摘要： 【目的】本研究旨在优化Grossowicz氧肟酸比色法测定粘虫Mythimna separata谷氨酰胺转胺酶(MsTGase)活力的组合条件，以MsTGase酶活力为依据分析其在不同龄期幼虫体内的分布规律。【方法】取4龄粘虫幼虫，通过组织匀浆和沉析纯化制备MsTGase，采用Grossowicz比色法测定MsTGase酶活力，并对Grossowicz比色法的多重实验因素进行正交优化，进一步结合差速离心法分析不同龄期幼虫体内和亚细胞组分(细胞核和细胞碎片,线粒体,微粒体以及胞质溶胶)中MsTGase酶活力。【结果】结果表明，酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度及钙离子浓度等实验因素都对MsTGase酶活力测定结果产生显著影响，其影响大小顺序为：酶浓度>温度>pH>底物浓度>Ca2+浓度。MsTGase酶比活力测定的最优化条件：酶浓度20 mg/mL、底物浓度0.04 mol/L、反应体系pH值6.5、测定温度37℃，不添加钙离子。在1-5龄幼虫中以4龄幼虫的MsTGase酶活力最高，其比活力也显著高于其他龄期的，且在1-5龄幼虫胞质溶胶中MsTGase酶活力分别占各亚细胞组分酶活力总和的39%, 25%, 48%, 60%和61%。【结论】所获得的最优化条件适用于粘虫MsTGase酶活力测定。MsTGase在粘虫体内呈显著的龄期表达特征和亚细胞分布规律。
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粘虫谷氨酰胺转胺酶(MsTGase) 活力测定条件的正交优化及其在幼虫体内的分布
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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