摘要： 【目的】明确甘薯蚁象Cylas formicarius气味结合蛋白(odorant binding protein, OBP) OBP8的基因表达谱及与配体化合物的结合特性。【方法】基于甘薯蚁象成虫转录组数据，利用RTPCR方法从甘薯蚁象成虫触角中克隆了气味结合蛋白OBP8基因，并进行生物信息学分析；采用qPCR方法测定该基因在甘薯蚁象成虫触角、口器、翅和跗节中的表达谱；构建原核表达载体，进行诱导表达及蛋白纯化。利用荧光竞争结合实验测定纯化的重组蛋白与16种配体化合物(1种性信息素和15种植物挥发物)的结合特性。【结果】获得甘薯蚁象气味结合蛋白基因CforOBP8(GenBank登录号: MH549528)的完整编码序列，其开放阅读框长414 bp，编码138个氨基酸，预测分子量为15.56 kD，等电点为4.71，N末端具有21个氨基酸组成的信号肽序列，蛋白序列具有4个保守的半胱氨酸，CforOBP8属于MinusC OBPs亚家族。荧光定量PCR结果表明，CforOBP8在甘薯蚁象成虫触角中特异性表达，在其他组织中微量表达。SDSPAGE结果显示融合蛋白成功表达。CforOBP8与配体化合物的结合力测试表明，CforOBP8与性信息素(E)2丁烯酸顺(Z)3十二烯基酯结合能力最强，解离常数Ki为4.13 μmol/L；其次与5种植物挥发物也有一定的结合能力，依次为乙酸顺3己烯酯(Ki=7.54 μmol/L)、柠檬烯(Ki=15.23 μmol/L)、橙花醇(Ki=16.31 μmol/L)、壬醛(Ki=28.71 μmol/L)和苯乙醛(Ki=29.54 μmol/L)。【结论】CforOBP8可能是甘薯蚁象性信息素结合蛋白，并且在感受性信息素和寄主植物挥发物的过程中都发挥作用。
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甘薯蚁象气味结合蛋白CforOBP8的基因表达谱及配体结合特性分析
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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