人血管活性肠肽受体1（VIP1R）是B类GPCR成员，广泛分布于中枢神经系统的大脑皮质和下丘脑。在生物体内，VIP1R在心脏节律、学习、记忆、焦虑以及机体对应激和脑损伤应答等方面发挥着重要的调节作用。开发靶向VIP1R的多肽和小分子药物对睡眠紊乱、中风、神经退行性疾病，以及和老龄化相关的记忆损伤等疾病的治疗具有积极作用。
VIP1R受体与下游Gs效应蛋白组装效率相对较低，导致复合物稳定性差和构象不均一等问题，为该受体复合物的结构解析带来了诸多技术难题。传统NanoBiT方法基于蛋白质构象互补的原理，利用大片段（LgBiT）和小片段（SmBiT）互补结合为完整且具有活性的荧光素酶，从而实现蛋白质间互作的检测。受到该系统的启发，研究团队开创性地利用与LgBiT具有更强亲和力的SmBiT突变体HiBiT，通过分别将LgBiT和HiBiT与VIP1R和Gs蛋白连接，增加局部的复合物组分浓度，提高了复合物的组装效率和样品稳定性，最终获得了稳定的VIP1R复合物用于结构研究（图1a）。
利用单颗粒冷冻电镜重构技术，研究人员首次解析了VIP1R结合PACAP27和Gs蛋白复合物的高分辨率结构（图1b）。通过对比其他B类GPCR成员的多肽结合口袋，研究发现VIP1R具有相对较小的胞内多肽配体结合口袋，并进一步明确了PACAP27多肽结合VIP1R的结构细节，从结构和功能层面确证了多肽氨基末端残基对VIP1R结合和激活的关键作用（图1c）；通过比对VIP1R的同亚家族受体垂体腺苷酸环化酶激活多肽受体I（PAC1R）与PACAP38复合物的结构，研究人员对PACAP配体识别该亚家族受体的特性进行了对比分析。相对PAC1R，内源性配体VIP对VIP1R显示出更高的选择性，研究也对该VIP的受体选择性提供了潜在的结构学解释；最后，研究人员阐明了VIP1R受体激活和G蛋白偶联的机制，以及该机制相较其他B类GPCR成员的异同等。该项研究对理解多肽受体识别并激活VIP1R的分子机制奠定了结构基础，拓展了对整个B类GPCR家族配体识别和信号转导机理的认识，也为以VIP1R为靶点的多肽和小分子药物开发提供了结构模型。
中国科学院大学博士生（培养单位：上海药物所）段佳、浙江大学基础医学院博士生沈丹丹、美国温安洛研究所Edward Zhou和浙江大学基础医学院毕鹏是本论文的共同第一作者；国科大硕士生导师蒋轶研究员、博士生导师徐华强研究员和浙江大学张岩研究员为本论文的共同通讯作者。该研究工作得到了国家自然科学基金委、科技部、上海市科委和中科院先导专项等项目的支持。
论文链接：https://www.nature.com/articles/s41467-020-17933-8
图1：人血管活性肠肽受体1的冷冻电镜结构解析。a, NanoBiT策略；b, PACAP27-VIP1R-Gs复合物的冷冻电镜密度图；c, PACAP27与VIP1R受体结合细节示意图
责任编辑：余玉婷
