摘要： 【目的】旨在研究光滑鳖甲Anatolica polita肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins, PGRPs)基因ApPGRP表达模式及其对下游免疫相关基因的表达调控，以及重组蛋白ApPGRP与细菌的结合能力。【方法】构建原核表达载体pET-28a-ApPGRP，转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)，诱导表达并纯化重组蛋白His-ApPGRP，分别测定其与金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和肽聚糖(peptidoglycan, PGN)的结合能力。金黄色葡萄球菌S. aureus刺激后，利用qRT-PCR检测光滑鳖甲6龄幼虫体内ApPGRP、抗菌肽基因ApAttacin2和ApAttacin1、防御素基因ApDefensin、丝氨酸蛋白酶基因ApSP和丝氨酸蛋白酶抑制剂基因ApSerpin等免疫相关基因的表达水平；采用RNAi技术沉默光滑鳖甲6龄幼虫体内ApPGRP基因的表达，并利用qRT-PCR分别检测RNAi处理以及RNAi后再用S. aureus刺激时幼虫体内上述基因的表达水平变化。【结果】通过原核表达获得了重组蛋白His-ApPGRP，其具有结合金黄色葡萄球菌和肽聚糖的能力。注射金黄色葡萄球菌后，检测的光滑鳖甲6龄幼虫免疫相关基因(ApSP除外)的表达都显著上调；RNAi沉默光滑鳖甲6龄幼虫ApPGRP后，其他免疫相关基因表达量均显著降低，其响应金黄色葡萄球菌刺激后的表达量也显著低于对照组。【结论】这些结果表明，ApPGRP在光滑鳖甲免疫防御中起着识别外源微生物，激活信号通路并调控抗菌肽表达的作用。
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光滑鳖甲肽聚糖识别蛋白ApPGRP的表达与功能分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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