细菌调节小RNA通常与靶mRNA结合，影响翻译和mRNA降解过程. 了解细菌小RNA的定量和定位信息，将有助于揭示细菌转录后水平的调控机制. 小RNA SgrS通过抑制ptsG mRNA翻译起始，参与细菌磷酸葡萄糖代谢的应激过程. 本研究应用单分子荧光原位杂交（smFISH）方法和超分辨显微技术可视化定位大肠杆菌细胞内小RNA SgrS，并初步验证伴侣分子Hfq蛋白和RNase E降解酶对小RNA SgrS定位的影响. 选取大肠杆菌模式菌MG1655（野生株）、sgrS敲除株（△sgrS）和过表达株（△sgrS-pBAD-SgrS），使用RNA印迹和smFISH方法验证SgrS的过表达. 应用smFISH方法分别在野生菌株、hfq敲除株（△hfq）和rne敲除株（△rne-710）中定位小RNA SgrS和ptsG mRNA，超分辨成像观察. 与野生株相比，△hfq和△rne-710中SgrS主要定位于近膜区域，ptsG mRNA定位于细菌胞浆中，并且这两种RNA拷贝数均极显著增加. 以上结果表明，分别敲除大肠杆菌hfq和rne-710基因导致SgrS和ptsG mRNA的表达量增加. smFISH方法和超分辨技术的结合应用为细菌RNA的直观定量和定位提供了高敏感性的检测方法，可用于基因调控的功能研究.
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超分辨显微技术结合smFISH方法在E. coli
本站小编 Free考研考试/2022-01-02
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