靳丽萍, 张蕴, 徐晓, 肖孝辉, 张应烙
浙江师范大学化学与生命科学学院, 浙江 金华 321004
收稿日期：2016-03-11；修回日期：2016-06-14；网络出版日期：2016-08-17
基金项目：国家自然科学基金（21002092）
*通信作者：张应烙, Tel: +86-579-82286419; Fax: +86-579-82282269; E-mail:ylzhang@zjnu.cn
摘要： [目的] 鉴定黄蜻幼虫肠道中具有除草活性的真菌，并分析其除草活性成分。[方法] 通过形态学观察和分子生物学5.8S rDNA-ITS序列分析，明确菌株QTYC-51的分类地位。结合培养皿生物分析法测定菌株发酵液和单体化合物的除草活性，采用色谱方法从该菌乙酸乙酯粗提物中分离活性成分，并利用质谱和核磁共振谱鉴定活性物质。[结果] 菌株QTYC-51被鉴定为拟盾壳霉属菌（Paraconiothyrium sp.），其发酵液对稗草和反枝苋幼根生长有较好的抑制作用，抑制率分别为76.9%和56.5%。从QTYC-51发酵产物中分离到5个单体化合物，分别为1，8-dihydroxyanthraquinone，1-hydroxy-10-methoxy-dibenz[b，e]oxepin-6，11-dione，hydroxyvertixanthone，globosuxanthone和1，3，6，8-tetrahydroxyanthraquinone。在供试浓度为100 μg/mL时，化合物globosuxanthone对稗草和反枝苋幼根生长有明显的抑制作用，抑制率分别为94.1%和79.0%，与阳性对照2，4-二氯苯氧乙酸效果相当；化合物1-hydroxy-10-methoxy-dibenz[b，e]oxepin-6，11-dione具有较好的除草活性，对稗草和反枝苋幼根的生长抑制率分别为50.3%和58.6%。[结论] 菌株QTYC-51具有开发为微生物源除草剂的潜能。
关键词： 黄蜻幼虫 拟盾壳霉属 生物源除草剂 除草活性
Identification and phytotoxic activity of fungus QTYC-51 from the gut of Pantala flavescens larvae
Jin Liping, Zhang Yun, Xu Xiao, Xiao Xiaohui, Zhang Yinglao
College of Chemistry and Life Science, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004, Zhejiang Province, China
Received 11 March 2016; Revised 14 June 2016; Published online 17 August 2016
*Corresponding author: Tel: +86-579-82286419; Fax: +86-579-82282269; E-mail:ylzhang@zjnu.cn
Supported by the National Natural Science Foundation of China (21002092)
Abstract: [Objective] To isolate the fungus with phytotoxic activity from the gut of Pantala flavescens larvae. [Methods] Strain QTYC-51 was identified by morphological observation and 5.8S rDNA-ITS sequence analysis. Petri dish bioassay was used to test the phytotoxic activity of fermentation broth and monomer compounds of strain QTYC-51 on Echinochloa crusgalli and Amaranthus retroflexus. Bioactive components were isolated from ethyl acetate extracts via chromatographic methods, and the structures were determined by mass spectrum and nuclear magnetic resonance analyses.[Results] QTYC-51 was identified as Paraconiothyrium sp.. The fermentation broth had good phytotoxic activity on radical growth of E. crusgalli and A. retroflexus with the inhibition rates of 76.9% and 56.5%, respectively. Five monomer compounds were purified from the fermentation products, including 1,8-dihydroxyanthraquinone, 1-hydroxy-10-methoxy-dibenz[b,e]oxepin-6,11-dione, hydroxyvertixanthone, globosuxanthone and 1,3,6,8-tetrahydroxyanthraquinone. At the concentration of 100 μg/mL, compound globosuxanthone was found to possess obvious phytotoxic effects on radical growth of E. crusgalli and A. retroflexus with the inhibition rates of 94.1% and 79.0%, respectively, which were comparable to that of positive control 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. Compound 1-hydroxy-10-methoxy-dibenz[b,e] oxepin-6,11-dione showed potent phytotoxic activity against E. crusgalli and A. retroflexus with inhibition rates of 50.3% and 58.6%, respectively.[Conclusion] Strain QTYC-51 could be potentially developed as a microbial herbicide.
