摘要： 【目的】非典型嗅觉受体(olfactory receptor co-receptor, Orco)与典型嗅觉受体共同形成离子通道，在昆虫嗅觉识别中具有至关重要的作用。本研究旨在克隆和表达二点委夜蛾Athetis lepigone Orco基因，明确其分子特性，为进一步研究该基因在二点委夜蛾中的功能奠定基础。【方法】将二点委夜蛾雌雄成虫触角转录组数据建立本地数据库，通过生物信息学分析获得二点委夜蛾Orco同源基因AlepOrco；利用RT-PCR方法克隆二点委夜蛾AlepOrco基因全长，并在pGEX-6P-1/BL21(DE3)系统中进行了该基因开放阅读框(ORF)的原核表达, 制备多克隆抗体，用Western blot检测抗体特异性；利用qPCR技术检测该基因在二点委夜蛾雌雄成虫不同组织(喙、触角、去除触角和喙的头、胸、腹、足和翅)中的表达谱。【结果】获得了二点委夜蛾AlepOrco的cDNA(GenBank登录号: MN583125)全长序列，开放阅读框长1 422 bp，编码473个氨基酸，序列中有7个跨膜结构区，预测等电点为8.59，分子量为53.40 kD。SDS-PAGE和Western blot分析结果表明AlepOrco能够在大肠杆菌Escherichia coli中高效表达。利用制备的多克隆抗体对二点委夜蛾AlepOrco进行Western blot检测，其能够特异识别成虫触角中AlepOrco蛋白。qPCR结果表明，AlepOrco在二点委夜蛾雌雄成虫不同组织间具有相似的表达模式，都是在触角中的相对表达量最大，在翅中的表达量最小。【结论】克隆并原核表达了二点委夜蛾非典型嗅觉受体基因AlepOrco，制备的多克隆抗体能够特异识别二点委夜蛾成虫触角中的AlepOrco。结果为深入了解二点委夜蛾AlepOrco基因的结构和功能奠定了基础。
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二点委夜蛾非典型嗅觉受体AlepOrco的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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