摘要： 【目的】本研究旨在通过克隆表达管氏肿腿蜂Scleroderma guani毒液丝氨酸蛋白酶同源物(serine protease homologue, SPH)基因SgSPH，探索其编码的毒液蛋白对寄主血淋巴酚氧化酶活性的影响。【方法】利用RTPCR技术克隆管氏肿腿蜂毒液SgSPH基因的开放阅读框(ORF)，采用生物信息学软件分析其基因序列结构特征；采用qPCR技术检测该基因在不同发育阶段(卵、低龄幼虫、高龄幼虫、老熟幼虫、吐丝幼虫、黄茧蛹、黑茧蛹和羽化后1-5 d成虫)和雌成虫不同组织(头部、胸部、去除毒液器官的腹部和毒液器官)中的相对表达量；利用载体pSUMOMut对该基因进行原核表达，用镍亲和层析柱纯化表达的重组蛋白，采用SDS-PAGE和Western blot对获得的重组蛋白进行鉴定；用酶活性测定方法，分析SgSPH重组蛋白对寄主黄粉虫Tenebrio molitor蛹血淋巴酚氧化酶活性的抑制作用。【结果】克隆获得管氏肿腿蜂毒液SgSPH基因(GenBank登录号: MT920663)的ORF，长798 bp，编码265个氨基酸，其中第1-20位氨基酸为信号肽，理论分子量为30.53 kD，等电点为9.59。多序列比对分析表明，SgSPH与其他寄生蜂毒液丝氨酸蛋白酶和SPH具有较低的氨基酸序列一致性(9%~17%)，且缺乏保守的催化三联体。qPCR分析表明，SgSPH基因在管氏肿腿蜂成虫阶段和毒液器官中高表达。SDS-PAGE电泳和Western-blot检测发现，成功表达SgSPH重组蛋白，并纯化得到了高纯度SgSPH重组蛋白。酶活性检测结果显示，SgSPH能抑制寄主黄粉虫蛹血淋巴的酚氧化酶活性。【结论】结果提示管氏肿腿蜂毒液SgSPH具有干扰寄主酚氧化酶级联反应的功能。
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管氏肿腿蜂毒液丝氨酸蛋白酶同源物SgSPH对寄主血淋巴酚氧化酶活性的影响
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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