Key words: Pantala flavescens larvae Paraconiothyrium sp. microbial herbicide phytotoxic activity
稗草和反枝苋是世界性分布的恶性杂草，对农业生产有很大的破坏作用[1-2]。目前人们一般使用化学农药进行杂草防除，但除草剂的频繁使用已造成杂草种群的演变与环境的严重污染[3]，人们迫切需要找寻一种新的天然无污染且具有高效选择性的除草剂来代替原始药剂[4]，生物源除草剂具有资源丰富、毒性小、选择性强、不破坏生态环境等优点，已逐步引起人们的重视[5-6]。当前，新型除草剂的研究主要集中在土壤放线菌和植物病原菌两个方面，对于特殊生境微生物的研究则较少[7]。
昆虫肠道菌是生活在健康昆虫肠道的一类微生物，昆虫种类的多样性、分布地区的复杂性使其体内微生物在生态、代谢特征和生理活性等方面均有一定的特殊性。据报道，有些昆虫肠道菌能够产生一些结构新颖的活性代谢产物[8]，它们可能是新型除草剂的重要来源。本文以1株具有除草活性的黄蜻(Pantala flavescens)幼虫肠道真菌QTYC-51为研究对象，并对其活性成分进行分离鉴定，旨在为开发新型微生物源除草剂奠定一定的基础。
1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 菌株来源：将健康黄蜻(P. flavescens)幼虫(采自浙江省金华市婺城区北山路与北二环路附近)经肠道解剖、涂布研磨、分离等处理后得到菌株QTYC-51。
1.1.2 供试杂草种子：稗草(Echinochloa crusgalli)种子采自浙江师范大学实验稻田，反枝苋(Amaranthus retroflexus)种子购于河北省唐山市北方种子基地。
1.1.3 培养基：麦芽浸汁培养基：生麦芽20 g(煮沸30min，滤去残渣)，蔗糖20 g，蛋白胨1 g，琼脂15-20 g，蒸馏水补足1 L，pH自然。不加琼脂者为相应的液体培养基(蔗糖、蛋白胨、琼脂粉等购自北京奥博星生物技术有限责任公司)。
1.2 QTYC-51菌株的鉴定 形态学鉴定：接种QTYC-51菌株于MEA固体培养基中，28 ℃条件下放入恒温培养箱中培养，每天定时观察菌落生长形态。挑取少量菌落制片，利用显微镜观察菌丝形态和产孢结构等。
分子生物学鉴定：按照生工Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒说明书提取方法，从培养好的QTYC-51新鲜菌体中提取DNA。以QTYC-51菌株的基因组DNA为模板，采用真菌通用引物ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4 (5′-TCCTCCGCTTA TTGATATGC-3′) 对其进行PCR扩增。其中PCR反应程序为：94 ℃ 2 min，94 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，进行35个循环，72 ℃ 10 min，4 ℃保存。PCR产物纯化后进行测序分析，测序由上海生工公司完成。将QTYC-51菌株的核酸序列与GenBank中相关核酸序列进行BLAST比对，之后利用MEGA 5.05软件构建系统发育树，确定菌株的分类地位。
1.2.1 QTYC-51菌株发酵液除草活性测试：QTYC-51菌株在条件为28 ℃、180 r/min的摇床中培养7 d，经纱布过滤后获得发酵液，采用培养皿生物分析法[9]测试菌株发酵液的除草活性。将杂草种子置于培养箱，28 ℃催芽1-2 d，露白后备用。用移液枪取5 mL发酵液，置于铺有滤纸(直径为9 cm)的培养皿中，选取露白的稗草或反枝苋种子放在铺有滤纸的培养皿上，每个培养皿平均放10粒，以蒸馏水为空白对照，2,4-D为阳性对照，重复3次。在温度为28 ℃、相对湿度70%、定时光照(白天12 h，黑夜12 h)的人工气候培养箱中进行培养，4 d后测量种子根长。根生长抑制率按照公式(1)计算。
| ${\rm{根生长抑制率}}/\% = \left( {{\rm{对照平均根长}} - {\rm{处理平均根长}}} \right)/{\rm{对照平均根长}} \times 100$ | (公式(1)) |
2 结果和分析 2.1 QTYC-51菌株的鉴定 在MEA培养基上，QTYC-51菌落生长缓慢(28 ℃下生长8 d，菌落直径为1.2-1.6 cm)，绒毡状，颜色初为白色，数天后转为浅褐色，背面褐色(图 1)。显微镜观察可见：菌丝纤细、无色、具隔膜；分生孢子圆形、单胞、无色。QTYC-51真菌的形态特征与文献[10]中的拟盾壳霉属(Paraconiothyrium sp.)的形态特征基本一致，因此将黄蜻幼虫肠道内生真菌QTYC-51初步鉴定为拟盾壳霉属Paraconiothyrium sp..
