摘要： 【目的】克隆小菜蛾Plutella xylostella NanosO基因PxnosO启动子，并验证其具有生殖腺特异性活性，以期应用于基因功能研究或转基因昆虫的构建,为小菜蛾等农业害虫的综合治理提供新的研究思路。【方法】根据小菜蛾基因组序列信息，利用PCR技术克隆NanosO的启动子并进行序列分析。构建PxnosO-EGFP表达质粒，利用脂质体细胞转染技术将PxnosO-EGFP和IE1-EGFP表达质粒转入到小菜蛾胚胎细胞系(Px-6)和草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda卵巢细胞系(Sf9)中，通过激光共聚焦荧光显微镜观察和qRT-PCR技术分别定性和定量分析EGFP基因的表达，验证小菜蛾NanosO启动子的活性。【结果】克隆获得小菜蛾PxnosO (Px004767)启动子区序列，长1 743 bp。对启动子序列进行分析，发现该序列不仅包含启动子共有核心元件TATA box以及上游启动子成分CAAT box和GC box等，还包含有数十个转录因子结合位点。利用细胞转染技术，在PxnosO启动子驱动下成功地在Px-6和Sf9细胞系中表达外源基因EGFP。【结论】克隆了小菜蛾NanosO基因PxnosO启动子，在细胞水平上验证其能驱动外源EGFP基因的表达，为分析PxnosO在小菜蛾不同发育时期的表达模式和PxnosO启动子在体内的功能验证奠定基础。
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小菜蛾NanosO基因启动子的克隆及功能验证
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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