删除或更新信息,请邮件至freekaoyan#163.com(#换成@)

血清肌钙蛋白I液相色谱串联质谱法建立及优化

本站小编 Free考研考试/2022-02-14

摘要/Abstract



建立并优化了液相色谱串联质谱法定量血清肌钙蛋白I.免疫磁珠富集血清肌钙蛋白I,经变性、还原、乙酰化、胰酶消化、固相萃取纯化,采用SymmetryShieldC18柱分离,以含0.1%甲酸水溶液和含0.1%的甲酸乙腈溶液为流动相,梯度分离目标肽段,流速0.2 mL/min,温度35℃;使用电喷雾正离子模式扫描,在多反应监测模式下进行测定,目标肽段出峰时间约为4.95 min;方法的最低检测限为2.5 ng/mL,定量限为8.32 ng/mL,在(10~600)ng/mL范围内线性良好,相关系数为0.99;标准物质SRM2921偏倚为-7.94%~-6.49%;低、中、高样本总不精密度分别为6.43%、3.18%和2.75%;携带污染率为-0.47%~0.04%.本方法选择性高、重复性和准确度好、携带污染小,为进一步研究血清cTnI参考方法建立提供依据.
关键词: 液相色谱串联质谱, 肌钙蛋白I, 肽段, 定量, 免疫磁珠
Cardiac troponin I (cTnI) is one of the most popular biomarkers for the diagnosis of acute myocardial injury (AMI) in patients. In this study, a novel method was developed and optimized for quantification of cTnI in human serum by immunoaffinity enrichment combining isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry. cTnI was first captured from human serum with immunomagnetic beads conjugated with the monoclonal antibody, and then enzymatically hydrolyzed into peptides after a series of operation, including denaturation, reduction, acetylation, digestion and purification. Subsequently, enzymatic peptides were separated by passing through Symmetry Shield C18 column at a speed of 0.2 mL/min with 0.1% acid acetonitrile solution and 0.1% acid aqueous solution as mobile phases under gradient elution. A specific peptide, NITEIADLTQK, was selected and quantified. The qualitative analysis was achieved by three ion transitions under multiple reaction monitoring (MRM) when the isotopically labeled peptide, NITEIAD[(13C6,15N)L]TQK, was used as a reference. After the optimal conditional experiment, results showed that the surrogate peptide was separated out well at about 4.95 min with little interference. Ranging from 10 ng/mL to 600 ng/mL, a good linearity was shown with correlation coefficients all above 0.99. The limit of detection (LOD) and the limit of quantification (LOQ) were estimated to be 2.5 ng/mL, 8.32 ng/mL, respectively. This method also provided good accuracy (relative bias of three concentrations diluted from SRM2921 were between -7.94% and -6.49%) and repeatability (total relative standard deviations of three concentration were 6.43%, 3.18% and 2.75%, respectively). Carry-over rates were estimated between -0.47% and 0.04%. The novel assay successfully determined five specimens from AMI patients with concentrations from 16.38 ng/mL to 557.53 ng/mL. Our results demonstrate that this method can be applied for determination of serum cTnI in AMI patients with high selectivity, low carry-over rates, good repeatability and good accuracy, which helps to establish candidate reference measurement procedure of serum cTnI.
Key words: liquid chromatography tandem mass spectrometry, troponin I, surrogate peptides, quantification, immunomagnetic beads


PDF全文下载地址:

