摘要： 【目的】探索家蚕Bombyx mori miRNAs对化学感受蛋白基因表达的调控作用，以进一步研究 miRNAs及其靶基因在昆虫化学识别中的作用。【方法】利用生物信息学方法预测和筛选可能作用于家蚕化学感受蛋白CSPs基因家族成员的miRNAs；实时荧光定量PCR分析预测获得的候选miR-301和其作用的靶基因在家蚕成虫不同组织中的表达变化；构建miR-301预测靶基因3′-UTR的双荧光素酶报告载体，与合成的miR-301 mimics或阴性对照转染人胚肾细胞HEK293，通过双荧光素酶报告基因检测系统中荧光素酶活性变化检测miR-301对其靶基因表达的调控作用。【结果】生物信息学分析结果发现，家蚕化学感受蛋白基因csp9是miR-301的预测靶基因，二者的结合位点位于csp9的3′-UTR区。实时荧光定量PCR检测结果表明，miR-301在交配后家蚕雌雄成虫触角和雄成虫头部都显著上调表达，靶基因csp9在对应组织中表达则显著下调。二者共转染HEK293细胞后，双荧光素酶检测结果表明，miR-301可以通过与csp9 3′-UTR的互作，显著抑制上游荧光素酶报告基因的表达。【结论】家蚕化学感受蛋白基因csp9是miR-301的靶基因，miR-301通过与靶基因3′-UTR的结合，在翻译水平上抑制csp9的表达。
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家蚕miR-301对化学感受蛋白基因csp9表达的调控
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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