摘要： 【目的】前期发现水稻条纹病毒(rice stripe virus, RSV)可与介体灰飞虱Laodelphax striatellus体内的HiPV病毒(Himetobi P virus, HiPV)互作。本研究旨在制备HiPV外壳蛋白VP1的多克隆抗体，并评估其在HiPV病毒检测中的可用性，以为深入研究HiPV-RSV和HiPV-灰飞虱的互作机制提供技术支持。【方法】以RT-PCR方法从灰飞虱成虫体内扩增HiPV主要外壳蛋白基因VP1，然后将VP1基因亚克隆至原核表达载体pET-32a中，构建表达载体pET-VP1。将重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)，经IPTG诱导、Ni2+-NTA亲和层析纯化，获得重组蛋白，免疫新西兰大白兔，制备抗体。【结果】从灰飞虱体内克隆到774 bp的HiPV外壳蛋白基因VP1，经原核表达、纯化，获得分子量约47.5 kD的融合蛋白，免疫新西兰大白兔后获得VP1多克隆抗体。该抗体间接ELISA效价达1∶819 200，与HiPV外壳蛋白VP1有特异性反应，而与灰飞虱蛋白无交叉反应。利用该多克隆抗体建立了检测单头灰飞虱成虫体内HiPV的Western blot和免疫捕获RT-PCR方法，检测结果显示HiPV在携带和不携带RSV的灰飞虱高亲和性群体内均广泛存在。【结论】利用制备的HiPV的VP1多克隆抗体可特异性检测灰飞虱体内HiPV。本研究为HiPV病毒的快速检测以及HiPV-RSV互作、HiPV-灰飞虱互作研究提供了技术支持。
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灰飞虱内生病毒HiPV外壳蛋白VP1多克隆抗体的制备及在病毒检测中的应用
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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