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| 图 1. 菌株QTYC-51的菌落与分生孢子形态(400×) Figure 1. The colony and spore morphology of strain QTYC-51 (400×) |
| 图选项 |
QTYC-51菌株经过PCR扩增所得5.8S rDNA-ITS基因片段长度为570 bp。测序结果经BLAST比对，发现QTYC-51的序列与拟盾壳霉属菌(Paraconiothyrium sp.)的相关序列(GenBank登录号：KC510275.1)相似性达98.6%，两者在系统发育树上处于同一分支(图 2)。结合形态特征，将菌株QTYC-51鉴定为拟盾壳霉属菌株(Paraconiothyrium sp.)(GenBank登录号：KX148027)。
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| 图 2. 基于真菌QTYC-51 5.8S rDNA-ITS基因片段序列构建的系统发育树 Figure 2. Neighbour-joining phylogenetic tree of 5.8S rDNA-ITS sequences of QTYC-51. Numbers in bracket represent the sequences accession number in GenBank. The number at each branch points is the percentage supported by bootstrap. Bar, 0.02 sequence divergence. |
| 图选项 |
2.2 QTYC-51菌株的除草活性 QTYC-51菌株发酵液对稗草和反枝苋幼根生长的抑制结果见表 1。发酵液对稗草和反枝苋幼根的生长均有较好的生长抑制作用，抑制率均大于56%，仅比阳性对照2,4-D的抑制效果稍弱。
表 1. 菌株QTYC-51发酵液对稗草和反枝苋幼根生长的抑制效果 Table 1. Inhibitory activity of the fermentation broth of QTYC-51 on radicle growth of E. crusgalli and A. retroflexus
| Item | E. crusgalli | A. retroflexus | ||
| Root length/mm | Inhibiting rate/% | Root length/mm | Inhibiting rate/% | |
| QTYC-51 Fermentation broth | 6.1±0.5 b | 76.9±1.6 b | 8.9±0.5 b | 56.5±6.5 b |
| 2,4-D | 2.1±0.2 c | 92.4±0.6 a | 2.4±0.5 c | 88.1±4.1 a |
| CK | 26.6±0.5 a | / | 20.5±2.2 a | / |
| The data in the table are averages of 10 replicates; CK means blank control; 2,4-D means positive control; the concentration for the test is 100 μg/mL;data are mean±SD. Different letters in the same column indicate significant difference by Duncan’s new multiple range test (P＜0.05). | ||||
表选项
2.3 QTYC-51菌株发酵产物的分离 50 L QTYC-51菌株发酵液经乙酸乙酯萃取、浓缩后获得粗浸膏24.4 g，经硅胶(200-300目)层析分离，二氯甲烷∶甲醇梯度洗脱，得到7个组分(A 100∶0、B 100∶1、C 100∶2、D 100∶4、E 100∶8、F 100∶16、G 100∶32)。经过生物活性测试，发现A组分(二氯甲烷∶甲醇/100∶0)活性最好。对A组分进一步使用硅胶柱层析，用二氯甲烷溶液对其进行洗脱，得到5个小部分(R1-R5)，使用重结晶的方法在前3部分分别获得化合物1、化合物5与化合物3，剩下R5部分经过LH-20葡聚糖凝胶(瑞典Pharmacia Biotech公司)柱色谱层析得到化合物4。B-G组分经过TLC检测，合并相似成份，使用葡聚糖凝胶柱层析法反复分离纯化，获得化合物2。采用质谱和核磁共振谱技术对上述5个化合物的结构进行分析，具体波谱数据如下：
化合物1：ESI-MS: m/z 239.1546 [M-H]-,1H-NMR (CD3Cl) δ 12.06 (2H,s),7.83 (2H,dd,J=7.4,0.8 Hz),7.68 (2H,m),7.30 (2H,dd,J=8.4,0.8 Hz); 13C-NMR (CD3Cl) δ : 193.1,181.7,162.6,137.3,133.6,124.6,120.1,115.9。上述数据与文献报道的1,8-dihydroxyanthraquinone一致[11]，确定该化合物为1,8-dihydroxyanthraquinone。
化合物2：ESI-MS: m/z 293.0407 [M+Na]+,309.0139 [M+K]+,1H-NMR (CD3Cl) δ 12.23 (1H,s),7.77 (1H,dd,J=8.4,7.4 Hz),7.61 (1H,t,J=8.3 Hz),7.55 (1H,m),7.33 (1H,dd,J=7.3,0.8 Hz),6.94 (1H,d,J=8.4 Hz),6.81 (1H,d,J=8.3 Hz),4.03 (3H,s)。上述数据与文献报道的1-hydroxy-10-methoxy-dibenz[b,e]oxepin-6,11-dione数据基本吻合[12]，确定该化合物为1-hydroxy-10-methoxy-dibenz[b,e] oxepin-6,11-dione。
