摘要： 【目的】氨肽酶N(aminopeptidase N, APN)是昆虫消化系统中重要的蛋白酶。本研究旨在对在褐飞虱Nilaparvata lugens中肠中两个具有较高转录水平的apn基因(nlapn1和nlapn4)在中肠上皮细胞上的表达及其蛋白功能特性进行鉴定与分析。【方法】利用最大似然法进行褐飞虱NLAPN1和NLAPN4的系统进化分析；利用Western blot分析NLAPN1及NLAPN4在中肠刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles, BBMVs)中的定位；利用LC-ESI-MS/MS技术对Western blot定位的NLAPN1及NLAPN4进行鉴定。在果蝇Drosophila S2细胞内分别表达两个NLAPN蛋白，并利用Western blot及免疫荧光定位技术对NLAPN1与NLAPN4进行S2细胞内的定位；分别以L-亮氨酸对硝基苯胺(leucine-p-NA)、L-丙氨酸4-硝基苯胺盐酸盐(Ala-p-NA)、L-甲硫氨酸对硝基苯胺盐酸盐(Met-p-NA)和L-赖氨酸对硝基苯胺二氢溴酸盐(Lys-p-NA)为底物测定NLAPN1和NLAPN4的酶活性。【结果】系统进化树分析结果显示，褐飞虱NLAPN1及NLAPN4与其他半翅目昆虫肠道中高表达的APN分在了同一分支中。Western blot及LC-ESI-MS/MS质谱分析结果证明NLAPN1与NLAPN4均存在于褐飞虱中肠刷状缘膜囊泡中，分子量约为160 kD。Western blot及免疫荧光定位结果显示，两个NLAPN蛋白均位于S2细胞膜上，而C端缺失糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol, GPI)锚定位点的NLAPN4lackG蛋白分布在细胞质中。酶活性测定结果显示,以L-丙氨酸4-硝基苯胺盐酸盐及L-赖氨酸对硝基苯胺二氢溴酸盐为底物时NLAPN1和NLAPN4都具有一定的酶活性，而以L-亮氨酸对硝基苯胺为底物时NLAPN1有极高的酶活性(＞60 U/mg)。【结论】NLAPN1与NLAPN4是褐飞虱中肠上皮细胞膜上高表达的两个膜结合APN蛋白，且都通过C端的GPI锚定附着在细胞膜上。NLAPN1与NLAPN4与鳞翅目、鞘翅目、双翅目等昆虫中肠膜结合APN有着近似的蛋白结构与酶学特性。膜结合APN在褐飞虱中肠中的生理生化功能及其与外源病原物的互作机制还有待进一步深入研究。
PDF全文下载地址:
http://www.insect.org.cn/CN/article/downloadArticleFile.do?attachType=PDF&id=6711
删除或更新信息，请邮件至freekaoyan#163.com(#换成@)
褐飞虱中肠两种氨肽酶N的鉴定及蛋白特性分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
相关话题/昆虫 鉴定 系统 技术 免疫
领限时大额优惠券,享本站正版考研考试资料!
