CRISPR/Cas9介导柑橘CsLOB1基因启动子的多位点编辑
邹修平1，范 迪2，彭爱红1，何永睿1，许兰珍1，雷天刚1，姚利晓1，李 强1，罗克明2,*，陈善春1,*1西南大学柑桔研究所，重庆 400712；2西南大学生命科学学院，重庆 400715
出版日期:2019-02-25发布日期:2019-02-25基金资助:南方山地园艺学教育部重点实验室开放课题项目；国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-26）；重庆市自然科学基金项目（cstc2017jcyjBX0020）CRISPR/Cas9-mediated Editing of Multiple Sites in the Citrus CsLOB1 Promoter
ZOU Xiuping1，FAN Di2，PENG Aihong1，HE Yongrui1，XU Lanzhen1，LEI Tiangang1，YAO Lixiao1，LI Qiang1，LUO Keming2,*，and CHEN Shanchun1,*1Citrus Research Institute，Southwest University，Chongqing 400712，China；2School of Life Sciences，Southwest University，Chongqing 400715，China
Online:2019-02-25Published:2019-02-25摘要/Abstract
摘要： 为了获得CsLOB1启动子较大片段删除的突变体，利用CRISPR/Cas9技术对CsLOB1启动子进行多位点编辑。通过在CsLOB1启动子的EBEPthA4区域及其上、下游设计不同的靶标位点，构建了2个植物表达载体pCas9CsLOB1:2sites和pCas9CsLOB1:3sites，分别对CsLOB1启动子同时进行2个位点和3个位点的编辑。测序结果表明pCas9CsLOB1:2sites和pCas9CsLOB1:3sites的基因编辑效率分别为64.7%和80.0%，突变体植株在2个sgRNA之间发生了DNA片段的删除。进一步的分析发现，不同的sgRNA具有不同的突变效率，其差异是由于不同的sgRNA对CsLOB1-识别和结合能力的差异造成的。本结果表明对CsLOB1启动子进行多位点编辑可以获得删除较大DNA片段的突变体。
中图分类号:
S 666
引用本文
邹修平1，范 迪2，彭爱红1，何永睿1，许兰珍1，雷天刚1，姚利晓1，李 强1，罗克明2,*，陈善春1,*. CRISPR/Cas9介导柑橘CsLOB1基因启动子的多位点编辑[J]. 园艺学报, 2019, 46(2): 337-344.
ZOU Xiuping1，FAN Di2，PENG Aihong1，HE Yongrui1，XU Lanzhen1，LEI Tiangang1，YAO Lixiao1，LI Qiang1，LUO Keming2,*，and CHEN Shanchun1,*. CRISPR/Cas9-mediated Editing of Multiple Sites in the Citrus CsLOB1 Promoter[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2019, 46(2): 337-344.
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