化合物3：ESI-MS: m/z 287.0533 [M+H]+,309.0351 [M+Na]+,1H-NMR (DMSO-d6) δ 12.25 (1H,s),10.49 (1H,s),7.73 (1H,t,J=8.3 Hz),7.65 (1H,d,J=9.1 Hz),7.50 (1H,d,J=9.1 Hz),7.07 (1H,dd,J=8.4,0.7 Hz),6.81 (1H,dd,J=8.2,0.7 Hz),3.86 (3H,s)。以上数据与参考文献所述hydroxyvertixanthone相符[13]，因此，确定该化合物为hydroxyvertixanthone。
化合物4：ESI-MS: m/z 305.0645 [M+H]+,327.0468 [M+Na]+,1H-NMR (DMSO-d6) δ 12.45 (1H,s),7.67 (1H,t,J=8.3 Hz),7.09 (1H,d,J=8.2 Hz),6.83 (1H,d,J=8.0 Hz),6.64 (1H,dd,J=10.0,4.3 Hz),6.51(1H,dd,J=10.0,0.8 Hz),5.86 (1H,d,J=8.0 Hz),4.28 (1H,m),3.60 (3H,s)。13C-NMR (DMSO-d6) δ : 181.1,172.1,160.4,155.3,141.8,136.5,120.2,115.1,111.7,110.7,107.8,75.4,71.9,52.2。上述数据与文献中globosuxanthone数据基本吻合[14]，确定化合物4为globosuxanthone。
化合物5：ESI-MS: m/z 271.1972 [M-H]-,543.4095 [2M-H]-,1H-NMR (DMSO-d6) δ 12.28 (2H ,s),7.27 (3H,d,J=2.4 Hz),6.67 (3H,d,J=2.4 Hz)。测得的数据与参考文献中1,3,6,8-tetrahydroxyanthraquinone相同[11]，确定化合物5为1,3,6,8-tetrahydroxyanthraquinone。
2.4 化合物的除草活性测定 5种化合物除草活性测试结果见表 2。在供试浓度为100 μg/mL时，化合物4对稗草和反枝苋幼根生长有明显的抑制作用，抑制率分别为94.1%和79.0%，与阳性对照2,4-D (对2种杂草的抑制率分别为95.5%和89.1%)的抑制效果相当；化合物2具有较好的除草活性，对稗草和反枝苋幼根的抑制率分别为50.3%和58.6%。其余化合物的除草活性较弱。
表 2. 化合物1–5对稗草和反枝苋幼根生长的抑制效果 Table 2. Inhibitory activity of compounds 1–5 on radicle growth of E. crusgalli and A. retroflexus
| Metabolites | E. crusgalli | A. retroflexus | ||
| Root length/mm | Inhibiting rate/% | Root length/mm | Inhibiting rate/% | |
| 1 | 17.8±2.6 b | 21.7±6.8 c | 13.6±0.2 d | 34.8±2. d |
| 2 | 11.1±1.7 c | 50.3±5.7 b | 8.5±0.4 e | 58.6±5.1 c |
| 3 | 19.2±1.1 b | 15.8±6.9 c | 16.7±0.6 c | 24.8±3.7 e |
| 4 | 1.5±0.6 d | 94.1±1.9 a | 4.5±0.3 f | 79.0±3.0 b |
| 5 | 20.1±1.9 a | 11.8±8.8 d | 18.2±1.7 b | 11.6±3.9 f |
| 2,4-D | 0.9±0.4 d | 95.5±0.0 a | 2.2±0.1 g | 89.1±1.9 a |
| CK | 22.7±1.9 a | / | 20.8±2.1 a | / |
| The data in the table are averages of 10 replicates; CK means blank control; 2,4-D means positive control; the concentration for the test is 100 μg/mL; the concentration of compounds is 100 μg/mL; data are mean±SD. Different letters in the same column indicate significant difference by Duncan’s new multiple range test (P＜0.05). | ||||
表选项
进一步测试了化合物4的除草活性，结果见图 3和图 4。除草活性随着浓度提高而逐渐增强，比同浓度的阳性对照2,4-D的活性稍弱。计算出化合物4对稗草和反枝苋根生长抑制活性的IC50值分别为3.2 μg/mL和10.2 μg/mL。
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| 图 3. 不同浓度化合物4及2,4-D对稗草幼根生长的除草活性 Figure 3. Phytotoxic effects of the compound 4 and 2,4-D on radicle growth of E. crusgalli at different concentration. |
| 图选项 |
