红耳龟（Trachemys scripta elegans）是世界上最危险的100种入侵物种之一，该种对环境适应能力极强。目前尚未见有关红耳龟细胞体外培养的研究报道，本研究旨在探索和建立快速稳定的红耳龟胚胎成纤维细胞分离培养体系，为进一步从细胞层面研究红耳龟对极端环境的耐受机制提供材料和方法支撑。本研究取发育至13或14期的红耳龟胚胎，采用酶消化法和差速贴壁法获得红耳龟胚胎成纤维细胞，在体外进行原代培养和传代培养；采用噻唑蓝（MTT）比色法分别绘制红耳龟胚胎成纤维细胞在不同温度、接种浓度和血清浓度下的生长曲线；采用反转录PCR对培养的红耳龟胚胎成纤维细胞进行分子水平的鉴定；采用脂质体转染法对红耳龟胚胎成纤维细胞进行基因转染。结果表明：1）红耳龟胚胎成纤维细胞呈典型的梭形、不规则星形或多边形，达到一定密度时呈多层生长，排列紊乱，随着传代次数的增加，细胞体积增大，梭形细胞有拉长趋势，细胞可至少传至15代；2）红耳龟胚胎成纤维细胞在30 ~ 34 ℃条件下的生长状态良好，其生长速率随着温度的升高而增高；其接种密度不宜低于1.25 × 104 个/cm2；其最佳血清浓度为10%；3）反转录PCR检测到成纤维细胞标记基因vim和acta2在红耳龟胚胎成纤维细胞中表达；4）脂质体转染法可以介导外源绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白进入到红耳龟胚胎成纤维细胞内表达，转染效率约为30%。本研究成功地在体外分离培养了红耳龟胚胎成纤维细胞，该细胞系可应用于外源基因转染和表达。
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红耳龟胚胎成纤维细胞体外培养
本站小编 Free考研考试/2022-01-03
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