项目名称：固氮酶基因导入大豆根瘤菌的研究

项目级别：院青年重点项目（院级）

起止时间：2015.01-2016.10

参加人员：甄涛

项目介绍：本课题根据GenBank中已登录的基因组序列，通过与USDA110同源性比对后设计HW-05特异性引物，克隆nifDK的上下游片段分别为nifDK-AB和nifDK-CD。通过融合PCR的方法，以nifDK-AB和nifDK-CD为模板克隆nifDK-AD，与载体pK18mobsacB连接后，通过KmR和10%蔗糖压力筛选，两次同源重组后PCR确定重组子，将HH103的nifDK基因克隆后与载体pBBR1MCS-2连接后转入HW-05的基因组中，再经PCR验证后确定已将HH103中的nifDK基因已成功替换HW-05中的nifDK基因。本研究通过基因敲除的方法建立了一种从快生型根瘤菌转入慢生型根瘤菌的方法，为今后的对其它有效基因的研究奠定了理论基础。