摘要： 【目的】本研究旨在克隆并鉴定松墨天牛Monochamus alternatus内源漆酶基因MaLac1，分析其在松墨天牛不同发育阶段的表达水平，为进一步明确MaLac1功能提供依据。【方法】基于松墨天牛肠道转录组测序数据，通过RACE克隆松墨天牛MaLac1基因的全长cDNA序列，并对其进行生物信息学分析；将该基因与pET-32a载体链接构建表达载体pET-MaLac1，导入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta (DE3)使其表达；使用qPCR检测MaLac1基因在松墨天牛不同发育阶段(低龄幼虫、老熟幼虫、蛹、雌成虫和雄成虫)肠道中的表达差异。【结果】克隆获得松墨天牛MaLac1的cDNA全长序列(GenBank登录号: KY073340)。MaLac1开放阅读框全长2 067 bp，编码一个含688个氨基酸的蛋白质，预测分子量为78.34 kD，等电点为5.30。SignalP 4.1 Server预测MaLac1在N端包含一个15个氨基酸的信号肽。序列比对分析表明，MaLac1具有典型的昆虫漆酶基因特征，与赤拟谷盗Tribolium castaneum漆酶基因的氨基酸序列一致性达93%。SDS-PAGE检测发现IPTG诱导表达了一条大约78 kD的特异蛋白条带，与推测大小一致。qPCR结果显示，MaLac1在不同发育阶段的松墨天牛肠道中均有表达，其中，在雌成虫肠道中表达量最高，在雄成虫肠道中的次之，在幼虫肠道中的最低。【结论】MaLac1在松墨天牛成虫中表达量显著高于其在幼虫中的，这一结果可能与幼虫和成虫的取食习性差异相关。MaLac1在松墨天牛体内的功能还有待进一步研究。
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松墨天牛漆酶基因MaLac1的克隆、原核表达及表达谱分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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