摘要： 【目的】本研究旨在对双委夜蛾Athetis dissimilis气味结合蛋白OBP6进行原核表达、抗体制备以及表达谱分析，便于今后对AdisOBP6功能展开研究。【方法】利用生物信息学软件分析AdisOBP6蛋白结构特征；利用通过原核表达获得的重组蛋白4次免疫新西兰大白兔，制备AdisOBP6抗体；采用荧光定量PCR和Western blot技术检测AdisOBP6在双委夜蛾雌雄成虫触角、不同时期精巢以及受精卵和未受精卵中的表达情况。【结果】同源建模预测显示，AdisOBP6具有6个保守半胱氨酸残基和7个α-螺旋结构，并
折叠成一个结合口袋。原核表达结果显示，在20℃下0.5 mmol/L IPTG诱导重组蛋白表达量最多、最稳定。4次免疫重复中，抗体效价分别超过1∶512 000, 1∶512 000, 1∶512 000和1∶64 000。Westernblot检测获得的抗体与AdisOBP6蛋白能够特异性结合。荧光定量PCR结果显示，AdisOBP6在双委夜蛾精巢中的表达量远高于在触角中的，在幼虫期精巢中AdisOBP6就已经开始表达，在蛹期精巢中表达量低于在幼虫期的, 成虫羽化后精巢中的表达量逐渐进入高峰，在未受精卵和受精卵中几乎不表达或表达量极低。Western blot分析发现，AdisOBP6蛋白也主要在精巢中表达，在雌雄成虫触角、受精卵和未受精卵中表达量很低。【结论】本研究实现了AdisOBP6的原核表达，成功地制备了抗体；并证实AdisOBP6在双委夜蛾精巢中大量表达，成虫羽化后表达量达到高峰，推测AdisOBP6可能参与了授精过程。本研究结果为今后进一步研究AdisOBP6的功能奠定了基础。
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双委夜蛾气味结合蛋白AdisOBP6的原核表达抗体制备及表达谱分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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