摘要： 【目的】克隆并分析棉铃虫Helicoverpa armigera生物钟基因Double-time (Dbt)，明确该基因的昼夜表达模式，探讨其表达水平的影响因子，为研究夜蛾科昆虫复眼中生物钟基因的作用机制奠定基础，为理解外周组织中生物钟基因功能提供参考。【方法】采用RT-PCR和RACE技术从2日龄棉铃虫雌成虫复眼中克隆生物钟基因Dbt，并利用在线网站和软件进行生物信息学分析。采用qPCR技术检测棉铃虫雌、雄成虫不同组织(头、脑、复眼、触角、胸、腹、足和翅)中Dbt的表达水平；检测光周期14L∶10D和持续黑暗(DD)下雌、雄成虫头和复眼中Dbt的昼夜表达模式；在暗期用棉铃虫敏感波段光(UV、蓝光和绿光)照射2日龄成虫6 h，检测复眼中Dbt表达水平的变化；在暗期进行雌、雄成虫交配，检测交配结束及3 h后复眼中Dbt表达水平的变化。【结果】成功克隆到棉铃虫生物钟基因Dbt的cDNA序列，命名为HeDbt(GenBank登录号: KM233159)，开放阅读框长1 026 bp，编码314个氨基酸组成的多肽。HeDbt理论推测分子量为39.79 kD，等电点(pI)为9.55，不具有跨膜拓扑结构，包含典型的昆虫DBT蛋白保守区域，其与甜菜夜蛾Spodoptera exigua和柞蚕Antheraea pernyi DBT的同源性较高, 氨基酸序列一致性分别为99%和97%。qPCR结果表明，HeDbt在成虫各组织中均有表达，在头、脑和复眼中表达水平较低，在胸和腹中表达水平较高；在14L∶10D和DD下，头和复眼中HeDbt未呈现明显的昼夜表达节律。暗期光照和交配后，复眼中HeDbt的表达均显著下调，但雌、雄成虫间HeDbt表达水平整体相似。【结论】成功克隆得到棉铃虫生物钟基因HeDbt，其在棉铃虫成虫头和复眼中表达水平较低，且不具有昼夜规律性，但复眼中Dbt的表达受到光照和交配的影响。本研究为进一步探索夜蛾外周组织生物钟基因功能奠定了基础。
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棉铃虫生物钟基因HeDbt的克隆和表达模式分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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