近期,中科院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室的潘李锋课题组在Nature Communications杂志发表了题为“Phosphorylation regulates the binding of autophagy receptors to FIP200 Claw domain for selective autophagy initiation”的研究论文(https://www.nature.com/articles/s41467-021-21874-1)。该团队通过综合利用液体核磁共振技术、快速蛋白液相色谱、分析型超速离心和荧光偏振等生化研究手段,首次发现自噬受体蛋白CCPG1(参与介导内质网选择性自噬过程)的FIR2基序的磷酸化修饰以及TBK1激酶介导的自噬受体蛋白Optineurin(参与介导蛋白聚集体、入侵病原体、受损线粒体的选择性自噬过程)的LIR基序区间的磷酸化修饰会调控和增强FIP200 Claw结构域与CCPG1 FIR2或Optineurin LIR的相互作用。随后,该团队通过X射线单晶衍射方法首次解析了FIP200 Claw结合磷酸化的CCPG1 FIR2 (p-CCPG1 FIR2) 和Optineurin LIR (p-Optineurin LIR)的高分辨复合物结构。与生化结果一致,相关的结构分析显示FIP200 Claw结构域以稳定的二聚体存在,并对称地结合两个磷酸化的LIR或FIR形成异源四聚体,并且p-CCPG1 FIR2与p-Optineurin LIR中的磷酸化修饰对增强它们与FIP200 Claw相互作用的机制是不同的。最后,基于解析的复合物结构和相关的生化研究,该团队首次系统定义了可与FIP200 Claw发生相互作用的FIR基序的序列模式,并且分析发现大量自噬受体蛋白的经典LIR基序区间都包含了FIR基序,可发挥识别FIP200的功能。同时,进一步的生化实验揭示了CCPG1 FIR2和Optineurin LIR都可以通过相同的氨基酸残基竞争结合FIP200 Claw和ATG8家族蛋白,表明自噬受体蛋白在识别自噬底物后应该先通过结合FIP200招募ULK复合物,然后原位介导自噬前体的产生,后续再通过结合ATG8家族蛋白来促进自噬前体的延伸和闭合过程。综上所述,该团队的研究工作首次揭示了一种普遍的、可受磷酸化调控的自噬受体蛋白结合FIP200 Claw结构域来招募自噬起始ULK复合物的新机制,对进一步理解自噬受体蛋白介导的选择性自噬过程具有重要的指导性意义。
潘李锋课题组的博士生周子璇为本文的第一作者。上述研究工作得到了科技部、国家自然科学基金委、上海市科委、中科院和生命有机化学国家重点实验室的资助。
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图 自噬受体蛋白CCPG1和Optineurin通过结合FIP200招募ULK复合物的分子机制