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| 图 4. 不同浓度化合物4及2,4-D对反枝苋根生长的除草活性 Figure 4. Phytotoxic effects of the compound 4 and 2,4-D on radicle growth of A. retroflexus at different concentration. |
| 图选项 |
3 讨论 本文的菌株QTYC-51经鉴定属于腔孢纲(Coelomycetes)、球壳孢目(Sphaeropsidales)、球壳孢科(Sphaeropsidaceae)的拟盾壳霉属(Paraconiothyrium)，该属是2004年被描述的新属。有文献表明[15]，拟盾壳霉属菌粗提物具有显著抗氧化与抗恶性肿瘤扩增的特性，同时经酶活性测试实验[16]发现，该属菌能够产生乳糖酸作为受体氧化剂。但对拟盾壳霉属菌活性次级代谢产物的研究较少，本实验对菌株QTYC-51次级代谢产物进行分离，得到5个单体化合物，为了解该属真菌的化学物质多样性奠定了一定的基础。
本研究从蜻蜓幼虫肠道共生菌QTYC-51分离到的化合物2、4均属于近几年刚发现的天然产物，两者均可从海绵共生菌Beauveria bassiana中分离得到，化合物2(1-hydroxy-10-methoxy-dibenz [b,e]oxepin-6,11-dione)有一个特殊的dibenz[b,e] oxepine结构，目前已报道的类似衍生物仅有6种[12]。考虑到化合物2独特的结构，或许通过化学合成生物研究可以得到类似新颖衍生化合物。Wijeratne 等于2006年首次从植物共生真菌Chaetomium globosum中分离得到化合物4[14]。文献报道化合物4具有抑制致病真菌白念球菌和显著抑制肿瘤生长的特点[12, 14]，但未见其它生物活性的报道。本文首次阐明化合物2与4可从昆虫肠道菌中分离得到，且两者具有潜在的除草活性：在供试浓度为100 μg/mL时，化合物2对稗草和反枝苋幼根生长的抑制率均大于50%；化合物4对稗草与反枝苋幼根生长的抑制率分别为94.1%和79.0%，其与阳性对照的除草活性相当。因此，化合物2和4是QTYC-51具有除草活性的物质基础，作为具有除草活性的先导化合物，值得深入研究。但关于化合物4和化合物2的除草机制尚不清楚。另外，菌株QTYC-51的其它活性成分分离鉴定、活性作用机制及大田试验等，还有待更进一步的研究。
参考文献
| [1] | Li HB, Hou SG, Dai GJ, Yu GX, Chen Y, Zhao Q, Fu L, Ma L. Review of the study on interspecific competitive relationship of rice and barnyard grass.Chinese Agricultural Science Bulletin, 2011, 27(15): 259–262(in Chinese).李海波, 侯守贵, 代贵金, 于广星, 陈盈, 赵琦, 付亮, 马亮. 水稻和稗草种间竞争关系研究现状.中国农学通报, 2011, 27(15): 259–262. |
| [2] | Pirzad A, Jamali M, Zareh MA, Shokrani F. Effect of water extract originated from different parts of Russian knapweed (Acroptilon repens L.International Journal of Agriculture:Research and Review,, 2012, 2(5): 589–594. |
| [3] | Zhang CX, Ni HW, Wei SH, Huang HJ, Liu Y, Cui HL, Sui BF, Zhang M, Guo F. Current advances in research on herbicide resistance.Scientia Agricultura Sinica, 2009, 42(4): 1274–1289(in Chinese).张朝贤, 倪汉文, 魏守辉, 黄红娟, 刘延, 崔海兰, 隋标峰, 张猛, 郭峰. 杂草抗药性研究进展.中国农业科学, 2009, 42(4): 1274–1289. |
| [4] | Zhang YL, Kong LC, Jiang DH, Yin CP, Cai QM, Chen Q, Zheng JY. Phytotoxic and antifungal metabolites from Curvularia sp. FH01 isolated from the gut of Atractomorpha sinensis.Bioresource Technology, 2011, 102(3): 3575–3577DOI:10.1016/j.biortech.2010.10.028. |
| [5] | Zhang JP, Duan GF, Zhou YJ, Yu LQ. Fungal phytotoxins for weed management.Allelopathy Journal, 2011, 27(1): 1–13. |
| [6] | Zhang YL, Ge HM, Li F, Song YC, Tan RX. New phytotoxic metabolites from Pestalotiopsis sp. HC02, a fungus residing in Chondracris rosee gut.Chemistry and Biodiversity, 2008, 5(11): 2402–2407DOI:10.1002/cbdv.v5:11. |