点我下载PDF
相关话题/免疫 污染 物质 优化 血清

  • 领限时大额优惠券,享本站正版考研考试资料!
    大额优惠券
    优惠券领取后72小时内有效,10万种最新考研考试考证类电子打印资料任你选。涵盖全国500余所院校考研专业课、200多种职业资格考试、1100多种经典教材,产品类型包含电子书、题库、全套资料以及视频,无论您是考研复习、考证刷题,还是考前冲刺等,不同类型的产品可满足您学习上的不同需求。 ...
    本站小编 Free壹佰分学习网 2022-09-19
  • 上海硅酸盐所在碳电极钙钛矿太阳能电池界面优化和效率提升研究中取得系列进展
    太阳能是一种取之不尽、用之不竭的清洁能源。太阳能电池可以实现光能到电能的高效转换,并且不造成环境污染和碳排放。发展高效率太阳能电池有助于我国实现“碳达峰碳中和”的远景目标。新一代的钙钛矿太阳能电池具有效率高、缺陷容忍度高、可溶液法制备、成本低等优点,在单结和多结太阳能电池中都体现了优异的光电转换效率 ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • 上海硅酸盐所举办陶瓷非物质文化遗产传承科技联盟成立仪式暨研讨会
    11月9日,陶瓷非物质文化遗产传承科技联盟(以下简称“联盟”)成立仪式暨研讨会在中国科学院上海硅酸盐研究所举行。上海市文化和旅游局信息科技处处长张毅,上海硅酸盐所党委书记、副所长董显林,副所长吴成铁,古陶瓷多元信息提取技术及应用文化和旅游部重点实验室主任罗宏杰、副主任李伟东,以及来自科研院所、高校、 ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • 上海硅酸盐所在镥铝石榴石基闪烁陶瓷性能优化研究方面取得系列进展
    闪烁体能够将高能辐射(高速粒子,X射线,γ射线)转换成可以直接探测的紫外或可见光。作为闪烁探测器中的关键部件,闪烁材料广泛应用于高能物理、医学成像、国土安全等众多领域。其中石榴石闪烁体是近年来开发的新型闪烁体,其具有较高的密度,稳定的物理化学性能。Ce掺杂的石榴石闪烁体具有高光输出以及纳秒级快衰减的 ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • 上海硅酸盐所承办第22期交叉学科学术沙龙“大气、水、土壤污染成因与治理”
    7月13日,由中国科学院上海交叉学科研究中心主办,中国科学院上海硅酸盐研究所承办的第22期交叉学科学术沙龙“大气、水、土壤污染成因与治理”在中科院上海交叉学科研究中心召开。上海交叉学科研究中心主管薛芳,上海硅酸盐所所长助理孙静、科技综合处副处长刘军,以及来自中科院化学研究所、地球环境研究所、上海硅酸 ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • 基于昆虫nAChR选择性的新型低蜂毒苯乙酰腙类似物的筛选和优化
    摘要/Abstract近年来,越来越多的新烟碱类杀虫剂由于对蜜蜂存在的安全问题陆续被欧盟和美国禁用.本研究通过虚拟筛选结合生物活性评价的双重策略实现骨架跃迁,发现苯乙酰腙类化合物VS-04对大豆蚜表现出较好的杀虫活性,且化合物VS-04和蜜蜂烟碱型乙酰胆碱受体(nAChRs)的作用模式与传统的吡虫啉 ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • 李佳/贺晓鹏团队在生物活性物质精准识别与靶向治疗研究中取得系列研究进展
    近日,中国科学院上海药物研究所李佳研究员团队与华东理工大学贺晓鹏教授团队在生物活性物种的精准检测与靶向治疗等生物医学应用领域取得了阶段性研究进展。相关成果相继在线发表于高水平期刊《化学科学》(ChemicalScience;IF9.556)、《配位化学评论》(CoordinationChemistr ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • 用于人血清白蛋白检测的有机荧光分子探针的研究进展
    摘要/Abstract人血清白蛋白作为血浆中最丰富的一种蛋白质,在生理过程中有着重要的作用,例如维持血液渗透压、运载小分子配体等.白蛋白在生物样本中的含量能够反映出样本的健康状况,因此标定白蛋白含量在临床疾病诊断中有着很大的用途.随着荧光探针技术的发展,近几年特异性检测血清白蛋白的荧光探针涌现而出. ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • 多组分反应:丰富生物质基平台分子高值化转化路线的新策略
    摘要/Abstract以廉价易得的可再生生物质基平台化合物为原料,通过多组分一锅反应合成结构复杂的产物已成为生物质高值化转化的重要手段之一.生物质基平台分子的多样性和多官能性为多组分反应的构建提供了传统方法难以提供的物质基础.介绍了以构建多组分反应的方式实现生物质基平台化 ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • N-苯基吡唑脲类FAK II型抑制剂的结构优化与构效关系研究
    摘要/Abstract以Ⅱ型黏着斑激酶(FAK)抑制剂化合物2为先导化合物,结合FAK变构疏水腔的结构特征,对其尾部结构N-苯基吡唑进行了结构改造和优化,共获得9个目标化合物,其中4个化合物保持了与先导化合物同水平的酶抑制活性,N1-(4-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)苯基)-N3-(1-(4-乙 ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14
  • 基于二硫代氨基甲酸酯活性亚结构的先导优化及其抗增殖活性
    摘要/Abstract设计了一系列含喹唑啉酮、苯并噁嗪酮和香豆素单元的二硫代氨基甲酸酯(DTC)衍生物.基于收率高、反应时间短、条件温和易于后处理的三组分一锅法反应,可高效构建目标化合物库.采用四甲基偶氮唑盐(MTT法)测试了目标化合物对人肝癌细胞HCCLM-7、人宫颈癌细胞Hela、人乳腺癌细胞M ...
    本站小编 Free考研考试 2022-02-14