摘要： 目的 构建钙调蛋白结构域来源小分子多肽（EF-hand 4，a.a 113-148），建立一种简便、直观、快速检测EF-hand 4的电泳方法。方法 通过固相合成法构建EF-hand 4。采用分离胶为16.5% T的Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳法检测多肽，CS Analyzer 3.0软件对EF-hand 4多肽条带进行纯度分析，GST pull-down方法检测EF-hand 4的生物学活性。结果 Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示，在约4×10³处可见EF-hand 4清晰蛋白条带；CS Analyzer 3.0软件分析其纯度为100%；GST pull-down结果表明，EF-hand 4可以和Ca_V1.2钙通道结合，具有生物学活性。结论 Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳法可简便、直观、快速检测EF-hand 4，固相合成法得到的EF-hand 4具有与钙通道结合的生物学活性，本研究为CaM结构域来源EF-hand 4生物学功能的深入研究提供了材料基础。

钙调蛋白结构域来源小分子多肽的构建

张晨阳, 邵冬雪, 郑曦, 苏敬阳, 胡聪, 佟欣, 田兴, 古丽仙, 常心怡, 郝丽英

中国医科大学药学院药物毒理学教研室, 沈阳 110122

收稿日期:2020-08-17出版日期:2021-08-30发布日期:2021-07-29
通讯作者:郝丽英E-mail:lyhao@cmu.edu.cn
作者简介:张晨阳(1995-),女,硕士研究生.
基金资助:中国医科大学医学电生理学重点实验室开放基金（KeyME-2018-02）；中国医科大学青年骨干支持计划项目（QGZ2018086）；中国医科大学大学生创新训练项目（201910159125）


关键词: 钙调蛋白, 小分子多肽, 构建
Abstract: Objective To construct a short polypeptide (EF-hand 4,a.a 113-148) derived from calmodulin domains and to establish a convenient and efficient electrophoresis method for its detection. Methods EF-hand 4 was prepared using a solid-phase peptide synthesis and detected by Tricine-SDS-PAGE gel electrophoresis with 16.5% T separating gel. CS Analyzer 3.0 software was employed to analyze the purity of EF-hand 4. The biological activity of EF-hand 4 was tested using a GST pull-down assay. Results Tricine-SDS-PAGE gel electrophoresis showed a clear band of EF-hand 4 at around 4×10³； the purity of EF-hand 4 was 100%. EF-hand 4 bound to Ca_V1.2 channel and exerted biological activity. Conclusion The Tricine-SDS-PAGE gel electrophoresis detected EF-hand 4 simply,directly,and quickly. The EF-hand 4 peptide prepared by solid-phase synthesis possesses biological activity through binding to calcium channel receptors. The results provide a material basis for further studies of the biological function of EF-hand 4.
Key words: calmodulin, short polypeptide, construction
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