摘要： 【目的】本研究旨在建立TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR)技术，快速检测单头烟粉虱Bemisia tabaci体内的番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus, ToCV)。【方法】根据 ToCV外壳蛋白保守序列设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针，建立了TaqMan RT-qPCR方法；与常规PCR检测进行比较，检测该方法的灵敏度与特异性；并应用该方法对单头烟粉虱成虫体内ToCV进行了快速检测。【结果】本研究构建的TaqMan RT-qPCR检测ToCV的标准曲线，其循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系，扩增效率为98%。该方法对ToCV的最低检测浓度为8.3×10 copies/μL，灵敏度是常规RT-PCR的1 000倍。该方法与田间番茄两种重要病毒番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)和番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)检测无交叉反应。单头烟粉虱成虫ToCV检测结果表明，温室内ToCV侵染植株上烟粉虱携毒率为100%，田间烟粉虱的携毒率为30%。【结论】本研究建立的TaqMan RT-qPCR检测方法，可快速有效检测单头烟粉虱体内ToCV携毒情况，为该病毒病的防控提供了技术支撑。
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番茄褪绿病毒TaqMan荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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