摘要： 【目的】本研究旨在明确中华蜜蜂Apis cerana cerana半乳糖凝集素(galectin)的功能及其与病毒的相互作用。【方法】提取中华蜜蜂的总RNA，利用RT-PCR技术获得Galectin基因，然后利用生物信息学软件对基因序列及其推导氨基酸序列和结构特征进行分析；再依据大肠杆菌Escherichia coli密码子的偏嗜性对该基因密码子进行优化、原核表达，并制备重组蛋白；最后，通过Far-western blotting技术检测纯化的重组蛋白与纯化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus, CSBV)、慢性蜜蜂麻痹病毒（Chronic bee paralysis virus, CBPV）和残翅病毒（Deformed wing virus, DWV）的结合情况。【结果】从中华蜜蜂中克隆到Galectin基因，并将其命名为AcGalectin (GenBank登录号: MG557559), 其cDNA全长为1 473 bp。AcGalectin空间结构比较稳定，包含一个半乳糖识别结构域。系统进化树表明，Galectin明显分为两簇，膜翅目蜜蜂科昆虫的Galectin形成一个簇，而其他昆虫Galectin形成另一簇。经密码子优化后的AcGalectin基因能够在大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中高效表达。纯化的重组AcGalectin蛋白可与CSBV和CBPV结合，但不与DWV结合。【结论】结果表明AcGalectin与蜂病毒CSBV和CBPV有结合作用。本研究为AcGalectin在CSBV和CBPV感染过程中的功能研究奠定了基础。
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中华蜜蜂半乳糖凝集素AcGalectin的表达、纯化及性质分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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