摘要： 【目的】本研究旨在初步明确家蚕微孢子虫Nosema bombycis海藻糖酶3(NbTre3)的功能，为家蚕Bombyx mori微粒子病的防治提供理论依据和线索。【方法】通过PCR扩增NbTre3，构建原核表达载体pET28a-NbTre3；经IPTG诱导在大肠杆菌Escherichia coli中表达重组蛋白NbTre3，Western blot检测目的蛋白；Ni柱亲和层析法对重组蛋白NbTre3进行纯化，用获得的NbTre3免疫新西兰兔制备多克隆抗体；利用间接免疫荧光技术对成熟家蚕微孢子虫中的NbTre3进行定位；qRT-PCR检测家蚕微孢子虫感染家蚕5龄起蚕后不同时间中肠中NbTre3的转录水平；通过分别注射siRNA-1, siRNA-2和siRNA-3进行RNAi，qRT-PCR检测RNAi后不同时间感染家蚕微孢子虫的家蚕5龄起蚕中肠中NbTre3和16S rRNA的转录水平。【结果】成功纯化并获得重组目的蛋白NbTre3，大小约为34 kD。免疫新西兰兔后，收集血清，纯化获得NbTre3多克隆抗体，经Western blot鉴定正确。间接免疫荧光结果显示NbTre3主要分布在成熟家蚕微孢子虫孢原质中。qRT-PCR结果表明，家蚕微孢子虫感染后6 h时家蚕5龄起蚕中肠中NbTre3的表达量最高；siRNA抑制NbTre3的表达后，家蚕微孢子虫16S rRNA的转录水平没有明显的变化。【结论】结果提示NbTre3可能在家蚕微孢子虫感染初期的发芽过程中发挥重要的作用。
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家蚕微孢子虫海藻糖酶3的表达、定位及功能
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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