优惠券领取后72小时内有效，10万种最新考研考试考证类电子打印资料任你选。涵盖全国500余所院校考研专业课、200多种职业资格考试、1100多种经典教材，产品类型包含电子书、题库、全套资料以及视频，无论您是考研复习、考证刷题，还是考前冲刺等，不同类型的产品可满足您学习上的不同需求。 ...考试优惠券 本站小编 Free壹佰分学习网 2022-09-19美国白蛾热激蛋白70基因的鉴定及功能分析
摘要：【目的】探究热激蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)基因在美国白蛾Hyphantriacunea抵御高温胁迫过程中的作用，为揭示美国白蛾的扩散机制以及预测潜在分布区提供理论支撑。【方法】利用PCR技术克隆美国白蛾HSP70基因，并进行生物信息学分析；利用qPCR技术检测 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03基于四臂嗅觉仪内轨迹跟踪的 昆虫嗅觉行为分析体系
摘要：【目的】结合四臂嗅觉仪与轨迹跟踪分析系统，通过分析不同试验条件下黑腹果蝇Drosophilamelanogaster的嗅觉行为，建立适合于果蝇等小型昆虫的嗅觉行为实验技术体系。【方法】采用EthovisionXT软件追踪黑腹果蝇在四臂嗅觉仪内的活动轨迹，分析各区域内的累计停留时长、运动速度；同 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03昆虫钠离子通道的研究进展
摘要：昆虫只有一个或两个电压门控钠离子通道α亚基基因，但两种转录后修饰(选择性剪切和RNA编辑)实现了昆虫钠离子通道的功能多样性。昆虫β辅助亚基TipE和TEH1-4在钠离子通道表达和调控中也起着重要作用。电压门控钠离子通道在动作电位的产生和传递中至关重要，是多种天然和人工合成神经毒素及杀虫剂的作用 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03基于沟眶象属两近缘种不同虫态转录组的气味受体基因鉴定及表达分析
摘要：【目的】基于沟眶象属Eucryptorrhynchus两近缘种沟眶象E.scrobiculatus和臭椿沟眶象E.brandti不同虫态的转录组数据进行气味受体(odorantreceptor,OR)基因的鉴定及表达特征分析，补充两种象甲的气味受体信息，为之后的功能研究提供理论依据。【方法】从 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03有瓣蝇类分类、系统发育及演化
摘要：有瓣蝇类(Calyptratae)隶属于昆虫纲(Insecta)四大超适应辐射类群之一的双翅目(Diptera)，占双翅目已知物种多样性的近20%。有瓣蝇类分布广泛，生物学习性极为多样，在维系生态系统稳定中发挥着重要作用，是媒介、法医、传粉和天敌昆虫学研究领域的热点类群，也是探究双翅目系统演化 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03微生物对昆虫行为的影响研究进展
摘要：在漫长的进化过程中，微生物与昆虫形成了多种形式的互作关系。微生物的广泛分布为与昆虫接触并影响昆虫的行为提供了背景条件。为了深入探究微生物影响昆虫行为的现象和机制，本文综述了微生物影响昆虫行为方面的研究进展。微生物通过产生可被昆虫识别的化学信号物质、参与昆虫或寄主植物信息化合物的合成等方式可影响 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03利用CRISPR/Cas9系统检测果蝇细胞中组蛋白甲基化修饰对20E信号传导的调控
摘要：【目的】利用CRISPR/Cas9基因敲除系统在黑腹果蝇Drosophilamelanogaster细胞中筛选并检测组蛋白甲基化修饰对蜕皮激素20羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)信号传导的调控。【方法】通过Flybase网站分析并总结黑腹果蝇组蛋白甲基转移酶及其修饰 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03山西翅果油树上三种重要鳞翅目害虫的形态 和分子鉴定及生活史观察
摘要：【目的】明确山西翅果油树Elaeagnusmollis上发生危害的3种鳞翅目害虫形态鉴定特征及生活史特性，并基于mtDNACOI基因DNA条形码对这3个种进行快速物种识别鉴定。【方法】通过观察山西翅果油树上3种鳞翅目害虫成虫外部形态和解剖拍照雌、雄性外生殖器特征，利用PCR扩增对待测样本COI ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03荔枝蝽生物学及防治技术的研究进展(英文)
摘要：荔枝蝽Tessaratomapapillosa是荔枝和龙眼生产中的重要害虫，在中国南方及东南亚地区危害严重。该虫以若虫及成虫吸食寄主植物的嫩芽、嫩梢、花穗和幼果，成虫和3龄以上若虫是传播龙眼鬼帚病病原体的传病介体昆虫。本文综述了近60年来国内荔枝蝽的研究情况，旨在为广大科研工作者提供更详尽的荔 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03农业昆虫气味受体功能研究进展
摘要：昆虫主要依靠嗅觉系统寻找食物、发现配偶、控制交配、选择产卵地、逃避天敌等，因此嗅觉系统对昆虫的繁殖和生存至关重要。气味受体(odorantreceptor,OR)是嗅觉系统中的关键成分之一，可被信息化合物激活引发特定行为产生。随着测序技术的发展，大量的农业昆虫的基因组和转录组被测序，从测序数据 ...中科院动物研究所 本站小编 Free考研考试 2022-01-03