| [7] | Zhang YL, Li S, Jiang DH, Kong LC, Zhang PH, Xu JD. Antifungal activities of metabolites produced by a termite-associated Streptomyces canus BYB02.Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013, 61(7): 1521–1524DOI:10.1021/jf305210u. |
| [8] | Zhang YL, Zhang J, Jiang N, Lu YH, Wang L, Xu SH, Wang W, Zhang GF, Xu Q, Ge HM, Ma J, Song YC, Tan RX. Immunosuppressive polyketides from mantis-associated Daldinia eschscholzii.Journal of the American Chemical Society, 2011, 133(15): 5931–5940DOI:10.1021/ja110932p. |
| [9] | Li S, Shao MW, Lu YH, Kong LC, Jiang DH, Zhang YL. Phytotoxic and antibacterial metabolites from Fusarium proliferatum ZS07 isolated from the gut of long-horned grasshoppers.Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2014, 62(36): 8997–9001DOI:10.1021/jf502484n. |
| [10] | 吴雪梅. 乌伊岭湿地水生真菌多样性的研究. 东北林业大学硕士学位论文, 2010. http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10225-2010242495.htm |
| [11] | Qiao LR, He LY, Li YL, He Y, Gao JM. Study on anthraquinone metabolites from an endophytic fungus Ir88 isolated from Maytenus hookeri.Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica, 2008, 28(6): 1258–1260. |
| [12] | Yamazaki H, Rotinsulu H, Kaneko T, Murakami K, Fujiwara H, Ukai K, Namikoshi M. A new dibenz[b, e]oxepine derivative, 1-Hydroxy-10-methoxy-dibenz[b, e]oxepin-6, 11-dione, from a marine-derived fungus, Beauveria bassiana TPU942.Marine Drugs, 2012, 10(12): 2691–2697DOI:10.3390/md10122691. |
| [13] | Ayer WA, Browne LM, Lin G. Metabolites of Leptographium wageneri, the causative agent of black stain root disease of conifers.Journal of Natural Products, 1989, 52(1): 119–129DOI:10.1021/np50061a015. |
| [14] | Wijeratne EMK, Turbyville TJ, Fritz A, Whitesell L, Gunatilaka AAL. A new dihydroxanthenone from a plant-associated strain of the fungus Chaetomium globosum demonstrates anticancer activity.Bioorganic and Medicinal Chemistry, 2006, 14(23): 7917–7923DOI:10.1016/j.bmc.2006.07.048. |
| [15] | de Carvalho PLN, Amaral PO, Ruiz ALTG, de Alencar SM, Pfenning LH, de Carvalho JE, Rosalen PL, Ikegaki M. Paraconiothyrium sp. P83F4/1:antioxidant and antiproliferative activities of endophytic fungus associated with Rheedia brasiliensis plant.International Journal of Biotechnology for Wellness Industries, 2012, 1(3): 172–176. |
| [16] | Kiryu T, Nakano H, Kiso T, Murakami H. Purification and characterization of a carbohydrate:acceptor oxidoreductase from Paraconiothyrium sp. that produces lactobionic acid efficiently.Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2008, 72(3): 833–841DOI:10.1271/bbb.70701. |
