摘要： 【目的】对中华按蚊Anopheles sinensis谷胱甘肽-S-转移酶E6（AsGSTE6）进行初步晶体学研究，为深入研究其空间结构奠定基础。【方法】利用生物信息学软件，首先对中华按蚊AsGSTE6进行生物信息学预测和分析；然后进行分子克隆，构建重组子pET28a-AsGSTe6；利用大肠杆菌Escherichia coli原核表达系统进行诱导表达；采用Ni-NTA金属螯合层析和葡聚糖凝胶层析的方法对重组蛋白进行纯化；通过葡聚糖凝胶层析和化学交联的结果分析蛋白的聚合状态；运用坐滴蒸气扩散法对重组蛋白进行结晶筛选。【结果】生物信息学分析结果表明，AsGSTE6分子量为25.28 kD，无信号肽和跨膜区，是亲水性蛋白；三级结构预测结果显示，AsGSTE6主要由一个小的βαβαββα折叠模式的N端结构域和一个大的全螺旋的C端结构域组成。多重序列比对结果表明，在不同昆虫中GSTE6具有高度保守性。分子克隆得到中华按蚊AsGSTE6的编码基因AsGSTe6序列，大小为672 bp。在大肠杆菌中AsGSTE6主要在上清中有大量表达，为可溶性表达；通过镍柱亲和层析和凝胶过滤层析纯化出了高纯度且稳定的AsGSTE6重组蛋白；凝胶过滤层析结合化学交联的结果证实体外纯化的融合蛋白AsGSTE6主要呈二聚体状态；通过晶体筛选获得了AsGSTE6的晶体。【结论】运用结晶学的方法获得了AsGSTE6的晶体，这为后续解析AsGSTE6的三维结构奠定了基础。


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