酵母菌株和合成型X号酿酒酵母菌株融合为二倍体菌株,利用半乳糖诱导丢失野生型V号染色体和X号染色体并利用SC+5-FOA培养基进行筛选；通过孢子拆分获得携带合成型V号和X号染色体的酿酒酵母单倍体菌株。本发明对比已有成果具有以下有益效果：快速实现酿酒酵母染色体的转移；避免姐妹染色单体的交叉互换,获得染色体转移后的酿酒酵母单倍体菌株。

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本发明涉及分子生物学领域,具体涉及一种转换酵母交配型的方法。本发明所述转换酵母交配型的方法,利用Cas9蛋白在MAT基因座处产生双链断裂,外源导入的MAT片段对该双链断裂进行修补,转换酿酒酵母交配型。本发明所述转换酵母交配型的方法可高效、快速转换酿酒酵母单倍体交配型,不依赖酿酒酵母自身染色体结构HMLα和HMRa,无需经过二倍体酿酒酵母阶段,且无需对待转换酿酒酵母菌株进行诱导等处理,直接获得相反交配型酿酒酵母菌株,实验周期短。

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本发明涉及合成生物学领域,特别涉及酿酒酵母环形染色体的构建方法。本发明利用酿酒酵母同源重组的特性,通过删除酿酒酵母染色体的端粒区来实现染色体的环化,从而获得环形染色体ringV_s和ringV_b。本发明对比已有成果具有以下有益效果：利用同源重组的方法实现对酿酒酵母染色体的人工环化；环化位点可自由选择；为环形染色体疾病的研究提供了一种新的模型。

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本发明涉及合成生物学染色体合成领域,特别涉及小片段DNA共转化替换大片段DNA的方法。本发明将多个长约3kb的小片段DNA共转化至酿酒酵母细胞中,利用酿酒酵母自身高效的同源重组特性,实现对不大于30kb酿酒酵母V号染色体的替换工作,替换的正确性通过PCR的方法进行验证。能够快速替换大片段真核生物染色体、并使之能够发挥正常功能的大片段DNA。

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本发明涉及微生物领域,特别涉及酿酒酵母基因组定点突变的方法。本发明利用CRISPR/Cas9技术修复酿酒酵母基因组上待修复的单碱基突变位点。如果该突变位点位于PAM序列(NGG)中或者PAM序列前11bp内,则可利用guide#RNA引导Cas9蛋白在待修复位点附近发挥作用,将酿酒酵母基因组进行切割处双链切口,从而实现供体DNA的高效重组。本发明对比已有成果具有以下有益效果：高效、快速实现酿酒酵母基因组位点的突变；无需向酿酒酵母基因组整合筛选标记。
"Perfect" designer chromosome V and behavior of a ring derivative

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酵母基因组工程

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Rapid and Efficient CRISPR/Cas9-Based Mating-Type Switching of Saccharomyces cerevisiae

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Design and chemical synthesis of eukaryotic chromosomes